检索结果-内蒙古大学图书馆

关于提高医学细胞生物学本科教学效果的几点思考

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中国校外教育（中旬刊） 2015年第S1期 597-597页

作者：杨爱英哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一,既是医学院校学生的重要基础医学课程之一,也是非医学院校生命科学专业学生的必修课程. 针对细胞生物学课程的特点,从十年的教学工作实践中总结出了几点有助于提高课堂教学效果和增强学生... 详细信息

细胞生物学是现代生命科学的前沿分支学科之一,既是医学院校学生的重要基础医学课程之一,也是非医学院校生命科学专业学生的必修课程. 针对细胞生物学课程的特点,从十年的教学工作实践中总结出了几点有助于提高课堂教学效果和增强学生学习兴趣的方法.

关键词：教学效果学习兴趣医学细胞生物学

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刚地弓形虫棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体的构建、表达及其激酶活性分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2014年第1期32卷 29-33页

作者：王海龙殷丽天张铁娥关丽孟晓丽刘红丽殷国荣山西医科大学医学寄生虫学研究所太原030001 山西医科大学生理学系太原030001 山西医科大学细胞生物学与遗传学教研室太原030001

目的构建刚地弓形虫RH株棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体,对表达产物进行激酶活性的检测和功能分析。方法根据刚地弓形虫ROP17蛋白编码基因(GenBank登录号为AM075203.1)设计引物,以弓形虫RH株速殖子总RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因片段... 详细信息

目的构建刚地弓形虫RH株棒状体蛋白17(ROP17)真核表达载体,对表达产物进行激酶活性的检测和功能分析。方法根据刚地弓形虫ROP17蛋白编码基因(GenBank登录号为AM075203.1)设计引物,以弓形虫RH株速殖子总RNA为模板,RT-PCR扩增目的基因片段,克隆至真核表达载体p3×Flag-CMV-14,构建重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17。经菌液PCR、双酶切和测序鉴定正确后,用脂质体法转染至人胚肾细胞(HEK293T),RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析表达产物;Western blotting检测其激酶活性;流式细胞术分析ROP17对转染宿主细胞凋亡的影响。结果 RT-PCR结果显示,从RH株弓形虫速殖子中扩增出约1 850 bp的基因片段。菌落PCR、双酶切和测序结果显示,重组质粒p3×Flag-CMV-14/TgROP17构建成功且序列正确。RT-PCR和Western blotting结果显示,在转染p3×Flag-CMV-14/TgROP17的细胞中有TgROP17的表达,基因片段大小为1 850bp,蛋白质相对分子质量(Mr)约为70 000,而转染空质粒组未见表达。Western blotting结果显示,ROP17可以磷酸化c-Jun蛋白;流式细胞术结果显示,ROP17抑制喜树碱(CPT)诱导的细胞凋亡,6 h和12 h的抑制率分别为20.6%和24.1%,两者差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建了真核表达载体p3×Flag-CMV-14/TgROP17,其表达产物具有激酶活性且能够抑制细胞凋亡。

关键词：刚地弓形虫棒状体蛋白17 真核表达丝氨酸苏氨酸激酶细胞凋亡

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腺病毒介导的Wnt10b对HaCaT细胞迁移的作用及机制

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现代生物医学进展 2015年第3期15卷 429-432页

作者：陶元王瑞敏唐萄杨恬彭惠民郭海英星懿展第三军医大学学员十五营重庆400038 重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 中铁十七局集团有限公司中心医院重症医学科山西太原030032 第三军医大学学员七营重庆400038 第三军医大学基础部细胞生物学教研室重庆400038

目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录... 详细信息

目的:探讨Wnt10b对Ha Ca T表皮细胞迁移的影响及机制。方法:分别用重组腺病毒Ad-GFP、Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T表皮细胞,利用细胞免疫荧光技术检测腺病毒Ad-GFP-Wnt10b感染细胞后的过表达情况;采用细胞划痕实验,于不同时间点观察并记录经Wnt10b处理后,Ha Ca T细胞体外迁移功能的改变;进一步采用Westen blot技术检测不同腺病毒处理后,Ha Ca T细胞中Wnt信号关键分子β-catenin、细胞粘附分子E-cadherin表达的改变情况。结果:1Ad-GFP-Wnt10b感染Ha Ca T细胞48 h后,细胞内GFP表达上调,细胞免疫荧光染色显示Wnt10b处理组高表达Wnt10b蛋白;2Ha Ca T细胞经Ad-GFP-Wnt10b处理后,细胞创面愈合速度明显增快;3Wnt10b处理组细胞β-catenin蛋白表达水平显著高于对照组,而E-cadherin蛋白表达水平显著低于对照组。结论:Wnt10b能促进Ha Ca T细胞迁移,且该效应涉及经典Wnt/β-catenin信号的激活及由E-cadherin介导的细胞粘附性的减弱。

关键词： Wnt10b 经典Wnt信号 HaCaT细胞迁移

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糖尿病肾病循环microRNA差异表达谱的分析

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西南大学学报（自然科学版） 2014年第11期36卷 75-82页

作者：彭睿查何周吉彭惠民张政重庆医科大学生物信息学教研室重庆400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学实验教学中心重庆400016

为了解循环microRNA在早期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)发病机制中的作用,该文采用芯片筛查结合real-time PCR检测早期糖尿病肾病患者循环microRNA差异表达谱,同时应用生物信息学方法预测差异表达谱microRNA的靶基因.结果表明:... 详细信息

为了解循环microRNA在早期糖尿病肾病(Diabetic nephropathy,DN)发病机制中的作用,该文采用芯片筛查结合real-time PCR检测早期糖尿病肾病患者循环microRNA差异表达谱,同时应用生物信息学方法预测差异表达谱microRNA的靶基因.结果表明:芯片筛查出49个microRNA在DN中呈差异表达,其中信号值在两组中均大于1 000的microRNA有22个,17个上调,5个下调.选择其中差异倍数大于2的5个microRNA进行realtime PCR验证,结果与芯片结果一致,分别为let-7a,let-7d,let-7f和miR-363在DN中低表达,miR-4429在DN中高表达.同时,应用生物信息学技术预测了5个microRNA的靶基因,主要涉及细胞代谢过程调控、生长因子反应和细胞增殖等的相关基因.DN差异表达谱的建立为探寻microRNA发病中的作用以及DN的早期诊治提供了新的思路.

关键词：糖尿病肾病 microRNA 表达谱

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广西壮族、汉族系统性红斑狼疮与Toll样受体9基因多态性研究

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中华皮肤科杂志 2014年第6期47卷 404-408页

作者：温斯健吴飞云林有坤方玲广西医科大学第一附属医院皮肤性病科南宁530021 广西医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例... 详细信息

目的探讨TLR9单核苷酸多态性与广西系统性红斑狼疮（sLE）患者发病的相关性，以及其在壮族、汉两个民族间的差异。方法聚合酶链反应-限制性酶切技术、聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析技术（PCR—RFLP）对97例广西SLE患者和202例广西健康对照者的TLR9基因多态性进行检测，分析其基因型和等位基因频率与SLE部分临床实验室指标的关联性，并比较两民族间的差异。结果TLR9rs352140CC、CT、TT基因型频率在汉族SLE组与汉族对照组中分别为42．9％、41．1％、16．1％和38．3％、55．8％、5．8％，差异有统计学意义（P〈0．05），其C、T等位基因频率差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140C／T基因型频率和等位基因频率在壮族SLE组与壮族健康对照组间、壮族SLE组与汉族SLE组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。TLR9rs352140Tr基因型频率在ds-DNA阳性组比阴性组高（P〈0．05），而T等位基因频率在两组间差异无统计学意义（P〉0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在SLEDAI≥9组比SLEDAI〈9组高，差异有统计学意义（均P〈0．05）。TLR9rs352140TT基因型频率和T等位基因的频率在ANA阳性组与阴性组间差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论TLR9rs352140基因多态性可能与广西汉族人SLE的易感性有关，TLR9基因多态性与部分SLE指标可能具有相关性。

关键词：红斑狼疮系统性 Toll样受体9 多态性单核苷酸壮族汉族

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细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3和Eg10免疫差异的初步研究

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四川大学学报（自然科学版） 2014年第3期51卷 592-596页

作者：王强王娅娜王程铖王玉姣吕士玉赵巍宁夏医科大学包虫病实验室银川750004 宁夏医科大学医学遗传学与细胞生物学教研室银川750004 宁夏回族自治区遗传与生殖重点实验室银川750004

表达纯化细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3(rEg14-3-3)和Eg10(rEg10),分别免疫小鼠,8w后进行细粒棘球蚴原头蚴攻击感染.计算免疫保护力,检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞亚群以及T细胞增殖情况.实验结果表明,rEg14-3-3免疫组小鼠具有85.3%抵抗细... 详细信息

表达纯化细粒棘球蚴重组蛋白14-3-3(rEg14-3-3)和Eg10(rEg10),分别免疫小鼠,8w后进行细粒棘球蚴原头蚴攻击感染.计算免疫保护力,检测脾组织中CD4+T、CD8+T细胞亚群以及T细胞增殖情况.实验结果表明,rEg14-3-3免疫组小鼠具有85.3%抵抗细粒棘球绦虫感染的能力,而rEg10免疫组小鼠与对照组小鼠相比无免疫保护力;与PBS对照组相比,只有rEg 14-3-3免疫组的CD4+T细胞亚群的分布有明显差异,且rEg 14-3-3抗原能诱导淋巴细胞显著增殖.因此rEgl4-3-3蛋白能抑制细粒棘球蚴的生长,诱导小鼠产生高水平的免疫保护力,可作为疫苗候选分子.

关键词：细粒棘球绦虫 rEgl4-3-3 rEg10 免疫保护力

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sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成作用的初步研究

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 228-231页

作者：汤寅虹杨珂杨恬叶吉星刘鹏连小华郭海英彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 第三军医大学基础医学部细胞生物学教研室重庆400038 重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆医科大学附属口腔医院放射科重庆400015

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法... 详细信息

目的研究sFRP5抑制Wnt3a对黑素细胞黑素形成的作用。方法以永生化的黑素细胞为模型,利用腺病毒表达载体,设置Control组、Wnt3a处理组、Wnt3a+sFRP5处理组进行以下实验:L-DOPA测定酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)活性;Masson-Fontanas银染色法观察黑素形成情况;RT-PCR检测酪氨酸酶相关蛋白1(tyrosinase-related protein 1,TRP-1)、TYR基因的表达;Western blot检测TRP-1、TYR蛋白的表达水平。结果 L-DOPA测定酪氨酸酶活性结果显示Wnt3a+sFRP5处理组TYR活性低于Wnt3a处理组,差异有统计学意义(P<0.05);Masson-Fontanas银染色法显示Wnt3a+sFRP5处理组形成的黑素明显低于Wnt3a处理组;RT-PCR检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR基因的表达(P<0.05);Western blot检测结果显示Wnt3a+sFRP5处理组能下调TRP-1、TYR蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 sFRP5能抑制Wnt3a对黑素细胞黑素生成的作用。

关键词： sFRP5 Wnt3a 黑素细胞

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重组弓形虫肌动蛋白解聚因子滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及保护作用

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中国病原生物学杂志 2014年第2期9卷 158-162页

作者：关丽张铁娥王海龙孟晓丽杨建一殷国荣山西医科大学细胞生物学与遗传学教研室山西太原030001 山西医科大学医学寄生虫学研究所山西太原030001

目的观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30μg rTgADF(溶于20μl P... 详细信息

目的观察重组弓形虫肌动蛋白解聚因子(Recombinant Toxoplasma gondii actin depolymerizing factor,rTgADF)滴鼻免疫小鼠诱导的免疫应答及抗弓形虫攻击的保护作用。方法 40只雌性BALB/c小鼠随机分为2组,分别用30μg rTgADF(溶于20μl PBS)和20μl PBS于第0、14和21d各滴鼻免疫1次。末次免疫后14d,每组处死小鼠5只,ELISA法测定血清IgA、IgG和IgG1/IgG2a及鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA以及脾淋巴细胞培养上清中IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10水平。每组另取5只小鼠,用4×104 RH株弓形虫速殖子/只灌胃攻击(致死性),观察小鼠健康状况并计算存活率。其余小鼠用1×104速殖子/只灌胃攻击(慢性),攻击后30d处死,计数肝、脑组织速殖子。结果 rTgADF诱发小鼠产生较强的系统免疫和黏膜免疫应答,免疫组小鼠血清IgG、IgA和IgG1/IgG2a水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),鼻咽、阴道和小肠冲洗液sIgA水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),脾淋巴细胞培养液上清中IFN-γ和IL-2、IL-4水平与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),IL-10水平组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。致死性攻击后30d,对照组小鼠全部死亡,免疫组小鼠存活率为20%,差异有统计学意义(P<0.01);慢性感染后30d,免疫组小鼠肝和脑虫荷分别比对照组减少63.87%(P<0.01)和50.14%(P<0.05)。结论 rTgADF滴鼻免疫小鼠诱导产生较强的黏膜及系统免疫应答,并可部分抵抗弓形虫致死性和慢性攻击,可作为弓形虫候选蛋白疫苗。

关键词：刚地弓形虫肌动蛋白解聚因子黏膜免疫鼻疫苗

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Notch信号通路在DC介导的细粒棘球蚴重组抗原***免疫过程中的作用研究

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中国病原生物学杂志 2014年第12期9卷 1098-1103页

作者：吕士玉高富李子华王强赵巍王娅娜宁夏医科大学检验学院宁夏银川750004 宁夏医科大学医学科学研究所宁夏医科大学基础学院宁夏医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的初步探索Notch信号对树突状细胞(dendritic cell,DC)介导的抗寄生虫感染免疫反应的影响。方法体外培养骨髓来源的小鼠DC细胞,利用γ-分泌酶抑制剂N-[N-(3,5-Difluorophenacetyl)-L-alanyl]-S-phenylglycine tbutyl ester,DAPT于不同时间段处理细胞,阻断DC的Notch信号通路,培养第7d时收集DC,用细粒棘球蚴重组抗原铁蛋白(ferritin protein of Echinococcus granulosus,***)体外刺激DC,利用扫描电镜观察DC形态的改变,采用流式细胞术检测DC表面分子MHCⅡ、CD40及CD80/CD86的表达情况。结果 DC细胞数量随DAPT浓度的增高而降低;经不同浓度DAPT于不同时间段处理后,DC细胞中Notch1mRNA的表达受到抑制,以50μmol/L DAPT在第0d处理DC,对Notch1mRNA的抑制效果更显著(P<0.05);***和LPS均能刺激DC细胞表面树突的生成及表面分子MHCⅡ、CD40及CD80/CD86的表达,且***比LPS的刺激作用更显著(P<0.05),而加入DAPT后,DC细胞表面树突的生成减少,各表面分子的表达水平降低(P<0.05),并削弱了***和LPS的刺激作用。结论***能促进DC细胞的分化成熟,而阻断Notch信号通路会影响DC细胞的分化成熟,并降低DC细胞对***的反应能力。其分子机制涉及Notch信号通路。

关键词： Notch信号通路 DAPT 细粒棘球蚴重组抗原Eg.ferritin 树突状细胞(DC)

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沉默整合素连接激酶基因对TCA8113舌癌细胞移植瘤生长的影响

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第三军医大学学报 2014年第19期36卷 1996-2000页

作者：幸宇齐进邓世雄陈俊霞重庆医科大学基础医学院法医生物信息学研究室重庆400016 细胞生物学及遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学附属口腔医院牙体牙髓科重庆400015

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载... 详细信息

目的研究沉默TCA8113舌癌细胞整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)基因的表达,对其下游底物Akt和GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的影响。方法通过Lipofectamine 2000介导将特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,稳定转染人舌鳞癌TCA8113细胞,分为TCA8113组、TCA8113 vector组和TCA8113 siILK组,将3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤质量,对裸鼠肺及瘤组织形态学行常规病理学检查,使用免疫荧光技术检测体外和体内癌细胞p-Akt和p-GSK3β等的表达,并观察瘤组织内血管生成情况。结果 TCA8113组、TCA8113 vector组肺组织均发生自发性转移瘤,TCA8113 siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;TCA8113 siILK组移植瘤细胞形态较其他2组体积减小,核分裂象较少,核浆比例缩小;TCA8113 siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他2组均明显下降(P<0.05);TCA8113 siILK组移植瘤质量较其他2组显著降低(P<0.05),抑瘤率分别为84%和92%;TCA8113 siILK组移植瘤血管生成较其他2组也明显减少(P<0.05)。结论沉默TCA8113舌癌细胞ILK表达可抑制其下游信号传导分子Akt和GSK3β的磷酸化,并抑制移植瘤血管生成,从而抑制移植瘤的生长。

关键词：整合素连接激酶人舌鳞癌细胞移植瘤生长微血管

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