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第九届全国心血管药理学术会议

目的：研究脑缺血后心肌细胞离子通道的改变。方法：80只 Wistar 雄性大鼠,分为两组：正常对照组,脑缺血24小时组。应用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型。两小时内连续监测心电图变化。每组随机选取6只,通过酶解法分离心室肌细胞,记录... 详细信息

目的：研究脑缺血后心肌细胞离子通道的改变。方法：80只 Wistar 雄性大鼠,分为两组：正常对照组,脑缺血24小时组。应用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型。两小时内连续监测心电图变化。每组随机选取6只,通过酶解法分离心室肌细胞,记录钾电流(I,I),钙电流(I)以及动作电位时程（APD）。每组随机选取4只,电镜检测心肌组织病理变化。结果：71%大鼠有心电图改变;脑

关键词：心律失常大脑中动脉栓塞离子通道

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脑心综合征大鼠心肌细胞内Ca2+对KCl除极的反应性增强

脑心综合征大鼠心肌细胞内Ca2+对KCl除极的反应性增强

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第九届全国心血管药理学术会议

目的研究脑心综合征（cerebro-cardiac syndrome,CCS）心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca]i)对 KCI 除极的反应性,通过心肌[Ca]i 的变化来探讨脑心综合征心律失常的发生机制。方法 Wistar 大鼠随机分为正常组、假手术组、脑心综合征2h 组、... 详细信息

目的研究脑心综合征（cerebro-cardiac syndrome,CCS）心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca]i)对 KCI 除极的反应性,通过心肌[Ca]i 的变化来探讨脑心综合征心律失常的发生机制。方法 Wistar 大鼠随机分为正常组、假手术组、脑心综合征2h 组、脑心综合征24h 组,模型的制作采用线栓法栓塞右侧大脑中动脉建立。采用酶法分离心肌细胞,Fluo—3/AM 负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观

关键词：大鼠心肌细胞综合征 KCl

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中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

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第六届全国中药新药研究与开发信息交流会

作者：杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理教研室，省部共建生物医药工程国家重点实验室培育基地，黑龙江哈尔滨 150081

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条... 详细信息

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条件下HERG通道的改变，同时确定药物对其调控作用。

关键词：中药 HERG钾通道心血管疾病分子克隆膜片钳调控作用

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人内皮抑素抗肿瘤相关肽基因的克隆表达及活性研究

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医学分子生物学杂志 2007年第6期4卷 475-479页

作者：李丹刘兴汉赵炜明李冀宏马洪星张宇雯栗亚哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室--省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150081

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽，检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1—30位氨基酸（30肽，序列25—31由RGIRGAD改为RGDRGD）所对应的核苷酸序列，连接到质粒pTYB2中，再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，几丁质亲和... 详细信息

目的克隆并表达人内皮抑素抗肿瘤相关肽，检测其生物活性。方法人工合成人内皮抑素1—30位氨基酸（30肽，序列25—31由RGIRGAD改为RGDRGD）所对应的核苷酸序列，连接到质粒pTYB2中，再转化至大肠埃希菌BL21（DE3）中表达，几丁质亲和层析树脂一步纯化30肽。通过MTT法、鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）实验、小鼠体内抑瘤实验比较30肽和内皮抑素抗肿瘤活性。结果 MTT证实30肽体外对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）、胃癌7901细胞（SGC-7901）半数抑制浓度IC50为36μg／ml、47μg／nl，显著低于内皮抑素IC50179μg／ml、202μg／ml。CAM实验中30肽对血管的抑制作用更强。30肽在小鼠体内抑瘤率47．8％，效果优于内皮抑素28．7％。结论 30肽具有更强抗肿瘤活性，有可能成为治疗肿瘤的一种新药物。

关键词：内皮抑素 RGD序列克隆基因表达抗肿瘤活性

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唯BH3域蛋白与细胞凋亡

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医学分子生物学杂志 2007年第2期4卷 143-146页

作者：张宇雯刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086

唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路... 详细信息

唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路中起重要作用。有些唯BH3域蛋白在内质网通路和死亡受体通路中也起到一定作用。对该类蛋白的研究将有助于深化对凋亡的认识,并为疾病治疗提供新的方法和思路。

关键词：唯BH3域蛋白线粒体凋亡

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人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化

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国际遗传学杂志 2007年第3期30卷 169-172页

作者：马洪星栗亚张宇雯李冀宏刘岩刘远莉李丹刘兴汉黑龙江省部共建国家重点实验室培育基地一黑龙江省生物医药工程重点实验室哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆... 详细信息

目的构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化。方法人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导其融合表达,对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析,DTY诱导柱上裂解以获得T21RGD肽。经Trcine- SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定。结果质粒酶切和测序结果显示,含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50%以上,Trcine- SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符,反相高效液相色谱测定峰纯度达97%。结论成功构建T21RGD肽融合表达载体,实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化,为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础。

关键词：肿瘤抑素 RGD序列基因重组纯化

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各种心律失常模型中心肌M3受体表达与心律失常的关系

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中国药理通讯 2007年第3期24卷 29-29页

作者：刘艳高阳陈立朋李丹露杜娟吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

目的：探讨各种心律失常模型心肌M3受体的变化及其与心律失常的关系。方法：30只大鼠随机分为3组，乌头碱，氯化钡和缺血组。分别注射乌头碱、氯化钡及结扎冠脉诱发大鼠心律失常，记录lh心电图的变化。Western blot检测心肌M3受体的表达... 详细信息

目的：探讨各种心律失常模型心肌M3受体的变化及其与心律失常的关系。方法：30只大鼠随机分为3组，乌头碱，氯化钡和缺血组。分别注射乌头碱、氯化钡及结扎冠脉诱发大鼠心律失常，记录lh心电图的变化。Western blot检测心肌M3受体的表达（24h）。结果：各组均可诱发心律失常，乌头碱组心律失常和室性心动过速的持续时间较其余两个模型组明显延长。Western blot显示，各组模型大鼠心肌M3受体的表达均上调，分别为正常组的2．3，1．4和1．3倍，其中乌头碱组心肌M3受体的含量明显升高。心肌M3受体蛋白的表达和心律失常的持续时间呈正相关关系。结论：心律失常能诱导心肌M3受体的表达上调，且不同心律失常模型心肌M3受体上调的幅度不同，其机制可能和心律失常的严重程度呈正相关关系。

关键词：心肌M3受体心律失常鸟头碱氯化钡

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大鼠心室肌M_3受体与间隙连接蛋白43作为抗心律失常药物靶点的综合研究

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药学学报 2006年第5期41卷 395-400页

作者：张勇岳朋肖静于海雁潘振伟林道红吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的在蛋白质分子水平研究心律失常相关蛋白质M3受体与间隙连接蛋白43之间的结构相互作用,并为其作为筛选药物靶点提供依据.方法通过免疫组化结合激光共聚焦显微镜,及免疫沉淀与免疫印迹技术,研究M受体与间隙连接蛋白43的结构性共定位关... 详细信息

目的在蛋白质分子水平研究心律失常相关蛋白质M3受体与间隙连接蛋白43之间的结构相互作用,并为其作为筛选药物靶点提供依据.方法通过免疫组化结合激光共聚焦显微镜,及免疫沉淀与免疫印迹技术,研究M受体与间隙连接蛋白43的结构性共定位关系.结果证实了大鼠心室肌细胞膜蛋白中M1～M5等5个亚型的存在;观察到大鼠单个心肌细胞膜上M3受体与间隙连接蛋白43的结构性共定位;发现M受体各亚型与间隙连接蛋白43均存在结构整合,且一定浓度离子型去垢剂可破坏M3受体与间隙连接蛋白43的结构整合关系,并进一步发现参与M3受体结构整合的是间隙连接蛋白43的磷酸化形式.结论大鼠心室肌M受体亚型与间隙连接蛋白43的磷酸化形式存在结构性共定位关系,且可被一定浓度离子型去垢剂破坏.

关键词：心室肌细胞膜 M受体间隙连接蛋白43 结构整合

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心脏M_3受体作为抗心律失常药物新靶点研究的进展

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药学学报 2006年第8期41卷 702-705页

作者：岳朋吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

心脏在交感神经和副交感神经的精细控制下完成正常的生理功能,心脏迷走神经通过刺激M型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine ***)调节心脏收缩力、兴奋性和传导。目前,通过分子生物学技术已经克隆出哺乳动物M受体的5个亚型,即m1,m2,m... 详细信息

心脏在交感神经和副交感神经的精细控制下完成正常的生理功能,心脏迷走神经通过刺激M型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine ***)调节心脏收缩力、兴奋性和传导。目前,通过分子生物学技术已经克隆出哺乳动物M受体的5个亚型,即m1,m2,m3,m4和m5。由于尚无m5受体相对特异性阻滞剂和激动剂,通过药理学的方法,将M受体分为M1,M2,M3及M4等4个亚型。[第一段]

关键词： M3受体心律失常药物靶点钾通道

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三磷酸肌醇信号途径参与血小板激活因子诱导豚鼠心室肌细胞钙浓度增高

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中国药理学与毒理学杂志 2006年第1期20卷 48-52页

作者：初文峰孙宏丽乔国芬朴闲美董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药学院药理学教研室

目的观察血小板激活因子(PAF)是否影响心室肌细胞钙离子浓度([Ca^(2+)]i)以及通过哪条信号转导通路起作用。方法采用酶法分离豚鼠心室肌细胞,用PAF刺激细胞;用Fluo-3/AM和共聚焦显微镜观察细胞[Ca^(2+)]i;用2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)... 详细信息

目的观察血小板激活因子(PAF)是否影响心室肌细胞钙离子浓度([Ca^(2+)]i)以及通过哪条信号转导通路起作用。方法采用酶法分离豚鼠心室肌细胞,用PAF刺激细胞;用Fluo-3/AM和共聚焦显微镜观察细胞[Ca^(2+)]i;用2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)和雷诺定(ryanodine)分别阻断IP3和雷诺定信号通路。全细胞膜片钳技术观察心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)。结果无论在有钙还是无钙台氏液,PAF(1pmol·L-1~10nmol·L-1)都能增加心肌细胞[Ca^(2+)]i,其作用能够被2-APB2μmo·lL-1阻断,而不能被雷诺定200μmol·L-1阻断。PAF1nmol·L-1对ICa-L没有明显影响,对照组和实验组电流密度分别为-(11.0±1.9)和-(10.5±1.3)pA·pF-1。结论PAF能增加豚鼠心室肌细胞[Ca^(2+)]i,IP3信号通路可能参与了这一过程。

关键词：血小板激活因子信号传导心肌钙,细胞内 2-氨乙基硼酸二苯酯肌醇1,4,5-三磷酸膜片钳技术,全细胞

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