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中华胃肠外科杂志 2007年第4期10卷 376-379页

作者：李云龙邹小明郭宝良李晓林闫朝岐尤立光傅松滨哈尔滨医科大学附属第二医院普通外科 150086 哈尔滨医科大学附属第五医院普通外科哈尔滨医科大学附属第二医院基础医学院医学遗传学与生物学教研室 150086

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-790... 详细信息

目的研究曲古菌素A（TSA）在胃腺癌细胞系SGC-7901中的作用。方法四甲基偶氮唑蓝法测定TSA对SGC-7901的细胞毒性，荧光显微镜观察细胞核DNA的变化，流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率，Western印迹检测组蛋白H3的乙酰化状态。结果SGC-7901细胞生长曲线表明，TSA浓度增高，细胞生长率下降。细胞凋亡率在75ng／mlTSA作用72h时与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。凋亡细胞DNA变化主要表现为核染色质固缩及断裂，荧光染色增强。流式细胞仪分析出现明显的亚G1期峰，G1期细胞减少，细胞凋亡率达29．54％。TSA作用后，乙酰化的组蛋白如明显增多。结论TSA可以诱导SGC-7901细胞发生凋亡，组蛋白H3的乙酰化状态可能与细胞凋亡有关。

关键词：胃肿瘤曲古菌素A 细胞凋亡乙酰化组蛋白H3 细胞系SGC-7901

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载脂蛋白E基因多态性与早发冠心病及血脂含量的关系

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心血管康复医学杂志 2007年第4期16卷 334-336,346页

作者：楚玉荣楚智慧朱颖钊哈尔滨医科大学大庆校区遗传与细胞生物学教研室黑龙江大庆市163319 牡丹江医学院附属医院

目的:研究载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与早发冠心病(CHD)的相关关系及其对血脂水平的影响。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分析方法,测定92例早发CHD、237例迟发CHD患者和220名对照者的ApoE基因型。血脂水平... 详细信息

目的:研究载脂蛋白E(ApoE)基因多态性与早发冠心病(CHD)的相关关系及其对血脂水平的影响。方法:应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分析方法,测定92例早发CHD、237例迟发CHD患者和220名对照者的ApoE基因型。血脂水平按常规方法测定。结果:发现的5种ApoE基因型,分别为E3/3、E2/2、E3/2、E4/3及E4/2。早发CHD组和迟发CHD组ApoE4/3基因型和ε4等位基因频率均高于对照组(P<0.05～<0.01);进一步对两组CHD患者的ApoE多态性进行分析,发现早发组ε4等位基因频率较迟发组高(P<0.05)。ApoE各等位基因型的TC和LDL-C水平存在统计学差异(P<0.05)。结论:ApoE基因多态性与早发CHD的发生发展有关,并影响血脂的水平。

关键词：冠状动脉疾病载脂蛋白E类基因高血压

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医学遗传学网络教学资源库的建设与应用

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医学教育探索 2007年第9期6卷 808-809,811页

作者：胡启平马军袁志刚陈珲庞启平方玲广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室广西南宁530021 广西医科大学现代教育技术中心广西南宁530021

目前医学遗传学教学方式、方法和手段远远落后于学科发展的步伐。在网络教学模式下,网络教学资源库的建设是顺利开展教学工作、快速提高教学质量和效率的重要环节。文章介绍了医学遗传学网络教学资源库的建设过程、教学应用和特点。

关键词：医学遗传学网络教学资源库

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小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶载体的构建

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福建医科大学学报 2007年第2期41卷 97-100页

作者：刘英刘运强周钦陶大昌彭艳刘合焜张思仲四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室医学遗传学教研室成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室基因工程小鼠实验部成都610041 福建医科大学细胞生物学与遗传学系福州350004

目的构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件。方法设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5′同源臂、3′同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1kb的片段,反向插入pBS载体的neo基... 详细信息

目的构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件。方法设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5′同源臂、3′同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1kb的片段,反向插入pBS载体的neo基因的两侧,从而构建小鼠Znf230条件基因打靶载体Znf230-pBS(5)。结果经过限制性内切酶及DNA测序鉴定,证实该条件基因打靶载体含有的同源序列与Genebank公布的基因序列一致,表明载体构建成功。结论PCR技术和定向克隆技术是构建条件基因打靶载体简单而可靠的方法。运用该技术可获得小鼠锌指蛋白基因Znf230的条件基因打靶载体。

关键词： DNA结合基因蛋白质类基因聚合酶链反应克隆,分子

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转录因子X-box结合蛋白1相互作用蛋白的筛选和鉴定(英文)

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生物化学与生物物理进展 2006年第8期33卷 745-753页

作者：郭风劲宋方洲易发平成海恩重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序... 详细信息

X-box 结合蛋白 1 是一种重要的转录因子,参与体内多项信号转导过程. 为进一步研究 XBP1 的生物学功能,运用酵母双杂交技术在肝细胞文库中筛选 XBP1 的结合蛋白. 首先运用 PCR 技术扩增获得 XBP1 的编码序列,克隆至 pGEM-T 载体,经测序鉴定后,亚克隆至诱饵载体 pGBKT7 中,转化酵母 AH109(a type). 免疫印迹检测诱饵质粒 pGBKT7-XBP1 在AH109 酵母中的表达之后,含有诱饵质粒的酵母 AH109 与含有肝细胞 cDNA 文库质粒 pACT2 的酵母 Y187(αtype)配合,配合后的二倍体酵母生长在含有 X-α-gal 的营养缺陷型培养基上 (SD/-Trp-Leu-His-Ade) 进行选择和筛选,经测序和序列比对确定阳性克隆的开放读码框 ORF,得到 7 种不同的蛋白质. 为了进一步验证这些筛选蛋白质与 XBP1 的相互作用,克隆其中一种蛋白质 MT1E,并运用 GST pulldown 和免疫共沉淀技术成功检测了 MT1E 和 XBP1 的相互作用(体外 / 体内),结果提示,MT1E 可能是 XBP1 的一个新的调节蛋白. 通过酵母双杂交技术筛选得到的 7 种蛋白质分别与肝细胞基础代谢、蛋白质的合成与运输、细胞的增殖与凋亡密切相关. 上述结果有助于揭示 XBP1 的生物学功能,为进一步探讨 XBP1 的表达和调控机制提供新线索.

关键词： X-box结合蛋白1 酵母双杂交转录因子诱饵

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NIRF对P53蛋白泛素化作用的研究

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生物化学与生物物理进展 2006年第2期33卷 163-168页

作者：段昌柱蒲淑萍 TSUTOMU MORI HIDEO KOCHI 邱宗荫重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 The 1st Department of Biochemistry Fukushima Medical UniversityJapan 重庆医科大学医学检验系重庆400016

HEK293和HeLa细胞分别被Np95/ICBP90-likeRINGfingerprotein(NIRF)和P53转染后,细胞上清和免疫沉淀产物用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳免疫印迹法分析;细菌合成GST-P53后,用GSTpull-down技术检测NIRF与P53相互作用;在GST-P53、E1、E2和NIRF体外泛素化反应系统中,检测NIRF对P53的体外泛素化.结果表明:NIRF能与P53相互作用,NIRF不仅能与P53特异性结合,而且还会将P53泛素化,这种相互作用在细胞内和细胞外均能发生.推测NIRF可能是P53的一个新的负调节蛋白.

关键词： NIRF P53 GST pull-down 泛素化

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人类XBP1基因5′上游DNA序列的转录激活功能分析(英文)

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中华医学遗传学杂志 2006年第1期23卷 1-6页

作者：郭风劲成海恩易发平彭惠民宋方洲重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室 400016 重庆医科大学分子生物学教研室 400016

目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-... 详细信息

目的分析人类转录因子X-盒结合蛋白1(X-box binding proteinⅠ,XBP1)基因启动子在不同细胞系中转录活性的差别,研究其转录调控机制。方法在对XBP1基因进行生物信息学分析的基础上,设计6种XBP1启动子缺失突变体,分别包括XBP1基因5′上游-1039~66bp、-859~66bp、-623~66bp、-351~66bp,-227~66bp、-227^-45bp,针对每一种缺失突变体构建相应的氯霉素乙酰转移酶(chloramphenicol acetyltansferase,CAT)报告基因载体,再分别瞬时转染K562、HepG2、NIH-3T3和L02细胞,应用报告基因CAT瞬时表达系统,检测XBP1每一种缺失突变体在K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞中的活性差异,并进一步确定XBP1基因启动子的具体调节部位。结果成功获得XBP1基因启动子6种缺失突变体的正确克隆和6种相应的报告基因载体p1-XBP1p,p2-XBP1p,p3-XBP1p,p4-XBP1p,p5-XBP1p,p6-XBP1p,每一种报告基因转染K562、HepG2、NIH-3T3和L024种不同细胞系后,p4-XBP1p和p5-XBP1p在K562、HepG2细胞中的转录活性均高于其它报告载体,p5-XBP1p在HepG2细胞中转录活性最高;而6种报告基因载体在NIH-3T3小鼠成纤维细胞中不具有转录活性。结论XBP1基因的转录激活能力在不同细胞中有所差异,其表达活性具有一定的细胞类型特异性,与细胞类型和细胞状态密切相关;XBP1基因启动子的-227~66bp区域是该启动子的核心部位,而且核心启动子区包括ATG翻译起始密码子的下游部位,这一部位是转录活性的重要部位,一旦缺失,XBP1基因启动子会丧失活性。

关键词： X-盒结合蛋白1 启动子氯霉素乙酰转移酶报告基因转录调控

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网络教学平台中教学课件个性化的实现

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广西医科大学学报 2006年第S1期23卷 76-77页

作者：胡启平袁志刚马军广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

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医学院校研究生对细胞生物学课的信息反馈的分析

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广西医科大学学报 2006年第S1期23卷 248-250页

作者：袁志刚马军胡启平方玲季米娜窦霄云广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

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FGF2基因真核表达载体构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

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中国地方病学杂志 2006年第6期25卷 643-645页

作者：徐威于波李厚伟陈香梅安毅李呼伦哈尔滨医科大学附属第二医院心内科 150081 哈尔滨医科大学遗传学教研室青岛大学医学院附属医院心内科哈尔滨医科大学神经生物学教研室

目的研究真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-FGF2(成纤维细胞生长因子2)在骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达及其对MSCs的影响。方法基因克隆构建pcDNA3．1／V5-His-FGF2真核表达载体,利用FuGENETM6转染大鼠MSCs,RT-PCR、免疫荧光检测其表达... 详细信息

目的研究真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-FGF2(成纤维细胞生长因子2)在骨髓间充质干细胞(MSCs)中的表达及其对MSCs的影响。方法基因克隆构建pcDNA3．1／V5-His-FGF2真核表达载体,利用FuGENETM6转染大鼠MSCs,RT-PCR、免疫荧光检测其表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测其对MSCs生物学活性的影响。结果构建了含FGF2基因的真核表达载体;RT-PCR证实外源FGF2基因可转染到MSCs;免疫荧光检测转染24 h即可在MSCs中表达;MTT法检测转染48、72 h后细胞吸光度值(0．3871±0．0433、0．4349±0．0319)明显高于空载体组(0．3457±0．0162、0．3881±0．0434)(t1=2．833、t2=2．313,P<0．05)和未转染组(0．3378±0．0215、0．3641±0．0365)(t1=3．227、t2=3．650,P<0．05),而空载体对细胞增殖无影响(P> 0．05)。结论构建了FGF2真核表达质粒,并在MSCs中成功表达,为FGF2基因治疗的研究奠定了坚实的基础。

关键词：骨髓间充质干细胞成纤维细胞生长因子2 质粒基因转染

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