检索结果-内蒙古大学图书馆

中国药理通讯 2010年第2期27卷 16-16页

作者：杨宝峰吕延杰单宏丽潘振伟蔡本志张勇哈尔滨医科大学药学院药理教研室哈尔滨医科大学省部共建生物医药国家重点实验室培育基地哈尔滨150081

microRNA（miRNA）是一类约22个核苷酸的内源性非编码RNA，通过与靶mRNA的3＇非翻译区（3’UTR）不完全性互补配对，介导转录后基因调控。近年来大量实验研究显示miRNA参与了肿瘤、心力衰竭、感染等重大疾病的发生发展过程。我们研究发... 详细信息

microRNA（miRNA）是一类约22个核苷酸的内源性非编码RNA，通过与靶mRNA的3＇非翻译区（3’UTR）不完全性互补配对，介导转录后基因调控。近年来大量实验研究显示miRNA参与了肿瘤、心力衰竭、感染等重大疾病的发生发展过程。我们研究发现miRNA是导致恶性心律失常和心源性猝死的新靶点。

关键词：抗心律失常药物新靶点 miRNA 非编码RNA 恶性心律失常心源性猝死非翻译区基因调控

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槲寄生黄酮苷对大鼠心肌缺血的保护作用及其机制

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中草药 2009年第1期40卷 78-82页

作者：李晶刘清梅王志勇乔国芬吕延杰初文峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的观察槲寄生黄酮苷对心肌缺血大鼠的保护作用,并进一步明确其对血小板激活因子(PAF)的调控作用。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,通过观察不同剂量槲寄生黄酮苷(15、75mg/kg)及PAF受体特异性阻断剂BN52021(10mg/... 详细信息

目的观察槲寄生黄酮苷对心肌缺血大鼠的保护作用,并进一步明确其对血小板激活因子(PAF)的调控作用。方法结扎大鼠冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,通过观察不同剂量槲寄生黄酮苷(15、75mg/kg)及PAF受体特异性阻断剂BN52021(10mg/kg)对梗死范围的影响,对比评价槲寄生黄酮苷对缺血心肌的保护作用;分离正常大鼠心肌细胞,Fluo-3/AM荧光染色,采用共聚焦显微镜技术研究,预先给予不同剂量槲寄生黄酮苷30min后对PAF(1×10-11mol/L)诱导心肌细胞钙超载的拮抗作用。结果与模型组比较,槲寄生黄酮苷和BN52021均可缩小大鼠梗死心肌范围,降低心肌梗死大鼠血清乳酸脱氢酶(LDH),丙二醛(MDA)水平,提高血清超氧化物歧化酶(SOD)水平,并成剂量效应关系。PAF可直接诱导心肌细胞钙超载,而槲寄生黄酮苷和BN52021可直接对抗这种钙超载作用。结论槲寄生黄酮苷对心肌缺血具有保护作用,作用机制与其抑制PAF诱导心肌细胞内钙超载有关,PAF信号通路阻断药物可能成为抗心肌缺血药物的研究靶点。

关键词：槲寄生血小板激活因子(PAF) 心肌缺血

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卡维地洛对HERG钾通道电生理功能及蛋白表达的影响

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中国药理学通报 2009年第6期25卷 737-742页

作者：史珊珊胡美钦戚志平佘柽柏刘冬敏李宝馨杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的探讨卡维地洛对稳定转染HERG基因的HEK(human embryonic kidney)293细胞上的HERG钾通道的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录在HEK293细胞上稳定表达的HERG钾通道的电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去激活),研究不同浓度卡维... 详细信息

目的探讨卡维地洛对稳定转染HERG基因的HEK(human embryonic kidney)293细胞上的HERG钾通道的影响。方法应用全细胞膜片钳技术记录在HEK293细胞上稳定表达的HERG钾通道的电流和动力学曲线(激活、失活、复活和去激活),研究不同浓度卡维地洛对HERG电流及动力学的影响;用Western blot技术定量的观察不同浓度卡维地洛对定位于HERG-HEK细胞膜上的HERG钾通道蛋白表达的影响。结果卡维地洛(10、100nmol.L-1,1、10μmol.L-1)浓度依赖性的抑制HERG步阶电流(Istep)及其尾电流(Itail)。由Hill方程得出IC50为539.6nmol.L-1,Hillslope为-0.64。1μmol.L-1卡维地洛作用后瞬时失活、去激活时间常数明显降低(P<0.05,n=10),而激活、失活、复活动力学无明显改变;Western blot检测结果显示卡维地洛组与无加药对照组HERG蛋白的表达无差别。结论卡维地洛通过影响通道的开放状态抑制HERG钾电流,加速瞬时失活和去激活动力学,对HERG蛋白的表达及成熟无影响。

关键词：卡维地洛 HERG钾通道膜片钳技术 Western blot 技术

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一类新的调控心律失常发生的靶点——microRNAs

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药学学报 2009年第8期44卷 833-837页

作者：蔡本志吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学心血管药物研究所黑龙江哈尔滨150081

microRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的非编码小分子RNA,通过与靶蛋白mRNA3'端非编码区的不完全互补结合,抑制靶mRNA转录后的表达。最近大量研究显示miRNA在心脏病理、生理过程中发挥重要的调控作用,尤其与心律失常的发生、发展... 详细信息

microRNAs(miRNAs)是一类长约22个核苷酸的非编码小分子RNA,通过与靶蛋白mRNA3'端非编码区的不完全互补结合,抑制靶mRNA转录后的表达。最近大量研究显示miRNA在心脏病理、生理过程中发挥重要的调控作用,尤其与心律失常的发生、发展密切相关。miRNA过度上调或下调可引起离子通道蛋白表达紊乱,致离子通道平衡失调,诱发心律失常。本文将从与心律失常发生相关的心肌缺血、心肌肥厚和糖尿病心肌病三个方面就miRNA在心律失常中的调控作用作一综述。旨在揭示miRNA变化在心脏疾病发生、发展中的重要地位,并探讨以miRNA为靶点防治心律失常以及心源性猝死的可行性。

关键词： microRNA 心律失常 mRNA 离子通道

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兔抗人羧酸酯酶1多克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第6期25卷 516-518页

作者：朱晓美李淑珍吴春铃包红霞朱大岭唐晓波哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵... 详细信息

目的:制备兔抗人羧酸酯酶1(CES1)多克隆抗体(pAb),并对抗体进行特性鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CES1(即CES1-GST)和pET-32a-CES1(即CES1-His)。CES1-GST融合蛋白作为免疫原制备兔pAb,辛酸-硫酸铵法纯化抗体,采用Western blot和免疫组化鉴定抗体的特异性。结果:CES1-GST和CES1-His融合蛋白均在大肠杆菌中以包涵体形式大量表达。兔抗人CES1pAb效价为1∶64000。Western blot鉴定表明,该抗体可识别重组人CES1蛋白,也可特异地识别人肝微粒体中的CES1亚基。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性识别正常肝组织中的CES1蛋白。结论:成功地制备了兔抗人CES1pAb,该抗体可应用于ELISA、Western blot、免疫组化等实验,为进一步研究CES1的功能提供了特异性检测工具。

关键词： CES1 重组蛋白多克隆抗体

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鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第5期25卷 454-456页

作者：包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠... 详细信息

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。

关键词： CD20 原核表达融合蛋白抗体制备

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抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 158-160,163页

作者：吴春铃包红霞唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在... 详细信息

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。

关键词： hCE-Ⅱ 原核表达融合蛋白多克隆抗体

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伴胰岛素抵抗的糖尿病大鼠抗氧化能力测定及临床评价

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中国药理学通报 2009年第6期25卷 836-837页

作者：卢圆王丽宏王宁梁峰赵静周宏宇杨宝峰艾静哈尔滨医科大学药理学教研室·黑龙江省生物医药重点实验室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二临床医院内分泌科黑龙江哈尔滨150081

糖尿病(diabetes mellitus,DM)为一种常见病,其患病率呈上升趋势,且并发症严重,致死致残率高。其中2型糖尿病约占整个糖尿病患者的90%－95%,由于2型糖尿病的病因复杂,其发病机制至今尚未完全阐明。近年来,越来越多的研究表明,氧化应激... 详细信息

糖尿病(diabetes mellitus,DM)为一种常见病,其患病率呈上升趋势,且并发症严重,致死致残率高。其中2型糖尿病约占整个糖尿病患者的90%－95%,由于2型糖尿病的病因复杂,其发病机制至今尚未完全阐明。近年来,越来越多的研究表明,氧化应激和糖尿病及其并发症的发生、发展关系密切。既往本实验室通过灌胃脂肪乳辅以小剂量四氧嘧啶建立了伴有胰岛素抵抗的Wistar大鼠2型糖尿病的动物模型,本研究从机体抗氧化能力的角度对所建模型与临床2型糖尿病患者进行对照,进一步探讨2型糖尿病动物模型的可靠性、实用性。[第一段]

关键词： 2型糖尿病动物模型临床研究抗氧化能力

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Caveolin-3在心房纤颤组织中的表达

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哈尔滨医科大学学报 2009年第3期43卷 211-214页

作者：陈艳艳张莹王宁路慧敏梁海海王然沐晓芹吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的探讨犬心房纤颤(atrial fibrillation,AF)模型中微囊蛋白-3(Caveolin-3)蛋白表达情况。方法建立犬房颤(AF)模型,通过免疫荧光染色和Western blot技术检测心房快速起搏建立的犬AF模型及AF患者心房肌的Caveolin-3蛋白表达情况。结果... 详细信息

目的探讨犬心房纤颤(atrial fibrillation,AF)模型中微囊蛋白-3(Caveolin-3)蛋白表达情况。方法建立犬房颤(AF)模型,通过免疫荧光染色和Western blot技术检测心房快速起搏建立的犬AF模型及AF患者心房肌的Caveolin-3蛋白表达情况。结果在犬和人房颤的心房组织,Western blot结果显示Caveolin-3蛋白表达明显降低,与非房颤组织相比P<0.05。在犬假手术组和窦性心律的患者,免疫荧光结果显示位于心房组织细胞膜上Caveolin-3蛋白表达明显,并均匀分布在细胞膜表面;而在AF状态下,人和犬心房肌Caveolin-3蛋白表达显著降低。结论Caveolin-3参与了AF这一临床复杂病症的发生和发展。

关键词：心房纤颤微囊蛋白-3 蛋白表达

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MicroRNA-133对心肌细胞内钙的调节机制

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哈尔滨医科大学学报 2009年第4期43卷 328-332页

作者：沐晓芹张莹梁海海李超陈艳艳吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的研究微小RNA133(microRNA-133,miRNA-133)对乳鼠心肌细胞内钙浓度的调节机制。方法利用lipofectamine2000将miRNA-133转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,采用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA-133对L型钙通道蛋白表达的影响,并采用激光... 详细信息

目的研究微小RNA133(microRNA-133,miRNA-133)对乳鼠心肌细胞内钙浓度的调节机制。方法利用lipofectamine2000将miRNA-133转染到原代培养的乳鼠心肌细胞中,采用细胞免疫荧光染色方法检测miRNA-133对L型钙通道蛋白表达的影响,并采用激光共聚焦显微镜检测miRNA-133对心肌细胞内钙浓度的影响。结果与对照组相比,转染miRNA-133的乳鼠心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著降低,细胞内钙荧光强度也明显降低(P<0.05),转染AMO133(miRNA-133的反义链,可特异性阻断miRNA-133)的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度显著增强,细胞内钙荧光强度也明显增加(P<0.05),miRNA-133和AMO133共转染的心肌细胞钙通道蛋白的荧光强度和细胞内钙荧光强度与对照组相比无明显变化。结论MiRNA-133通过抑制L型钙通道蛋白的表达而降低心肌细胞内的钙浓度。

关键词： miRNA-133 心肌细胞细胞钙浓度 L型钙通道

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