检索结果-内蒙古大学图书馆

解剖学报 2009年第6期40卷 943-948页

作者：徐燕宁关娜单智焱申景岭金连弘雷蕾哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

目的将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合,构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs),获得小概率的同源重组事件,进而直接得到所要的突变品系。方法通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒转入ESCs,用G418筛选获得EGFP-ESC... 详细信息

目的将四倍体胚胎补偿技术与转基因相结合,构建基因打靶载体转化的胚胎干细胞(ESCs),获得小概率的同源重组事件,进而直接得到所要的突变品系。方法通过电穿孔的方法将增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达质粒转入ESCs,用G418筛选获得EGFP-ESCs。另外,通过电融合获得四倍体囊胚细胞,显微注射法将19～21个EGFP-ESCs注入每个四倍体囊胚腔,分别移植到假孕2.5d雌鼠子宫或假孕0.5d的输卵管内。结果获得稳定表达的EGFP-ESCs,染色体数目正常(2n=40条);四倍体细胞融合率为95.07%,囊胚发育率为95%;共获得410个重构囊胚;移植后未得到出生小鼠,但共观察到了151个着床位点,子宫移植的着床率为29.41%,输卵管移植的着床率为64.37%,获得的胚胎中EGFP蛋白有散在的表达。结论稳定表达的EGFP-ESCs参与到了转基因胎鼠的发育中;本实验中输卵管移植的着床率高于子宫移植的着床率。

关键词：胚胎干细胞转基因四倍体胚胎补偿技术小鼠

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胚胎干细胞R1诱导成胰岛素分泌细胞团的研究

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解剖学报 2007年第5期38卷 542-545页

作者：曹博夏平申景岭单智焱雷蕾金连弘哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150086

目的建立体外培养和扩增胚胎干细胞R1(ES-R1)的最佳条件;利用多种生长因子,优化培养条件,体外定向诱导ES-R1分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。方法以丝裂霉索-C处理的MEF为饲养层,培养液中加白血病抑制因子(LIF),ES-R1维持未分化状态并扩增... 详细信息

目的建立体外培养和扩增胚胎干细胞R1(ES-R1)的最佳条件;利用多种生长因子,优化培养条件,体外定向诱导ES-R1分化为胰岛素分泌细胞(IPCs)。方法以丝裂霉索-C处理的MEF为饲养层,培养液中加白血病抑制因子(LIF),ES-R1维持未分化状态并扩增,进行碱性磷酸酶染色。胚胎干细胞(ESCs)悬浮培养制成拟胚体(EBs),对培养至第4d的EBs开始定向诱导,依次加入无血清的ITS培养液,胰岛前体细胞增殖培养液和胰岛分化培养液,每种培养液内各培养6d,获得形态功能较成熟的IPCs。采用DTZ染色、免疫荧光染色、胰岛素刺激实验等方法对IPCs进行检测。结果ESCs在饲养层细胞上呈克隆状生长,经碱性磷酸酶染色为阳性;EBs经3种诱导液诱导成三维立体的IPCs,IPCs被DTZ染成猩红色,胰岛素和胰高血糖素阳性表达,胰岛素刺激实验阳性。结论ES-R1在体外培养时,用MEF做饲养层,培养液中添加一定浓度的LlF,可以最好地保持未分化状态并大量增殖。用分阶段添加不同生长因子的方法诱导ES-R1定向分化生成的IPCs在形态和功能上具有胰岛的特性。

关键词：胚胎干细胞胰岛素分泌细胞免疫荧光染色小鼠

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父源基因组重编程中组蛋白变体的作用

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解剖学报 2019年第1期50卷 132-136页

作者：王楠黄星卫程香荣姜琦庞楠雷蕾哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

卵母细胞具有重编程精子基因组以确保胚胎正常发育的能力。精子入卵后,父源基因组会经历组蛋白替换鱼精蛋白,全基因组去甲基化等过程,从而启动胚胎发育。组蛋白H3的变体H3.3可以替换核小体中的典型组蛋白H3.1和H3.2,从而修饰染色质结构... 详细信息

卵母细胞具有重编程精子基因组以确保胚胎正常发育的能力。精子入卵后,父源基因组会经历组蛋白替换鱼精蛋白,全基因组去甲基化等过程,从而启动胚胎发育。组蛋白H3的变体H3.3可以替换核小体中的典型组蛋白H3.1和H3.2,从而修饰染色质结构和影响基因表达。在早期胚胎发育过程中H3.3的缺失将导致染色体的过度凝集和错误分离。我们综述了组蛋白变体H3.3及其分子伴侣在精子发生、受精和早期胚胎发育中的作用,特别是H3.3对父源基因组重编程的重要性,这对理解受精后全能性合子的形成及着床前发育具有重要意义。

关键词：受精组蛋白重编程鱼精蛋白

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巨噬细胞的极化及功能调控

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解剖学报 2017年第1期48卷 106-110页

作者：宮甜甜黄少刚张玥李佳雷蕾单智焱哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

巨噬细胞在体内分布极广,具有高度可塑性,并在机体的发育及内环境的平衡中起到重要作用。应激条件下,巨噬细胞发生极化,极化后的巨噬细胞亚型可以细致调节及回应各种不同的刺激,对炎症反应或疾病的发展及组织器官的修复程度起着关键性... 详细信息

巨噬细胞在体内分布极广,具有高度可塑性,并在机体的发育及内环境的平衡中起到重要作用。应激条件下,巨噬细胞发生极化,极化后的巨噬细胞亚型可以细致调节及回应各种不同的刺激,对炎症反应或疾病的发展及组织器官的修复程度起着关键性的作用,具有重要的临床应用价值。我们在文中概述了巨噬细胞的极化分类,作用机制及不同环境下巨噬细胞的功能转换,为巨噬细胞极化研究提供理论基础。

关键词：巨噬细胞极化调控

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诱导多能干细胞在孤独症谱系障碍相关的神经发育性疾病中的研究进展

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中华精神科杂志 2019年第3期52卷 219-223页

作者：胡兴琳刘惠吴嫣爽乔钰单智焱雷蕾哈尔滨医科大学组织胚胎学教研室 150081

孤独症谱系障碍(ASD)是一种复杂的遗传性疾病,以重复刻板行为、社交互动障碍和语言受损为主要特征,常伴有大脑发育障碍。在涉及ASD的数百个基因中,某些与突触功能、脑神经网络连接异常、核小体包装等相关的基因分子机制已被发现。诱导... 详细信息

孤独症谱系障碍(ASD)是一种复杂的遗传性疾病,以重复刻板行为、社交互动障碍和语言受损为主要特征,常伴有大脑发育障碍。在涉及ASD的数百个基因中,某些与突触功能、脑神经网络连接异常、核小体包装等相关的基因分子机制已被发现。诱导多能干细胞(iPSCs)技术提供了一种用以精确模拟遗传神经发育障碍的工具。通过iPSCs技术可以获得患者特异性细胞系,并将其分化成特定的细胞亚型,如神经前体细胞、神经元,该技术推动了关于ASD等神经发育障碍疾病的病理研究和治疗靶点的验证。本文中综述了iPSCs诱导分化的神经元在ASD相关神经发育障碍疾病中应用的研究进展,并提出iPSCs在诱导产生神经元方面的不足及对未来研究前景的展望,如常间回文重复序列丛集/常间回文重复序列丛集关联蛋白(CRISPR/Cas)技术与iPSCs技术结合寻找胚胎时期疾病发生靶点,以期实现疾病的早期干预治疗。

关键词：孤独性障碍多能干细胞神经元

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胎鼠表皮干细胞的体外分离培养及rAAV_2/eGFP转染的研究

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解剖学报 2007年第5期38卷 610-613页

作者：张喜梅郭筠秋金连弘哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150086

目的对表皮干细胞(ESCs)进行分离培养和鉴定,利用携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV)转染表皮干细胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的转染效率。方法1.获取胎鼠表皮单细胞悬液。2.利用层黏连蛋白(laminin)和Ⅳ型胶原(Collagen... 详细信息

目的对表皮干细胞(ESCs)进行分离培养和鉴定,利用携带绿色荧光蛋白(eGFP)基因的重组腺相关病毒(rAAV)转染表皮干细胞,探索不同滴度rAAV2/eGFP的转染效率。方法1.获取胎鼠表皮单细胞悬液。2.利用层黏连蛋白(laminin)和Ⅳ型胶原(CollagenⅣ)筛选ESCs,在体外进行培养和鉴定。3.将ESCs按5×104个/孔接种入24孔培养板中,按照不同的病毒基因数与转染细胞数之比(MOI)加入所需rAAV2/eGFP病毒,计数绿色荧光细胞数目,并计算转染效率。结果***对Laminin和CollagenⅣ的吸附性很好,克隆形成率较高。2.对ESCs进行β1整合素(Integrinβ1)单抗、角蛋白19(Keration 19,K19)单抗的免疫细胞化学染色,均呈阳性表达。3.利用rAAV/eGFP病毒体外转染ESCs,可稳定表达eGFP。结论用Laminin和CollagenⅣ快速黏附法可从胎鼠皮肤分离和富集ESCs。

关键词：皮肤干细胞免疫细胞化学基因转染大鼠

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血液细胞重编程为诱导性多能干细胞的研究进展

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解剖学报 2015年第6期46卷 852-856页

作者：张玥武玢宮甜甜雷蕾单智焱哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

诱导性多能干细胞(i PSCs)技术能够将已分化的体细胞反转为多能细胞,因其不存在伦理、排斥等问题,在再生医学领域具有广阔的应用前景。尽管已经建立了来源于多种体细胞的诱导性多能干细胞,但是能实际应用于临床、取材便利、诱导安全的... 详细信息

诱导性多能干细胞(i PSCs)技术能够将已分化的体细胞反转为多能细胞,因其不存在伦理、排斥等问题,在再生医学领域具有广阔的应用前景。尽管已经建立了来源于多种体细胞的诱导性多能干细胞,但是能实际应用于临床、取材便利、诱导安全的供体来源仍然具有局限性。我们从血液细胞作为供体细胞进行重编程的特点、优势及应用等方面进行了综述。

关键词：血液细胞诱导性多能干细胞重编程应用

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绿色荧光蛋白基因转染小鼠胚胎干细胞及向神经细胞的分化

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中国地方病学杂志 2008年第4期27卷 397-400页

作者：单智焱申景岭雷蕾徐燕宁金连弘哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室 150081

目的建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的小鼠胚胎干细胞（ESC），并诱导其向神经细胞分化，为临床移植治疗神经系统疾病提供方便追踪观察的神经细胞。方法分别用脂质体、电穿孔转染法转染小鼠胚胎干细胞系R1，检测48h转染效率；经G... 详细信息

目的建立能够稳定表达绿色荧光蛋白（GFP）的小鼠胚胎干细胞（ESC），并诱导其向神经细胞分化，为临床移植治疗神经系统疾病提供方便追踪观察的神经细胞。方法分别用脂质体、电穿孔转染法转染小鼠胚胎干细胞系R1，检测48h转染效率；经G418筛选后，得到稳定高效表达GFP的ESC克隆，通过碱性磷酸酶（AKP）染色检测ESC的生物学特性；利用单层分化法诱导转染GFP的胚胎干细胞向神经细胞分化，通过免疫荧光检测神经细胞特异标记Tuj1。结果转染48h的GFP阳性细胞转染率脂质体组为65％，电穿孔组为79％，两组比较差异无统计学意义（Х^2=3.14，P〉0．05）。转染GFP的胚胎干细胞AKP染色阳性，并可诱导分化为Tuj1阳性的神经细胞。结论建立稳定表达GFP基因的胚胎干细胞克隆，获得的转染GFP的胚胎干细胞能够分化为神经细胞。

关键词：胚胎干细胞绿色荧光蛋白类电穿孔细胞分化

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人肝癌HepG2细胞小鼠荷瘤模型的建立及免疫耐受的探讨

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解剖学报 2015年第4期46卷 509-513页

作者：刘春佳张星宇单智焱吴嫣爽雷蕾哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

目的建立正常免疫背景小鼠的人肝癌荷瘤模型,探讨人肿瘤细胞与胎鼠异种嵌合产生的免疫耐受。方法用绿色荧光蛋白(GFP)标记人肝癌细胞系Hep G2,将GFP-Hep G2细胞注射入孕16.5d的胎鼠腹腔内,观察新生小鼠腹腔内荷瘤情况及酶联免疫吸附法(E... 详细信息

目的建立正常免疫背景小鼠的人肝癌荷瘤模型,探讨人肿瘤细胞与胎鼠异种嵌合产生的免疫耐受。方法用绿色荧光蛋白(GFP)标记人肝癌细胞系Hep G2,将GFP-Hep G2细胞注射入孕16.5d的胎鼠腹腔内,观察新生小鼠腹腔内荷瘤情况及酶联免疫吸附法(ELISA)检测荷瘤小鼠血清人甲胎蛋白(AFP)含量;小鼠成年后进行皮下成瘤实验及流式细胞术检测小鼠脾脏T淋巴细胞亚群变化。结果观察到经胎鼠腹腔注射的人GFPHep G2细胞在新生鼠体内种植并生长于肝脏,分泌人甲胎蛋白;皮下荷瘤实验观察到经胎体注射GFP-Hep G2细胞诱导免疫耐受后,部分小鼠成年后仍可支持皮下Hep G2细胞荷瘤,流式细胞术检测表明,诱导耐受后的小鼠免疫系统仍对人肝癌细胞保留有较弱的攻击。结论通过胎鼠腹腔注射人GFP-Hep G2细胞可以建立人肝癌细胞小鼠荷瘤模型,部分荷瘤后的小鼠具有免疫耐受的能力。

关键词：肝癌荷瘤免疫耐受流式细胞术小鼠

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猪来源异种细胞移植临床前研究进展

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中国修复重建外科杂志 2014年第12期28卷 1536-1539页

作者：周晓囡吴嫣爽雷蕾哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨150081

目的总结猪来源异种细胞移植临床前研究的进展。方法广泛查阅近年来与猪来源异种细胞移植临床前研究相关的文献,对研究进展进行总结分析。结果随着新型免疫抑制剂的应用及转基因猪的产生,猪来源的神经细胞、胰岛细胞、肝细胞和各种类型... 详细信息

目的总结猪来源异种细胞移植临床前研究的进展。方法广泛查阅近年来与猪来源异种细胞移植临床前研究相关的文献,对研究进展进行总结分析。结果随着新型免疫抑制剂的应用及转基因猪的产生,猪来源的神经细胞、胰岛细胞、肝细胞和各种类型干细胞的异种移植研究取得了较大进展。猪来源异种细胞在受体体内存活时间大大延长,但距临床应用还有较长距离。结论猪来源充足,在细胞数量上能够得到充分保障,还具有可重复性。但如何更有效避免排斥反应、延长移植细胞在宿主体内存活时间及避免种间病毒传播仍是猪来源异种细胞移植研究重点。

关键词：异种细胞移植免疫排斥反应猪来源细胞

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