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中国药理学会生化与分子药理专业委员会2014年研讨会

作者：张荣孙丽华杨宝峰艾静哈尔滨医科大学药理教研室省部共建国家重点实验室培育基地-黑龙江省生物医药工程重点实验室哈尔滨150081

目的:检测急性心肌梗死(AMI)患者血浆中microRNA-1 (miR-1)的表达水平,并探讨其与AMI发生的关系,揭示其潜在的临床意义.方法:研究对象包括AMI患者93例(其中有多普勒超声心动图的患者49例)和健康体检人群66例,共计159例.通过外周血的采集...

目的:检测急性心肌梗死(AMI)患者血浆中microRNA-1 (miR-1)的表达水平,并探讨其与AMI发生的关系,揭示其潜在的临床意义.方法:研究对象包括AMI患者93例(其中有多普勒超声心动图的患者49例)和健康体检人群66例,共计159例.通过外周血的采集,应用荧光实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术对其血浆中的miR-1表达水平进行定量.miR-1表达量的变化采用Wilcoxon秩和检验进行组间比较(对照组和AMI组),Wilcoxon符号秩和检验进行成对比较(AMI组入院时及出院时).采用线性回归和逻辑回归分析以及Pearson相关性分析评价miR-1同临床指标和心功能指标的相关性.

关键词：

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抑制外周神经肽Y1及Y2受体改善链脲佐菌素诱导的糖尿病小鼠的压力反射敏感性(英文)

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生理学报 2013年第4期65卷 370-380页

作者：牛慧芳徐玲颜妍谢芳杨宝峰艾静哈尔滨医科大学药理学教研室省部共建生物医药国家重点实验室

神经肽Y(NPY)是一种与心血管自主神经功能障碍和多种心脏疾病都密切相关的交感神经递质。心血管自主神经功能障碍与心血管损伤又有着密切的联系。本文旨在研究参与心血管功能调控并分布于心脏的NPY受体的两个亚型Y1受体(Y1R)和Y2受体(Y... 详细信息

神经肽Y(NPY)是一种与心血管自主神经功能障碍和多种心脏疾病都密切相关的交感神经递质。心血管自主神经功能障碍与心血管损伤又有着密切的联系。本文旨在研究参与心血管功能调控并分布于心脏的NPY受体的两个亚型Y1受体(Y1R)和Y2受体(Y2R)对链脲佐菌素(STZ)诱导产生的糖尿病小鼠压力反射敏感性(baroreflex sensitivity,BRS)的影响。将装有NPYY1R和Y2R特异性拮抗剂(分别为BIBP3226和BIIE0246)的ALZET渗透压泵植入到STZ诱导的糖尿病小鼠的皮下4周。然后对小鼠基线收缩压、心率、心功、压力反射敏感性、血浆NPY和脂质水平进行检测。结果显示,STZ可以使血浆NPY水平上升1.64倍(P<0.05),血脂升高;STZ的升血脂作用可以被Y1R和Y2R拮抗剂削弱。BIBP3226可以改善STZ诱导的异常BRS,但对STZ小鼠下降的心功能没有明显作用。BIIE0246虽然可以改善硝普钠(SNP)介导的STZ小鼠压力反射性心率改变,但对于去氧肾上腺素(PE)介导的压力反射性心率改变没有明显影响。BIIE0246还可以改善STZ诱导的心动过缓,但却加重了STZ大鼠心功能损伤。以上结果表明,外周NPYY1及Y2受体对STZ诱导的糖尿病小鼠的BRS损伤中具有不同的作用。

关键词：神经肽Y 压力反射敏感性 BIBP3226 BIIE0246 糖尿病

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丹参酮ⅡA调节microRNA-1保护缺氧心肌细胞的作用研究

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现代生物医学进展 2014年第28期14卷 5463-5467页

作者：李雪连关会林王璐郭瑞赵丹丹郭振丰张佳琳单宏丽哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150081 心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081 牡丹江医学院黑龙江牡丹江157011

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内... 详细信息

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内钙离子[Ca2+]i浓度的变化情况。结果:MTT结果显示丹参酮ⅡA对缺氧心肌细胞及过表达miR-1引起心肌细胞损伤具有保护作用。丹参酮ⅡA增加了缺氧心肌细胞的存活率(P<0.05),同时给予丹参酮ⅡA和miR-1组与单独miR-1损伤组相比较,存活率也明显升高,呈现剂量依赖性。TUNEL结果显示丹参酮ⅡA可以抑制缺氧诱导的细胞凋亡,丹参酮ⅡA可以明显降低由缺氧导致的细胞凋亡率(P<0.05)。共聚焦检测结果显示,缺氧损伤的心肌细胞内[Ca2+]i显著升高1322.72±5.16(vs正常对照组,P<0.05),丹参酮ⅡA则有效抑制由缺氧引起过高的[Ca2+]i。miR-1诱导的细胞内[Ca2+]i升高至1349.33±62.63,约为正常对照组的1.96倍,而丹参酮ⅡA则有效抑制胞内过高的[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。结论:丹参酮ⅡA可能是通过抑制胞内miR-1的表达,参与对钙离子浓度的调控,发挥其对心肌细胞的保护作用。

关键词：丹参酮ⅡA 缺氧心肌细胞 miR-1 细胞内钙细胞凋亡

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急性心肌梗死后血浆中升高的microRNA-1与QT离散度的相关性研究

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中国药理学通报 2013年第2期29卷 253-256页

作者：张荣徐毅王晓丹牛慧芳张涛何美娇孙荣哈尔滨医科大学药理学教研室省-部共建生物医药国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学统计学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一临床医院心内科黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二临床医院心内科黑龙江哈尔滨150081

目的研究急性心肌梗死后血浆中升高的microRNA-1(miR-1)与QT离散度(QTd)的相关性及临床意义。方法选取急性心肌梗死(AMI)患者53例[无室性心律失常(VA)者40例、有VA者13例],健康对照人群49例,对血浆中miR-1的表达含量进行绝对定量,并测... 详细信息

目的研究急性心肌梗死后血浆中升高的microRNA-1(miR-1)与QT离散度(QTd)的相关性及临床意义。方法选取急性心肌梗死(AMI)患者53例[无室性心律失常(VA)者40例、有VA者13例],健康对照人群49例,对血浆中miR-1的表达含量进行绝对定量,并测定心电图QT间期计算出QTd及校正的QTcd,再进行相关性分析。结果AMI患者血浆中miR-1的实际表达量和QTd及QTcd值均高于正常对照人群,而且有VA者的QTd及QTcd值均大于无VA者,QTd的延长与VA的发生密切相关,血浆中的miR-1表达水平与QTd呈正相关性。结论 AMI患者血浆中miR-1与QTd具有良好的正相关性,二者联合对AMI患者预警恶性心律失常的发生、近期预后评估具有重要的临床参考价值。

关键词：急性心肌梗死 microRNA-1 血浆 QT离散度室性心律失常预警

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微小RNA--心血管疾病药物研发新靶点

微小RNA--心血管疾病药物研发新靶点

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2013中国药学大会暨第十三届中国药师周

作者：杨宝峰张勇单宏丽初文峰吕延杰哈尔滨医科大学药理学教研室省部共建生物医药国家重点实验室

心肌纤维化是心肌重构的重要环节,普遍存在于心肌梗死、慢性充血性心力衰竭等心脏疾病中.明确其发病机制,对于预防和治疗不同类型心脏疾病均有重大意义.本研究应用特异性miRNA转基因小鼠模型,通过功能获得与功能缺失等方法研究miRNA在... 详细信息

心肌纤维化是心肌重构的重要环节,普遍存在于心肌梗死、慢性充血性心力衰竭等心脏疾病中.明确其发病机制,对于预防和治疗不同类型心脏疾病均有重大意义.本研究应用特异性miRNA转基因小鼠模型,通过功能获得与功能缺失等方法研究miRNA在心脏疾病中的作用.研究发现野生型小鼠心脏左冠状动脉结扎后心肌发生纤维化,其梗死边缘区miRNA表达量异常增高.心脏特异性过表达该miRNA的小鼠,其心肌发生间质纤维化,进而发展为扩张型心肌病和心力衰竭.相反，心脏特异性敲除该miRNA的小鼠，其左冠状动脉结扎后，纤维化程度明显降低;应用其反义寡核糖核普酸AMO处理培养的心肌成纤维细胞可显著减少胶原分泌量。其作用机制是该miRNA可直接靶向转化生长因子受体(TGFBR)，促进Ⅰ型与Ⅱ型受体复合物的形成，并激活TGF-β信号通路。在心肌成纤维细胞中，该miRNA靶向TGFBR激活TGF-β信号通路后，可诱导胶原分泌量增加，而AMO可消除该作用。研究发现提示该miRNA是心肌间质纤维化的潜在功能性调控因子，并可成为治疗心肌纤维化的潜在靶点。

关键词：心血管疾病病理机制药物研发基因调控

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microRNAs在结直肠癌中的研究进展

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中华结直肠疾病电子杂志 2012年第1期1卷 1-5页

作者：杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室省部共建生物医药国家重点实验室心血管药物研究教育部重点实验室哈尔滨150081

microRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码RNA,通过与靶基因3’端非编码区结合,抑制靶miRNAs翻译或直接使其降解,参与调节多种生理和病理过程。近年来大量研究表明,miRNAs在结直肠癌发生与发展过程中扮演着促癌或抑癌基因... 详细信息

microRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的内源性非编码RNA,通过与靶基因3’端非编码区结合,抑制靶miRNAs翻译或直接使其降解,参与调节多种生理和病理过程。近年来大量研究表明,miRNAs在结直肠癌发生与发展过程中扮演着促癌或抑癌基因的角色,可作为诊断标志物和治疗靶点。结直肠癌是一类高发病率和高死亡率的肠道肿瘤。本文对miRNAs在结直肠癌中的作用机制、诊断、治疗及耐药性等最新研究进展予以阐述。

关键词：微RNAs 结直肠肿瘤早期诊断预后

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三氧化二砷与白藜芦醇联用对急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞存活率的影响

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中国地方病学杂志 2011年第1期30卷 9-12页

作者：于金玲何开文初文峰朴贤美乔国芬吕延杰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地150081

目的观察三氧化二砷（ATO）与白藜芦醇（Res）联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法采用不同剂量的ATO[0（对照）、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol... 详细信息

目的观察三氧化二砷（ATO）与白藜芦醇（Res）联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法采用不同剂量的ATO[0（对照）、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol/L]、Res[0（对照）、1.5625、3.1250、6.2500、12.5000、18.7500、25.0000、37.5000、50.0000 μmol/L]孵育NB4细胞.应用四氮唑盐比色法（MTT）检测不同处理组的细胞存活率,计算ATO和Res对NB4细胞的半数抑制浓度（IC50）.根据IC50,设置联合用药比例分别为1.5∶18、.5∶25、.5∶35,并根据药物联合指数计算公式,分别计算出联合用药在不同抑制效应（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9）时的联合指数,判断ATO与Res在不同抑制效应时各自所需药物浓度之间的相互作用.应用DCFH-DA荧光探针检测对照组、ATO（1.5000 μmol/L）加药组、Res（25.0000 μmol/L）加药组、联合用药组（0.9000 μmol/L ATO＋12.5000 μmol/L Res）NB4细胞活性氧（ROS）水平,每组各检测10份样品.结果 ①ATO（≥0.7500 μmol/L）加药组NB4细胞存活率明显低于对照组（P＜0.05）,呈剂量依赖性的量效关系,IC50为（1.78±0.11）μmol/L.②Res（≥18.7500 μmol/L）加药组NB4细胞存活率明显低于对照组（P＜0.05）,呈剂量依赖性的量效关系,IC50为（18.71±0.18）μmol/L.③ATO和Res联合应用对NB4细胞存活抑制效应呈现拮抗作用.④Res加药组NB4细胞内ROS水平（1670.55±13.97）明显低于对照组（2345.88±14.48,P＜0.05）.ATO加药组NB4细胞内ROS水平（3092.42±94.84）明显高于对照组（P＜0.05）.联合用药组NB4细胞内ROS水平（1860.27±15.99）明显低于ATO加药组（P＜0.05）.结论 ATO、Res均可致NB4细胞存活率下降,而两者联合应用时表现为拮抗效应,ROS可能参与了这种拮抗作用.

关键词：三氧化二砷白藜芦醇 NB4细胞药物拮抗作用细胞存活

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心律失常调节的新靶点--microRNA的研究进展与应用前景

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药学学报 2011年第1期46卷 6-11,4页

作者：张荣董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

转化医学是近年来提出的关于基础与临床密切结合的新概念,其目的是实现基础研究成果真正转化为临床实践。microRNA(miRNA)是新发现的基因表达调控因子,由长约21～25核苷酸的单链RNA分子构成。近年来,miRNA在心血管系统中的关键调控作用... 详细信息

转化医学是近年来提出的关于基础与临床密切结合的新概念,其目的是实现基础研究成果真正转化为临床实践。microRNA(miRNA)是新发现的基因表达调控因子,由长约21～25核苷酸的单链RNA分子构成。近年来,miRNA在心血管系统中的关键调控作用不断得以阐明,尤其是在心律失常中的调节作用,取得了令人瞩目的研究成果。一系列研究证实miRNA参与调控多种心脏电活动相关蛋白的表达,是心律失常发生和抗心律失常药物作用的潜在靶点。miRNA作为治疗靶点通过调节靶基因mRNA的稳定性或抑制翻译过程而发挥作用。在靶器官中稳定相应miRNA的表达水平可能成为疾病治疗的一个新方式。本文将从miRNA表达改变引起功能失调这一角度,采用拟miRNA技术和抗miRNA技术纠正靶蛋白的功能,为心律失常的治疗提供新的切入点。借助miRNA类似物(miRNA mimics)和胆固醇连接的miRNA反义核苷酸抑制剂(antagomirs),miRNA用于治疗多种心血管疾病有望实现,将为转化医学的实现注入新的动力。

关键词：转化医学 microRNA 心律失常

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心脏复极储备电流I_(Ks)在糖尿病QT间期延长性别差异中的作用

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中国病理生理杂志 2011年第1期27卷 124-128页

作者：王冰曹颜秀洪远张佳琳赵梅李雪连单宏丽哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学省部共建生物医药国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:观察不同性别糖尿病家兔QT间期延长病理条件下的缓慢延迟整流钾电流(IKs)以及蛋白变化,为探讨糖尿病性长QT综合征性别差异的离子机制做基础。方法:取体重2-2.5 kg家兔,一次性注射预热(37℃)的四氧嘧啶(140 mg/kg),8周后造成1型糖... 详细信息

目的:观察不同性别糖尿病家兔QT间期延长病理条件下的缓慢延迟整流钾电流(IKs)以及蛋白变化,为探讨糖尿病性长QT综合征性别差异的离子机制做基础。方法:取体重2-2.5 kg家兔,一次性注射预热(37℃)的四氧嘧啶(140 mg/kg),8周后造成1型糖尿病模型,测定血糖,记录标准II导联心电图,采用酶解法分离家兔单个心室肌细胞,应用全细胞膜片钳技术记录动作电位时程(APD)和IKs,并且运用Western blotting法检测KvLQT1和mink蛋白表达变化。结果:雌雄糖尿病组QT间期和APD均较对照组延长,雄性延长明显,且延长百分比差异显著(P<0.05)。在+40 mV到+70 mV测试电压范围内,雄性糖尿病组IKsstep电流密度均低于对照组(P<0.05),在+70 mV时,由对照组(3.08±0.67)pA/pF(n=17)降低到(1.27±0.20)pA/pF(n=16),在0 mV^+70 mV测试电压范围内,雌性糖尿病组IKsstep电流密度均高于对照组(P<0.05),在+70 mV时,由对照组的(1.56±0.20)pA/pF(n=13)增加到(3.65±0.50)pA/pF(n=14)。Western blotting结果显示雄性糖尿病组Kv-LQT1和mink蛋白表达水平分别下调21.6%和18.5%;雌性糖尿病组KvLQT1和mink蛋白表达水平分别上调42.3%和20.5%(P<0.05)。结论:IKs参与了糖尿病QT间期延长的发生,并且存在性别差异。在雌性家兔早期糖尿病模型中,作为一个复极储备,代偿性上调,限制了QT间期的过度延长。

关键词：糖尿病 QT间期延长缓慢延迟整流钾电流膜片钳术

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重组人表皮生长因子的构建与表达

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哈尔滨医科大学学报 2011年第4期45卷 297-300页

作者：李姗姗朱晓美鲍岩岩朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药教研室哈尔滨医科大学药学院省部共建教育部生物医药工程重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的应用原核表达系统研究提高重组表皮生长因子(rhEGF)产量的方法。方法用RT-PCR方法克隆hEGF基因并插入表达载体pGEX-4T-1,获得重组的表达质粒pGEX-4T-1-hEGF转化大肠杆菌BL21并筛选得到工程菌株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导目的... 详细信息

目的应用原核表达系统研究提高重组表皮生长因子(rhEGF)产量的方法。方法用RT-PCR方法克隆hEGF基因并插入表达载体pGEX-4T-1,获得重组的表达质粒pGEX-4T-1-hEGF转化大肠杆菌BL21并筛选得到工程菌株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导目的蛋白表达,亲和层析纯化rhEGF,MTT法测定活性。结果成功扩增获得hEGF基因,部分表达产物为可溶性的、部分形成包涵体。菌体裂解上清液经亲和层析纯化后纯度达98%,复性后的rhEGF具有促细胞生长活性。结论成功构建并原核表达了重组人表皮生长因子基因,其表达产物具有很好的促细胞增殖活性。

关键词：人表皮生长因子原核表达生物活性

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