检索结果-内蒙古大学图书馆

医学分子生物学杂志 2007年第6期4卷 475-479页

作者：李丹刘兴汉赵炜明李冀宏马洪星张宇雯栗亚哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150081

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽，检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1—30位氨基酸（30肽，序列25—31由RGIRGAD改为RGDRGD）所对应的核苷酸序列，连接到质粒pTYB2中，再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，几丁质亲和... 详细信息

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽，检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1—30位氨基酸（30肽，序列25—31由RGIRGAD改为RGDRGD）所对应的核苷酸序列，连接到质粒pTYB2中，再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，几丁质亲和层析树脂一步纯化30肽。通过MTT法、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验、小鼠体内抑瘤实验比较30肽和内皮抑素抗肿瘤活性。结果 MTT证实30肽体外对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、胃癌7901细胞（SGC-7901）半数抑制浓度IC50为36μg／ml、47μg／nl，显著低于内皮抑素IC50179μg／ml、202μg／ml。CAM实验中30肽对血管的抑制作用更强。30肽在小鼠体内抑瘤率47．8％，效果优于内皮抑素28．7％。结论 30肽具有更强抗肿瘤活性，有可能成为治疗肿瘤的一种新药物。

关键词：内皮抑素 RGD序列克隆基因表达抗肿瘤活性

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唯BH3域蛋白与细胞凋亡

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医学分子生物学杂志 2007年第2期4卷 143-146页

作者：张宇雯刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086

唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路... 详细信息

唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路中起重要作用。有些唯BH3域蛋白在内质网通路和死亡受体通路中也起到一定作用。对该类蛋白的研究将有助于深化对凋亡的认识,并为疾病治疗提供新的方法和思路。

关键词：唯BH3域蛋白线粒体凋亡

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中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

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第六届全国中药新药研究与开发信息交流会

作者：杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理教研室，省部共建生物医药工程国家重点实验室培育基地，黑龙江哈尔滨 150081

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条... 详细信息

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条件下HERG通道的改变，同时确定药物对其调控作用。

关键词：中药 HERG钾通道心血管疾病分子克隆膜片钳调控作用

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人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化

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国际遗传学杂志 2007年第3期30卷 169-172页

作者：马洪星栗亚张宇雯李冀宏刘岩刘远莉李丹刘兴汉黑龙江省部共建国家重点实验室培育基地一黑龙江省生物医药工程重点实验室哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆... 详细信息

目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导其融合表达,对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析,DTY诱导柱上裂解以获得T21RGD肽。经Trcine- SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定。结果质粒酶切和测序结果显示,含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50%以上,Trcine- SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符,反相高效液相色谱测定峰纯度达97%。结论成功构建T21RGD肽融合表达载体,实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化,为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础。

关键词：肿瘤抑素 RGD序列基因重组纯化

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大明胶囊对高脂血症大鼠心肌M受体各亚型mRNA表达的影响

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中草药 2006年第9期37卷 1362-1366页

作者：邢妍岳朋李惠张勇林道红董德利吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室黑龙江哈尔滨150086

目的通过检测M受体各亚型在心肌上的mRNA表达量,研究大明胶囊对高脂血症大鼠降血脂作用的分子机制。方法制备高脂血症大鼠模型,尾静脉取血测血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA... 详细信息

目的通过检测M受体各亚型在心肌上的mRNA表达量,研究大明胶囊对高脂血症大鼠降血脂作用的分子机制。方法制备高脂血症大鼠模型,尾静脉取血测血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、游离脂肪酸(FFA)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)等血脂指标;Trizol法提取心肌总RNA,利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定M2、M3、M4、M54种M受体亚型mRNA的表达,观察其在高脂、正常和给药3种条件下的差异。结果高脂血症时血清中的TC、TG、LDL、FFA及MDA水平升高(P<0.05),HDL与SOD降低(P<0.05),经大明胶囊治疗后TC、TG、LDL、FFA及MDA水平降低(P<0.05),HDL与SOD水平上调(P<0.05)至近正常水平;比较高脂模型组与正常组M受体各亚型mRNA表达,结果M2、M4、M5受体亚型表达减弱,M3受体亚型表达增强,差别有统计学意义(P<0.05)。给大明胶囊后与高脂模型组比较M3受体亚型mRNA表达增强,M2受体亚型表达减弱,且具有显著差异(P<0.05),M4、M5受体亚型mRNA表达无显著差异(P>0.05)。结论高脂血症大鼠模型建立成功,大明胶囊具有降血脂作用,并且M3受体的水平上调是大明胶囊降血脂作用的分子机制之一。

关键词：大明胶囊 M受体高脂血症 RT—PCR

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TAT-凋亡素基因重组质粒的构建、蛋白的表达纯化及体内活性实验

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国际遗传学杂志 2006年第6期29卷 411-415页

作者：郑天虎陶站华刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地 150081 哈尔滨

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性... 详细信息

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定,其核苷酸片段长度和序列与预期序列相符,诱导后融合蛋白出现在上清中,纯化出的TAT-Apoptin蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论该实验所构建的重组质粒pTYB2／TAT-Apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-Apoptin,纯化后具有明显的生物活性,为TAT-Apoptin蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： TAT-凋亡素基因重组纯化几丁质亲和层析

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肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 322-328页

作者：王淑静刘岩林雪松付雪徐建永刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋... 详细信息

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物.

关键词：肿瘤抑素,蛋白质表达,蛋白质纯化,肿瘤治疗

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重组人内皮抑素的结构改造及抗肿瘤活性变化

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第1期21卷 45-52页

作者：任明华王淑静林雪松徐建永陶站华赵炜明刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑... 详细信息

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑素的抑瘤率分别为 4 0 6 6 %和5 1 0 5 % ,诱变内皮抑素抑瘤率比野生内皮抑素提高了近 11个百分点 .病理切片HE染色诱变组肿瘤的血管生成比野生组明显减少 ,坏死灶增多 .免疫组化试验中 ,诱变组在微血管密度MVD(P <0 0 5 )、血管内皮生长因子VEGF(P <0 0 5 )、增殖细胞核抗原PCNA(P >0 0 5 )三个指标上均比野生组减小 .体外细胞实验中 ,MTT结果表明 ,野生组内皮抑素半数抑制浓度IC50 =185 μg ml,诱变组内皮抑素IC50 =2 7μg ml,诱变组抑瘤活性是野生组的 6倍 .细胞迁移抑制实验表明 ,野生组与诱变组内皮抑素均对肿瘤细胞迁移有抑制作用 ,野生组迁移抑制率为 6 8 95 % ;诱变组迁移抑制率为89 94 % .上述结果说明 ,内皮抑素除抑制血管生成外 ,对肿瘤细胞的生长和迁移也有一定的抑制作用 .诱变内皮抑素通过RGDRGD序列与整合素结合而提高了抗肿瘤活性 .

关键词：内皮抑素定点突变 RGD序列抗肿瘤活性

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蛋白质转导技术及其应用

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医学分子生物学杂志 2005年第2期2卷 119-122页

作者：陶站华王淑静刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086

蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是指一类能将其他生物大分子导入多种哺乳动物细胞的小分子阳离子多肽,它可以用于研究细胞内某些蛋白质的功能,还可以与具有治疗作用的蛋白质、多肽等生物大分子偶联,在缺血、肿瘤等... 详细信息

蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是指一类能将其他生物大分子导入多种哺乳动物细胞的小分子阳离子多肽,它可以用于研究细胞内某些蛋白质的功能,还可以与具有治疗作用的蛋白质、多肽等生物大分子偶联,在缺血、肿瘤等多种疾病的治疗中有潜在的应用价值。

关键词：肿瘤治疗中多肽缺血治疗作用细胞内蛋白质转导结构域生物大分子哺乳动物细胞 PTD

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肿瘤抑素抗血管活性相关肽的表达及活性研究

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医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 157-161页

作者：付雪王淑静林雪松刘兴汉黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市150086

目的利用大肠杆菌表达系统表达肿瘤抑素抗血管活性相关肽-21肽,检测其生物学活性。方法人工合成21肽基因序列(肿瘤抑素75～95位氨基酸),克隆到表达载体pTYB2上,转化大肠杆菌BL-21(DE_3),酶切和测序鉴定后,用IPTG诱导表达融合蛋白。经几... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达系统表达肿瘤抑素抗血管活性相关肽-21肽,检测其生物学活性。方法人工合成21肽基因序列(肿瘤抑素75～95位氨基酸),克隆到表达载体pTYB2上,转化大肠杆菌BL-21(DE_3),酶切和测序鉴定后,用IPTG诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化21肽。通过MTT实验,细胞生长曲线测定,小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验及组织病理学切片研究其活性。结果获得的可溶性21肽对人脐静脉内皮细胞的生长具有抑制作用。小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验抑瘤率达42.86%。组织病理学切片结果可见H22小鼠肝癌细胞死亡,血管数量减少。结论经初步检测获得具有抗血管活性的21肽,为进一步研究肿瘤抑素的作用机制和肿瘤的临床治疗奠定了基础。

关键词：肿瘤抑素蛋白表达蛋白纯化抗血管活性

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