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哈尔滨医科大学学报 2006年第3期40卷 185-187,191页

作者：米彦军吴玲孙冰董志成初文峰潘振伟乔国芬杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的研究大明胶囊对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立大鼠急性心肌缺血模型,观察30min内心电图(ECG)变化和术后6h血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、抗超氧阴离子活性,以及心肌梗死面积来评价大明胶... 详细信息

目的研究大明胶囊对大鼠急性心肌缺血的保护作用。方法结扎冠状动脉左前降支(LAD)建立大鼠急性心肌缺血模型,观察30min内心电图(ECG)变化和术后6h血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、抗超氧阴离子活性,以及心肌梗死面积来评价大明胶囊的作用。结果大明胶囊能显著缩小冠脉结扎所致急性心肌缺血大鼠的心肌梗死面积,降低血清中CK、LDH活性,提高血清中抗超氧阴离子浓度;ECG显示各给药组与病理模型组比较S-T段明显降低(P<0.05)。结论预防性给予大明胶囊对大鼠急性心肌缺血损伤具有保护作用。

关键词：大明胶囊心肌梗死急性心肌缺血

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大明胶囊对大鼠实验性缺血心肌的保护作用

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哈尔滨医科大学学报 2006年第5期40卷 351-353,357页

作者：董志成孙冰米彦军吴玲初文峰潘振伟乔国芬杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的观察大明胶囊对大鼠实验性急性心肌缺血的保护作用。方法采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素(Pit)诱发急性心肌缺血模型,观察各组注射Pit后15min内心电图ST段、心率的变化以及6h后血清乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(... 详细信息

目的观察大明胶囊对大鼠实验性急性心肌缺血的保护作用。方法采用大鼠舌下静脉注射垂体后叶素(Pit)诱发急性心肌缺血模型,观察各组注射Pit后15min内心电图ST段、心率的变化以及6h后血清乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、肌酸激酶(CK)浓度的变化。结果大明胶囊对Pit所致急性缺血性心电图ST段抬高、降低和心率的降低都有明显对抗作用,能明显增加血清SOD的活性,降低CK和LDH的含量(P<0.05)。结论预防性给予大明胶囊对Pit致大鼠急性心肌缺血具有明显的保护作用。

关键词：心肌缺血大明胶囊垂体后叶素

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用伊文思蓝染色观察血管移植过程中血管保存液对内皮的损害

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哈尔滨医科大学学报 2006年第3期40卷 192-195页

作者：侯云龙许超千班涛哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的通过伊文思蓝(Evans blue)染色观察维拉帕米、硝酸甘油混合液(VG液)和盐酸罂粟碱溶液作为血管移植过程中的保存液对内皮层的损害,为临床应用提供依据。方法实验用雄性SD大鼠10只,随机分为2组,分别命名为A组和B组,每组5只。麻醉后SD... 详细信息

目的通过伊文思蓝(Evans blue)染色观察维拉帕米、硝酸甘油混合液(VG液)和盐酸罂粟碱溶液作为血管移植过程中的保存液对内皮层的损害,为临床应用提供依据。方法实验用雄性SD大鼠10只,随机分为2组,分别命名为A组和B组,每组5只。麻醉后SD大鼠迅速摘出胸主动脉在Krebs henseleit buffer(KHB)溶液(4℃)分割,每段长度约1cm,A组中分段后的血管分别被放入4℃的2种由不同公司提供的VG溶液中(分别称为VG1,VG2)、盐酸罂粟碱(1mg/ml)、阴性对照(KHB溶液,pH7.4)以及阳性对照(KHB溶液,pH7.4)中培养30min。B组分段后的血管分别被放入4℃的由2种VG液中不同的成分在林格液中配制后的液体(分别称为PEVG1,MaVG2)、阴性对照(KHB溶液,pH7.4)以及阳性对照(KHB溶液,pH7.4)中培养30min。取出经过上述液体处理后的血管段再经过30min连续充氧的KHB(37℃)液培养,后用Evans blue(0.17%)染色15s。而后浸泡于100μl甲酰胺溶液中过夜,取上清用分光光度计测定Evans blue浓度,再通过蛋白定量测定血管蛋白质含量,得出每微克蛋白质中的Evans blue含量。结果在A组中3种保存液与阳性对照均有差异(P<0.05),2种VG液与罂粟碱溶液有显著性差异(P<0.01)。在B组PEVG 1与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论VG液作为血管移植过程中的保存液可以最大限度的减少内皮细胞损伤,相反用盐酸罂粟碱溶液可造成内皮细胞的明显损伤。作为动脉移植过程的保存液VG液具有更安全更有效的优势。

关键词：伊文思蓝染色血管内皮完整性动脉旁路移植

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钾通道阻滞剂对人肺腺癌细胞增殖和凋亡的影响

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哈尔滨医科大学学报 2006年第1期40卷 13-16页

作者：李雪连乔国芬单宏丽杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法体外细胞培养法培养人肺腺... 详细信息

目的研究电压依赖性延迟整流钾通道阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、钙离子激活钾通道阻断剂四乙铵(tetraethylammonia,TEA)对人肺腺癌细胞(AGZY-83-a)的影响,并探讨人肺腺癌细胞株凋亡的机制。方法体外细胞培养法培养人肺腺癌细胞株,采用MTT法检测不同浓度4-AP、TEA对细胞增殖的影响。透射电镜、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡情况。比色法检测细胞内Caspase-3活性改变。结果不同浓度的4-AP、TEA作用于细胞48h后,与对照组相比各组吸光度值(A490)均明显降低(n=10,P<0.001),并且呈浓度依赖关系。4-AP、TEA组的IC50为3.59mmol/L和3.97mmol/L。4-AP及高浓度的TEA使人肺腺癌细胞株细胞凋亡率增加。经4-AP、TEA处理48h的AGZY-83-a细胞内Caspase-3的A405较正常对照组有显著增加(n=6,P<0.001)。结论钾通道阻滞剂4-AP、TEA对AGZY-83-a细胞增殖有明显的抑制作用,抑制率与药物浓度正相关。诱导人AGZY-83-a细胞凋亡,4-AP和TEA诱导AGZY-83-a细胞凋亡的过程中细胞内Caspase-3活性增加。

关键词：钾通道阻滞剂 4-氨基吡啶四乙铵 AGZY-83-a 半胱氨酸酶3

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胆碱对急性心肌缺血心律失常的作用

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哈尔滨医科大学学报 2006年第6期40卷 446-449页

作者：刘振洪龚冬梅潘振伟单璐琛乔国芬吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的观察胆碱对大鼠急性心肌缺血的作用,并探讨其作用机制。方法以结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,给予M受体激动剂胆碱和M3受体阻断剂4DAMP进行干预。观察大鼠急性心肌缺血模型心律失常发生情况和心肌细胞L型钙通道蛋白... 详细信息

目的观察胆碱对大鼠急性心肌缺血的作用,并探讨其作用机制。方法以结扎大鼠左冠状动脉前降支造成急性心肌缺血模型,给予M受体激动剂胆碱和M3受体阻断剂4DAMP进行干预。观察大鼠急性心肌缺血模型心律失常发生情况和心肌细胞L型钙通道蛋白mRNA的表达。结果①胆碱可降低大鼠急性心肌缺血模型的心律失常发生率(P<0.05);②胆碱能够使L型钙通道mRNA表达增加;③M3受体阻断剂4DAMP可逆转胆碱的上述作用(P<0.05)。结论胆碱通过激活M3受体降低了急性心肌缺血大鼠心律失常的发生率。

关键词：胆碱急性心肌缺血心律失常 L型钙通道蛋白mRNA M3受体

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TAT-凋亡素基因重组质粒的构建、蛋白的表达纯化及体内活性实验

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国际遗传学杂志 2006年第6期29卷 411-415页

作者：郑天虎陶站华刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地 150081 哈尔滨

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性... 详细信息

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定,其核苷酸片段长度和序列与预期序列相符,诱导后融合蛋白出现在上清中,纯化出的TAT-Apoptin蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论该实验所构建的重组质粒pTYB2／TAT-Apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-Apoptin,纯化后具有明显的生物活性,为TAT-Apoptin蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： TAT-凋亡素基因重组纯化几丁质亲和层析

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抗心律失常药物作用的新靶点——M_3-R/IK_(M_3)(英文)

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药学学报 2005年第1期40卷 8-12页

作者：刘艳许超千焦军东王慧珍董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 ... 详细信息

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 diphenylacetoxy N methylpiperidine methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常,而M3受体激动剂胆碱能明显对抗其作用。其他亚型受体阻断剂,M1受体阻断剂 (prienzepine)、M2受体阻断剂(methotramine)和M4受体阻断剂 (tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响。在膜片钳实验中发现,胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IKM3 ),此电流可被M3受体阻断剂 4DAMP明显抑制。而M1,M2和M4受体阻断剂对胆碱介导的电流无作用。结论　胆碱通过激动心肌M3受体诱发一外向钾电流 (IKM3 ),并在维持心脏离子通道平衡中起重要作用。M3受体 /IKM 可能是抗心律失常新靶点。

关键词：心肌缺血心律失常 M3受体延迟整流电流

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肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 322-328页

作者：王淑静刘岩林雪松付雪徐建永刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋... 详细信息

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物.

关键词：肿瘤抑素,蛋白质表达,蛋白质纯化,肿瘤治疗

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重组人内皮抑素的结构改造及抗肿瘤活性变化

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第1期21卷 45-52页

作者：任明华王淑静林雪松徐建永陶站华赵炜明刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑... 详细信息

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑素的抑瘤率分别为 4 0 6 6 %和5 1 0 5 % ,诱变内皮抑素抑瘤率比野生内皮抑素提高了近 11个百分点 .病理切片HE染色诱变组肿瘤的血管生成比野生组明显减少 ,坏死灶增多 .免疫组化试验中 ,诱变组在微血管密度MVD(P <0 0 5 )、血管内皮生长因子VEGF(P <0 0 5 )、增殖细胞核抗原PCNA(P >0 0 5 )三个指标上均比野生组减小 .体外细胞实验中 ,MTT结果表明 ,野生组内皮抑素半数抑制浓度IC50 =185 μg ml,诱变组内皮抑素IC50 =2 7μg ml,诱变组抑瘤活性是野生组的 6倍 .细胞迁移抑制实验表明 ,野生组与诱变组内皮抑素均对肿瘤细胞迁移有抑制作用 ,野生组迁移抑制率为 6 8 95 % ;诱变组迁移抑制率为89 94 % .上述结果说明 ,内皮抑素除抑制血管生成外 ,对肿瘤细胞的生长和迁移也有一定的抑制作用 .诱变内皮抑素通过RGDRGD序列与整合素结合而提高了抗肿瘤活性 .

关键词：内皮抑素定点突变 RGD序列抗肿瘤活性

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积分法:一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流的方法(英文)

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中国药理学与毒理学杂志 2005年第1期19卷 64-69页

作者：董德利孙志洁焦军东岳朋王庆徽方志伟杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨工业大学材料科学与工程学院黑龙江哈尔滨150001

目的　评价一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流 (Ito)的积分方法。方法　Ito的失活相可被 2指数或 3指数方程拟合。原始电流曲线下面积 (AUC)可通过指数方程积分获得。以细胞膜电容标准化后的曲线下面积表示除极化时程中钾离子... 详细信息

目的　评价一种药理学中分析电压依赖性瞬时外向钾电流 (Ito)的积分方法。方法　Ito的失活相可被 2指数或 3指数方程拟合。原始电流曲线下面积 (AUC)可通过指数方程积分获得。以细胞膜电容标准化后的曲线下面积表示除极化时程中钾离子的净通量 ,作为比较指标。钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞表现Ito下调 ,此数据用于验证Ito的积分分析方法的可靠性。结果　AUC可通过 3指数或2指数方程的积分公式获得 :AUC =A1τ1+A2 τ2 +A3τ3+A0 t -A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 -A3τ3e-t/τ3或AUC =A1τ1+A2 τ2 +A0 t-A1τ1e-t/τ1-A2 τ2 e-t/τ2 。小鼠心室肌 5 0 %和 90 %动作电位时程分别约为 10ms和 30ms。将Ito0～ 10ms (AUC50 )和 0～ 30ms(AUC90 )的曲线下面积以细胞膜电容进行标准化。野生型鼠心肌细胞的AUC50 和AUC90 明显高于钙调磷酸酶过表达转基因鼠 ,此结果与转基因鼠心室肌细胞动作电位时程延长相一致 ,与前期发表结果一致 (钙调磷酸酶过表达转基因鼠心肌细胞Ito各成分下调 )。结论　积分法是药理学中一种简便准确的分析Ito的方法。

关键词：电生理学钾通道电压依赖性瞬时外向钾电流积分指数拟合

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