目的 研究细胞程序性死亡配体-1（programmed cell death protein ligand-1,PD-L1）功能抑制调控免疫活化影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发生发展的机制。方法 将24只ApoE-/-小鼠随机分为正常组，高脂组和高脂+抗PD-L1单抗组，通过高胆固...
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目的 研究细胞程序性死亡配体-1（programmed cell death protein ligand-1,PD-L1）功能抑制调控免疫活化影响ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化发生发展的机制。方法 将24只ApoE-/-小鼠随机分为正常组，高脂组和高脂+抗PD-L1单抗组，通过高胆固醇饲料喂养建立动脉粥样硬化（atherosclerosis）模型。实验动物饲养70 d后，分离各组实验动物血管（主动脉根部至腹主动脉）及肝脏组织，进行油红O染色；HE染色检测肝组织病理改变；ELISA检测血清中总胆固醇（CHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-c）、低密度脂蛋白（LDL-c）和炎症因子（IFN-γ、TNF-α、IL-1β）含量。流式细胞计数检测肝脏淋巴细胞（CD4+、CD8+、CD4+IFN-γ+和CD8+IFN-γ+T细胞）。RT-PCR检测肝脏组织IFN-γ、TNF-α、IL-1β、CD4和CD8表达。结果 与高脂组比较，给予抗PD-L1单抗后促血管壁及肝脏脂质累积并上调血清及肝组织CHO、TG、LDL-c和HDL-c含量。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促血清和肝组织谷丙转氨酶（GPT）和谷草转氨酶（GOT）含量升高，但是对碱性磷酸酶（AKP）含量没有影响。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促血清和肝脏组织IFN-γ、TNF-α和IL-1β含量升高。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗抑制CD4表达及促CD8表达。高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗促肝脏CD8+T和CD8+IFN-γ+T细胞活化，但是对CD4+IFN-γ+T细胞活化没有影响。结论 高脂饲养条件下给予抗PD-L1单抗通过活化肝脏CD8+IFN-γ+T细胞损伤肝脏功能加重动脉粥样硬化。
目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线...
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目的研究线粒体转录因子A(TFAM)对宫颈癌HeLa细胞及骨肉瘤U2OS细胞的线粒体功能、自噬、增殖、侵袭、迁移的影响。方法HeLa、U2OS细胞转染TFAM小干扰片段(si-TFAM)下调TFAM表达,Mito-Tracker Red CMXRos染色结合激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位(MMP)、MitoSOX^(TM)Red标记法检测线粒体活性氧(mtROS)水平、实时定量PCR检测线粒体DNA(mtDNA)的表达,免疫荧光细胞化学染色检测自噬体数量的变化。Western blot法检测TFAM、微管相关蛋白1轻链3A/B(LC3A/B)、自噬相关基因2A(ATG2A)、ATG2B、ATG9A、锌指转录因子Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)和MMP9的表达。CCK-8法、平板集落形成实验检测细胞增殖,Transwell^(TM)实验、划痕愈合实验检测细胞侵袭、迁移的变化。结果下调TFAM表达导致HeLa及U2OS细胞MMP减少,mtDNA拷贝数减少,mtROS产生量增加。LC3A/B蛋白含量较对照组明显下降,胞质内自噬体数量明显减少,自噬早期阶段蛋白ATG2B、ATG9A表达量明显减少。HeLa及U2OS细胞Snail、MMP2和MMP9蛋白表达均减少。干扰TFAM表达,抑制HeLa及U2OS细胞的增殖、侵袭、迁移能力。结论下调TFAM表达抑制线粒体功能,延缓自噬进程,降低宫颈癌细胞及骨肉瘤细胞的增殖、侵袭、迁移能力。
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