检索结果-内蒙古大学图书馆

乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 347-352页

作者：徐维祯谷鸿喜郝美丽马延秀李皓乐汪颖楠哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室 311121 加州大学圣地亚哥分校圣地亚哥92092

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于10^4copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。

关键词：乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系

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circ_722 Alu元件多态性对心血管危险因素的影响

circ_722 Alu元件多态性对心血管危险因素的影响

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第十五次全国动脉硬化性疾病学术会议

作者：李琪琪邱兰兰彭均华潘尚领吴华裕广西医科大学病理生理学教研室南宁 530021 广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室南宁 530021

背景：Alu 元件是哺乳动物DNA 中特有的短散类元件，在环状RNA 的形成中起着关键性作用。本课题组前期研究发现，环状RNA circ-0000722(circ_722)在一般衰老群体血清中的表达明显高于长寿群体，并与多项心血管疾病危险因素高度相关，提... 详细信息

背景：Alu 元件是哺乳动物DNA 中特有的短散类元件，在环状RNA 的形成中起着关键性作用。本课题组前期研究发现，环状RNA circ-0000722(circ_722)在一般衰老群体血清中的表达明显高于长寿群体，并与多项心血管疾病危险因素高度相关，提示circ_722 在衰老相关性疾病中的作用及对寿限的影响。

关键词： circRNA 衰老衰老相关性疾病功能性研究机制

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LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿外周血单个核细胞基因表达谱的RNA-Seq分析

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广西医科大学学报 2019年第5期36卷 803-808页

作者：朱兰玉覃霞方玲舒伟林有坤广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

目的:分析LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿外周血单个核细胞基因表达谱的转录组测序(RNA-seq)结果。方法:将3例LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿作为病例组,1例正常儿童为对照组,应用RNA-seq技术对两组外周血单个核细胞进行全转录组测... 详细信息

目的:分析LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿外周血单个核细胞基因表达谱的转录组测序(RNA-seq)结果。方法:将3例LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿作为病例组,1例正常儿童为对照组,应用RNA-seq技术对两组外周血单个核细胞进行全转录组测序,分析差异表达基因,并对这些差异基因进行GO功能和Pathway显著性富集分析。结果:病例组与对照组差异表达基因共有135个,其中下调91个,上调44个。差异基因功能涉及DNA复制、能量代谢、信号转导、炎症等方面,其中MCM、GINS2、CDC45与DNA复制有关;IL-8、FOS、CXCR2等与炎症有关;TOP2A、ABCG1、KIF4A、KIF2C、KIF20A、KIF14、KIF11、KIF18B、KIFC1、KIF15等与细胞能量代谢有关;BUB1、AURKB、BUB1B、PKMYT1、MELK与蛋白激酶活性有关。GO功能显著性富集分析结果显示:差异基因的功能主要包括生物学行为调控、细胞组分形成及分子功能,集中表现在生物学过程部分行为的调控。Pathway显著性富集分析10条具有显著性差异的通路,其中细胞周期及细胞衰老通路明显富集。结论:调控细胞周期的相关基因的表达量改变可能参与LMNA基因R527C纯合突变早老症患儿疾病的发生和发展。

关键词：儿童早老症 RNA-Seq R527C LMNA

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长寿群体血清β-珠蛋白基因表达水平与血糖、血脂及肾功能代谢指标的关系

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广西医科大学学报 2019年第12期36卷 1919-1922页

作者：李琪琪邱兰兰黄玲陈宁园韦力嘉吴华裕彭均华潘尚领广西医科大学基础医学院病理生理学教研室南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

目的:探讨广西红水河流域长寿群体血清β-珠蛋白基因(HBB)mRNA表达水平与血糖、血脂及肾功能代谢指标的关系,以了解其在机体衰老中的作用。方法:选取广西红水河流域居民303例,分为长寿组(年龄90~102岁,n=107)、老年组(年龄65~84岁,n=68... 详细信息

目的:探讨广西红水河流域长寿群体血清β-珠蛋白基因(HBB)mRNA表达水平与血糖、血脂及肾功能代谢指标的关系,以了解其在机体衰老中的作用。方法:选取广西红水河流域居民303例,分为长寿组(年龄90~102岁,n=107)、老年组(年龄65~84岁,n=68)和青壮年组(年龄20~64岁,n=128)。检测胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、肌酐(Cr)、肾功能等指标,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法测定各组血清HBB mRNA的表达情况,Spearman相关分析法分析HBB mRNA表达水平与血糖、血脂及肾功能代谢指标的关系。结果:与老年组比较,长寿组血清同型半胱氨酸(Hcy)、免疫球蛋白G(IgG)、尿素氮(BUN)、Cr水平明显升高,空腹血糖(FBG)、TC、高密度脂蛋白(HDL)、载脂蛋白A(ApoA)、载脂蛋白B(ApoB)水平降低;与青壮年组比较,长寿组血清TG、TC、HDL、ApoA、ApoB水平明显降低(P<0.05);长寿组血清HBB mRNA相对表达量与青壮年组和老年组相比均显著降低(P<0.05);血清HBB mRNA表达水平与ApoA、FBG呈正相关关系,与IgG、Hcy、Cr、BUN呈负相关关系。结论:血清HBB mRNA可能与代谢性指标相互作用进而影响长寿群体衰老进程。

关键词：血清 β-珠蛋白基因衰老代谢危险因素

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核糖核酸酶抑制因子与整合素连接激酶相互作用通过ILK/AKT/mTOR通路抑制膀胱癌体内外生长

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中国癌症杂志 2018年第1期28卷 30-37页

作者：邢雷庄翔陈俊霞重庆医科大学附属第一医院内分泌乳腺外科重庆400016 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016

背景与目的:蛋白质相互作用控制着细胞信号转导、跨膜转运、DNA合成及转录调控等生命过程,在生命活动中发挥重要作用。前期运用GST蛋白沉降技术与免疫共沉淀等已证明核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与整合素连接激酶(int... 详细信息

背景与目的:蛋白质相互作用控制着细胞信号转导、跨膜转运、DNA合成及转录调控等生命过程,在生命活动中发挥重要作用。前期运用GST蛋白沉降技术与免疫共沉淀等已证明核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)与整合素连接激酶(intergrin-linked kinase,ILK)在体内外直接结合。该研究旨在探讨RI与ILK相互作用对ILK/AKT/m TOR通路与膀胱癌体内外生长的影响。方法:采用免疫荧光观察RI与ILK在膀胱癌EJ细胞中的共定位。采用荧光共振能量转移技术(fluorescence resonance energy transfer,FRET)验证RI与ILK的相互作用。构建过表达RI或ILK的EJ细胞系。采用蛋白[质]印迹法(Western blot)检测细胞中RI、ILK及ILK/AKT/m TOR通路相关蛋白的表达。采用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)与流式细胞术分析细胞增殖与细胞周期。构建膀胱癌裸鼠移植瘤模型,观察过表达RI或ILK对移植瘤生长的影响。采用免疫组织化学与免疫荧光分析瘤组织中RI、ILK及ILK/AKT/m TOR通路相关蛋白的表达。结果:EJ细胞中RI与ILK存在共定位的现象且RI与ILK存在相互作用。过表达RI抑制EJ细胞增殖并导致细胞周期阻滞于S期(P<0.05),阻碍膀胱癌移植瘤的生长(P<0.05),并抑制体内外ILK/AKT/m TOR通路的活化(P<0.05)。而过表达ILK促进细胞增殖与移植瘤的生长(P<0.05),促进体内外ILK/AKT/m TOR信号通路的激活(P<0.05)。结论:RI通过与ILK相互作用阻碍ILK/AKT/m TOR通路激活并抑制膀胱癌体内外的增殖生长。

关键词：核糖核酸酶抑制因子整合素连接激酶膀胱癌增殖

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咖啡酸苯乙酯通过TGF-β/Smad通路抑制3T3-L1前脂肪细胞分化的作用

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锦州医科大学学报 2019年第1期40卷 4-7,I0002,I0003页

作者：迟乐黄波迟源金艳花延边大学医学院吉林延吉133002 锦州医科大学辽宁锦州121000 延边大学医学院细胞生物学与医学遗传学教研室吉林延吉133002

目的探讨咖啡酸苯乙酯对3T3-L1小鼠成纤维细胞(前脂肪细胞)向脂肪细胞分化的抑制作用,并阐明其作用机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞用含10%小牛血清的DMEM培养基培养,用0. 5μM的异丁基甲基黄嘌呤,1μM的地塞米松及10μg/m L胰岛素诱导脂... 详细信息

目的探讨咖啡酸苯乙酯对3T3-L1小鼠成纤维细胞(前脂肪细胞)向脂肪细胞分化的抑制作用,并阐明其作用机制。方法 3T3-L1前脂肪细胞用含10%小牛血清的DMEM培养基培养,用0. 5μM的异丁基甲基黄嘌呤,1μM的地塞米松及10μg/m L胰岛素诱导脂肪细胞的分化。脂肪细胞分化后用油红O染色,检测2. 5～10μM咖啡酸苯乙酯对脂肪细胞的诱导作用、脂质含量以及脂肪细胞分化和脂肪发生相关的基因和蛋白表达的变化。此外,裂解和测量甘油三酯的含量。采用组织学、蛋白质印迹和逆转录-聚合酶链式反应等方法研究了咖啡酸苯乙酯对3T3-L1脂肪细胞脂肪生成的抑制作用。结果咖啡酸苯乙酯浓度依赖型抑制油滴的积累和减少液滴的大小;咖啡酸苯乙酯显著降低过氧化体増殖物活化型受体-γ(PPAR-γ)、CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、脂肪酸合成酶(FAS)、脂肪细胞特异性脂肪酸结合蛋白2(a P2)、硬脂酰辅酶A脱氢酶1 (SCD-1)和脂蛋白(LPL)的表达。此外,咖啡酸苯乙酯显著上调转化生长因子-β(TGF-β)和Smad2和Smad3的磷酸化,但是处理Alk抑制剂时这些作用会减弱。结论咖啡酸苯乙酯通过调节PPAR-γ,C/EBPα和TGF-β信号通路对3T3-L1脂肪细胞脂肪生成具有抑制作用。

关键词：咖啡酸苯乙酯 3T3-L1脂肪细胞脂肪生成转化生长因子-β

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CYP4A11基因rs9333025 A/G多态性在云南彝族人群中的分布

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昆明医科大学学报 2019年第4期40卷 52-56页

作者：朱柯颖蒋涛盘婕范志祥张璐张延洁吴艳瑞龙莉昆明医科大学基础医学院临床医学专业云南昆明650500 昆明医科大学基础医学院细胞生物学和医学遗传学教研室云南昆明650500

目的研究云南省晋宁县彝族人群CYP4A11 rs9333025基因A/G多态性分布情况,为探讨CYP4A11基因相关性疾病的发病机制奠定基础。方法采用PCR-RFLP技术对云南省晋宁县303例彝族健康个体的CYP4A11基因A/G多态性进行分析,计算AA、AG、GG基因型... 详细信息

目的研究云南省晋宁县彝族人群CYP4A11 rs9333025基因A/G多态性分布情况,为探讨CYP4A11基因相关性疾病的发病机制奠定基础。方法采用PCR-RFLP技术对云南省晋宁县303例彝族健康个体的CYP4A11基因A/G多态性进行分析,计算AA、AG、GG基因型频率和A、G等位基因频率,与其他人群该位点多态性进行比较。结果云南省晋宁县彝族CYP4A11基因的AA、AG、GG基因型频率分别为2.31%、27.72%和69.97%,A和G等位基因频率分别为16.17%和83.83%。与日本人群比较,无论是基因型分布还是等位基因频率差异均有统计学意义(P<0.05);与汉族比较,基因型分布差异无统计学意义(P>0.05),但等位基因频率差异有统计学意义(P<0.05);与蒙古族比较,基因型及等位基因频率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论CYP4A11基因rs9333025 A/G多态性分布存在一定民族差异。

关键词： CYP4A11基因基因多态性彝族

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长链非编码RNA Gm4419通过NF-κB信号通路调控高糖下系膜细胞炎症因子的表达

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第三军医大学学报 2018年第7期40卷 577-583页

作者：姜文豪易红彭睿彭惠民张政重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院验教学中心重庆400016

目的探讨长链非编码RNA Gm4419通过核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路对高糖培养的肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响。方法在高、低糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中,采用RT-q PCR检测Gm4419的亚细胞分布及NF-κ... 详细信息

目的探讨长链非编码RNA Gm4419通过核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路对高糖培养的肾小球系膜细胞炎症因子表达的影响。方法在高、低糖培养的小鼠肾小球系膜细胞中,采用RT-q PCR检测Gm4419的亚细胞分布及NF-κB亚基p50和p65的表达水平;采用RT-q PCR及免疫荧光检测上、下调Gm4419后炎症相关因子TNF-α和MCP-1的表达;采用生物信息技术分析Gm4419与p50和p65关系;采用Western blot检测上、下调Gm4419后细胞核中p50和p65的表达水平,以及检测特异性p50抑制剂对过表达Gm4419影响MCP-1表达的作用。结果 Gm4419在肾小球系膜细胞高糖组表达水平显著高于低糖组(P<0.05),且主要分布在系膜细胞的细胞质中。同时,在低糖组过表达Gm4419后MCP-1、TNF-α表达水平显著增加(P<0.01);而在高糖组沉默Gm4419后MCP-1、TNF-α表达水平显著减少(P<0.01)。此外,Gm4419与NF-κB亚基p50和p65均存在潜在结合位点,过表达Gm4419后胞核p50和p65蛋白表达水平显著增加,NF-κB活化增强(P<0.01);而沉默Gm4419后胞核p50和p65蛋白表达水平显著降低,NF-κB活化减弱(P<0.01),且过表达Gm4419增加MCP-1表达的效应可被特异性p50抑制剂阻断。结论 Gm4419可能在促进高糖下系膜细胞炎症因子表达中扮演重要角色,其机制可能涉及NF-κB信号通路。

关键词： LncRNA Gm4419 NF-κB 肾小球系膜细胞炎症

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新形势下医学遗传学绪论教学初探

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基础医学教育 2019年第10期21卷 773-776页

作者：申本昌朱蔚云刘俊源 Dhinesan Sivapalan 李佩琼谢天炽广州医科大学生命科学学院医学遗传学与细胞生物学教研室广州511436 广州医科大学生命科学学院生物学实验中心广州医科大学生命科学学院广州医科大学国际教育学院

由于分子生物学技术和信息科学的飞速发展,医学遗传学在人类遗传病发病基因的定位、克隆、功能研究、遗传病发病机制及遗传病的诊断、预防和治疗方面,均取得了长足进步,传统的医学遗传学尤其是绪论章节的教学,存在教学内容滞后、教学方... 详细信息

由于分子生物学技术和信息科学的飞速发展,医学遗传学在人类遗传病发病基因的定位、克隆、功能研究、遗传病发病机制及遗传病的诊断、预防和治疗方面,均取得了长足进步,传统的医学遗传学尤其是绪论章节的教学,存在教学内容滞后、教学方式单一等问题,已经不能适应新形势的要求。文章在分析以往绪论教学存在问题的基础上,以创新思维的方式,进行了绪论教学的改革尝试,增加了学生自主学习的内容、适当拓展了能反映医学遗传学进展的教学内容,力求培养学生的自主学习能力及提高学生对医学遗传学的学习兴趣。

关键词：医学遗传学教学方法教学改革

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长链非编码RNA 1500026H17Rik对高糖培养的肾小球系膜细胞增殖的影响

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中国细胞生物学学报 2018年第4期40卷 560-567页

作者：张亚娟孙艳彭睿彭惠民张政重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

为了探讨长链非编码RNA 1500026H17Rik对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)检测1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及在高糖和低糖条件下培养的肾小球系膜细胞中的表达水平;扩增小鼠1500026H17... 详细信息

为了探讨长链非编码RNA 1500026H17Rik对小鼠肾小球系膜细胞增殖的影响,采用qRT-PCR(quantitative Real-time PCR)检测1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织及在高糖和低糖条件下培养的肾小球系膜细胞中的表达水平;扩增小鼠1500026H17Rik的全长序列,将其克隆到pcDNA3.1(+)载体上,构建pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒,并设计合成si RNA;将1500026H17Rik-si RNA和pcDNA(+)-1500026H17Rik过表达质粒分别转染至高糖或低糖培养的肾小球系膜细胞中,通过5-乙基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethyny1-2′-doexyuridine,Ed U)检测肾小球系膜细胞的增殖能力。结果表明,在糖尿病肾病小鼠肾脏组织和高糖培养的系膜细胞中1500026H17Rik表达水平显著提高。在低糖培养的系膜细胞中转染pcDNA3.1(+)-1500026H17Rik过表达质粒后与低糖培养的系膜细胞或空质粒转染对照组相比,低糖1500026H17Rik过表达的肾小球系膜细胞的增殖能力明显提高。同时,将通过qRT-PCR筛选出的一条敲低效率最佳的1500026H17Rik-si RNA转染至高糖培养的系膜细胞后,与高糖培养的系膜细胞或si RNA转染对照组相比,1500026H17Rik敲低的肾小球系膜细胞的增殖能力明显减弱。lnc RNA-1500026H17Rik在糖尿病肾病小鼠肾脏组织中呈高表达,且影响高低糖培养的肾小球系膜增殖,提示1500026H17Rik可能参与了糖尿病肾病的发生。

关键词：糖尿病肾病长链非编码RNA 1500026H17Rik 肾小球系膜细胞增殖

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