核糖核酸酶抑制因子(Ribonuclease Inhibitor,RI)是一种胞浆内酸性糖蛋白,由许多亮氨酸重复顺序组成,含有这样结构的一百多种蛋白质显示了广泛的功能,包括细胞周期调节、DNA 修复、胞外基质的相互作用及酶的抑制作用等。RI 基因定位于染色体的11p15.5, 与 ras 基因邻近,肿瘤病人中常存在该部位的变异,RI 可能与细胞的生长和分化有关,因此 RI 可能具有尚未知的生物学作用。以往的研究和实验证明 RI 能与 RNaseA 和 Ang 紧密结合而抑制它们的活性,因此 RI 具有抗癌作用与其抑制血管生成的活性。为了研究是否还具有其它抑癌功能以及 RI 抗癌的确切的分子机制,本文研究干扰 RI 表达后肿瘤细胞迁移黏附能力的改变,同时测定其对细胞的生长活性是否有作用。本研究使用的载体 pGenesil-1含 RNA 聚合酶Ⅲ启动子及绿色荧光蛋白标记基因,表达生成 shRNA 对特定基因进行 RNA 干扰。一共构建2个 RI 干扰载体和一个乱序对照载体,并与空质粒各自转染非浸润性 BIU-87膀胱癌细胞, 通过新霉素筛选获得稳定表达的细胞株。RT-PCR 和 Western blot 测定 RI 干扰组、乱序对照组、空质粒组及 BIU-87组间 RI 的 mRNA 和蛋白表达,免疫组化观察细胞质内 RI 的表达,得出 RI 的表达被显著抑制,且对照组间无显著差异。观察细胞形态,RI 干扰组细胞发生明显的堆积生长变化,且 HE 染色显示 RI 干扰组细胞具更高核质比。细胞黏附实验、划痕实验及侵袭小室实验测定 RI 干扰组细胞的黏附能力、迁移能力及侵袭能力较其他对照组有显著的提高, 而对照组间无显著变化。并通过免疫荧光的方法。发现 RI 干扰后细胞微丝疏稀有解聚趋势, 且有伪足生成,靠近细胞膜的微管解聚,从微观上说明干扰后细胞运动能力加强。但是使用 MTT 法测定细胞活性,发现各组间差异无显著差异。因此结合以往的研究,RI 除了具有抗癌作用与其抑制血管生成的活性,还有抑制肿瘤细胞迁移侵袭的作用;而 RI 干扰后对 BIU-87 细胞无生长抑制作用,说明 RI 在肿瘤细胞中抑制细胞生长具有细胞特异性,有待其作用机理进一步研究。
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