目的 探究癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(acrosin binding protein,ACRBP)在肝癌中的表达及其与免疫浸润的相关性。方法 首先利用UALCAN(university of alabama at birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)和HPA(human protein atl...
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目的 探究癌-睾丸抗原顶体素结合蛋白(acrosin binding protein,ACRBP)在肝癌中的表达及其与免疫浸润的相关性。方法 首先利用UALCAN(university of alabama at birmingham cancer data analysis portal,UALCAN)和HPA(human protein atlas,HPA)数据库分析肝癌和正常肝组织中ACRBP的mRNA和蛋白的表达情况。基于TCGA数据,采用TIMER(tumor immune estimation resource,TIMER)数据库、CIBERSOFT(cell-type identification by estimating relative subsets of rna transcripts,CIBERSORT)工具和TISIDB(an integrated repository portal for tumor-immune system interactions,TISIDB)数据库分析肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润及免疫调节基因的相关性。此外,还分离人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC),与ACRBP表达下调的肝癌细胞共培养,通过ELISA(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫分子的分泌,流式细胞术检测PBMC的凋亡情况。结果 生物信息学分析显示,在肝癌组织中,ACRBP mRNA及蛋白表达均显著高于正常肝组织;ACRBP的mRNA表达与调节性T细胞(Treg细胞)浸润、免疫抑制分子和趋化因子等多种免疫调节基因呈正相关;与正常肝组织比较,ACRBP高表达的肝癌组织中浆细胞,γδT细胞,自然杀伤细胞(NK细胞)和M2型巨噬细胞浸润比例明显减少。在体外试验中,下调肝癌细胞中ACRBP的表达,发现PBMC分泌α肿瘤坏死因子、γ干扰素和白细胞介素2增加,PBMC的凋亡率有所增多。结论 肝癌中ACRBP的表达与免疫细胞浸润相关,ACRBP参与免疫细胞调节而影响肿瘤微环境,为将来开发以ACRBP为靶标的免疫治疗提供了理论基础。
目的研究吴茱萸碱(evodiamine,EVO)调控叉头盒蛋白M1(fork-head box protein M1,FOXM1)对结直肠癌耐药细胞HCT8/5-FU增殖和凋亡的影响。方法采用CCK-8法与EdU实验技术,评估EVO对细胞增殖活性的作用效果;通过克隆形成实验,探讨EVO对细胞...
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目的研究吴茱萸碱(evodiamine,EVO)调控叉头盒蛋白M1(fork-head box protein M1,FOXM1)对结直肠癌耐药细胞HCT8/5-FU增殖和凋亡的影响。方法采用CCK-8法与EdU实验技术,评估EVO对细胞增殖活性的作用效果;通过克隆形成实验,探讨EVO对细胞克隆形成能力的影响;采用流式细胞术对凋亡细胞比例进行量化;蛋白质免疫印迹分析技术检测Bcl-2、Bax、FOXM1、β-catenin、c-MYC、CyclinD1蛋白水平的变化;分子对接探究EVO与FOXM1的相互作用关系;裸鼠移植瘤模型验证EVO在体内对HCT8/5-FU细胞的影响。结果CCK-8实验显示EVO抑制HCT8/5-FU细胞增殖且呈时间和浓度依赖性;EdU实验发现EVO处理组新增殖细胞明显减少;克隆形成实验结果显示EVO明显抑制HCT8/5-FU细胞的克隆形成能力;流式细胞计数发现EVO组细胞的凋亡率明显增高;Western blot显示FOXM1、β-catenin在HCT8/5-FU细胞中明显高表达,EVO能下调细胞中FOXM1、β-catenin、c-MYC、CyclinD1、Bcl-2表达,上调Bax表达;分子对接显示EVO与FOXM1之间具有较强的互作能力;体内实验显示EVO能明显抑制HCT8/5-FU皮下移植瘤的生长且能调控相关蛋白的表达;HE染色发现EVO组的瘤体细胞核固缩和碎裂明显。结论EVO可能通过下调FOXM1蛋白表达抑制Wnt通路激活,从而抑制HCT8/5-FU细胞增殖诱导其凋亡。
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