检索结果-内蒙古大学图书馆

国际遗传学杂志 2006年第6期29卷 411-415页

作者：郑天虎陶站华刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地 150081 哈尔滨

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性... 详细信息

目的构建TAT-凋亡素(TAT-Apoptin)质粒并提取融合蛋白,为进一步研究该蛋白功能奠定基础。方法PCR合成TAT-Apoptin基因,与pTYB2质粒连接后转入Rosetta菌,经IPTG诱导表达,几丁质亲和层析一步纯化目的蛋白,用昆明小鼠H22动物模型检测活性。结果克隆载体经过PCR筛选、测序鉴定,其核苷酸片段长度和序列与预期序列相符,诱导后融合蛋白出现在上清中,纯化出的TAT-Apoptin蛋白具有明显的抗肿瘤活性。结论该实验所构建的重组质粒pTYB2／TAT-Apoptin经诱导表达出了可溶性目的蛋白TAT-Apoptin,纯化后具有明显的生物活性,为TAT-Apoptin蛋白的进一步研究奠定了基础。

关键词： TAT-凋亡素基因重组纯化几丁质亲和层析

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抗心律失常药物作用的新靶点——M_3-R/IK_(M_3)(英文)

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药学学报 2005年第1期40卷 8-12页

作者：刘艳许超千焦军东王慧珍董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 ... 详细信息

目的　研究心脏M3受体 /M3受体介导的钾通道与心律失常的关系,寻找抗心律失常药物的新靶点。方法分别以结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常模型和膜片钳技术为基础,观察M3受体的干预作用及作用机制。结果　M3受体阻断剂 4DAMP(4 diphenylacetoxy N methylpiperidine methiodide)加重结扎大鼠冠状动脉前降支所致心律失常,而M3受体激动剂胆碱能明显对抗其作用。其他亚型受体阻断剂,M1受体阻断剂 (prienzepine)、M2受体阻断剂(methotramine)和M4受体阻断剂 (tropicamide)对结扎大鼠左冠状动脉前降支所致急性心律失常无影响。在膜片钳实验中发现,胆碱可激活一种延迟整流钾电流(IKM3 ),此电流可被M3受体阻断剂 4DAMP明显抑制。而M1,M2和M4受体阻断剂对胆碱介导的电流无作用。结论　胆碱通过激动心肌M3受体诱发一外向钾电流 (IKM3 ),并在维持心脏离子通道平衡中起重要作用。M3受体 /IKM 可能是抗心律失常新靶点。

关键词：心肌缺血心律失常 M3受体延迟整流电流

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肿瘤抑素抗肿瘤相关肽的克隆及生物活性

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第3期21卷 322-328页

作者：王淑静刘岩林雪松付雪徐建永刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋... 详细信息

为得到肿瘤抑素中具有直接抗肿瘤活性肽并检测其生物学活性,人工合成肿瘤抑素中185～2 0 3位氨基酸(19肽)所对应的核苷酸序列,将其连接到融合蛋白表达载体pTYB2中,酶切和测序鉴定后,转化到大肠杆菌BL 2 1(DE3)中诱导表达.表达的融合蛋白经几丁质亲和层析、二硫苏糖醇(DTT)的柱内还原,直接获得可溶性19肽.利用MTT法,细胞生长曲线,小鼠H2 2腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理学切片,研究19肽的生物学活性.获得的19肽对B16小鼠黑色素瘤细胞、人SMMC 772 1肝癌细胞、人脐静脉内皮细胞的生长均具有抑制作用.小鼠H2 2腹水型肝癌抑瘤率达4 8 4 6 % .病理学切片显示,19肽可促使小鼠肿瘤组织坏死,血管数量减少.19肽具有较强的直接抗肿瘤活性,有可能成为肿瘤治疗的一种新的有前景的药物.

关键词：肿瘤抑素,蛋白质表达,蛋白质纯化,肿瘤治疗

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重组人内皮抑素的结构改造及抗肿瘤活性变化

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中国生物化学与分子生物学报 2005年第1期21卷 45-52页

作者：任明华王淑静林雪松徐建永陶站华赵炜明刘兴汉哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨150086

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑... 详细信息

内皮抑素是一种内源性的血管生成和肿瘤生长抑制剂 .运用定点突变技术对人内皮抑素基因工程菌中的内皮抑素基因进行改造 ,将内皮抑素中的GRIRGAD改为RGDRGD序列 ,提高了内皮抑素的抗肿瘤活性 .裸鼠体内抑瘤试验发现 ,野生与诱变内皮抑素的抑瘤率分别为 4 0 6 6 %和5 1 0 5 % ,诱变内皮抑素抑瘤率比野生内皮抑素提高了近 11个百分点 .病理切片HE染色诱变组肿瘤的血管生成比野生组明显减少 ,坏死灶增多 .免疫组化试验中 ,诱变组在微血管密度MVD(P <0 0 5 )、血管内皮生长因子VEGF(P <0 0 5 )、增殖细胞核抗原PCNA(P >0 0 5 )三个指标上均比野生组减小 .体外细胞实验中 ,MTT结果表明 ,野生组内皮抑素半数抑制浓度IC50 =185 μg ml,诱变组内皮抑素IC50 =2 7μg ml,诱变组抑瘤活性是野生组的 6倍 .细胞迁移抑制实验表明 ,野生组与诱变组内皮抑素均对肿瘤细胞迁移有抑制作用 ,野生组迁移抑制率为 6 8 95 % ;诱变组迁移抑制率为89 94 % .上述结果说明 ,内皮抑素除抑制血管生成外 ,对肿瘤细胞的生长和迁移也有一定的抑制作用 .诱变内皮抑素通过RGDRGD序列与整合素结合而提高了抗肿瘤活性 .

关键词：内皮抑素定点突变 RGD序列抗肿瘤活性

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蛋白质转导技术及其应用

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医学分子生物学杂志 2005年第2期2卷 119-122页

作者：陶站华王淑静刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086

蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是指一类能将其他生物大分子导入多种哺乳动物细胞的小分子阳离子多肽,它可以用于研究细胞内某些蛋白质的功能,还可以与具有治疗作用的蛋白质、多肽等生物大分子偶联,在缺血、肿瘤等... 详细信息

蛋白质转导结构域(protein transduction domain,PTD)是指一类能将其他生物大分子导入多种哺乳动物细胞的小分子阳离子多肽,它可以用于研究细胞内某些蛋白质的功能,还可以与具有治疗作用的蛋白质、多肽等生物大分子偶联,在缺血、肿瘤等多种疾病的治疗中有潜在的应用价值。

关键词：肿瘤治疗中多肽缺血治疗作用细胞内蛋白质转导结构域生物大分子哺乳动物细胞 PTD

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肿瘤抑素抗血管活性相关肽的表达及活性研究

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医学分子生物学杂志 2005年第3期2卷 157-161页

作者：付雪王淑静林雪松刘兴汉黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市150086

目的利用大肠杆菌表达系统表达肿瘤抑素抗血管活性相关肽-21肽,检测其生物学活性。方法人工合成21肽基因序列(肿瘤抑素75～95位氨基酸),克隆到表达载体pTYB2上,转化大肠杆菌BL-21(DE_3),酶切和测序鉴定后,用IPTG诱导表达融合蛋白。经几... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达系统表达肿瘤抑素抗血管活性相关肽-21肽,检测其生物学活性。方法人工合成21肽基因序列(肿瘤抑素75～95位氨基酸),克隆到表达载体pTYB2上,转化大肠杆菌BL-21(DE_3),酶切和测序鉴定后,用IPTG诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化21肽。通过MTT实验,细胞生长曲线测定,小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验及组织病理学切片研究其活性。结果获得的可溶性21肽对人脐静脉内皮细胞的生长具有抑制作用。小鼠肝癌转移瘤模型的大体抑瘤实验抑瘤率达42.86%。组织病理学切片结果可见H22小鼠肝癌细胞死亡,血管数量减少。结论经初步检测获得具有抗血管活性的21肽,为进一步研究肿瘤抑素的作用机制和肿瘤的临床治疗奠定了基础。

关键词：肿瘤抑素蛋白表达蛋白纯化抗血管活性

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苦参碱、小檗胺与胺碘酮、RP58866抗心律失常作用的比较

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药学学报 2004年第9期39卷 691-694页

作者：许超千董德利杜智敏陈庆文龚冬梅杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的阐明苦参碱和小檗胺抗心律失常作用弱于胺碘酮和RP58866的分子机制。方法采用冠脉结扎、电刺激和乌头碱诱导的心律失常模型观察药物的抗心律失常作用,采用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞的Ikl,Ikr,Iks和Ito。结果苦参碱和... 详细信息

目的阐明苦参碱和小檗胺抗心律失常作用弱于胺碘酮和RP58866的分子机制。方法采用冠脉结扎、电刺激和乌头碱诱导的心律失常模型观察药物的抗心律失常作用,采用全细胞膜片钳技术测定单个心室肌细胞的Ikl,Ikr,Iks和Ito。结果苦参碱和小檗胺对冠脉结扎、乌头碱诱发的大鼠心律失常有明显对抗作用,对家兔电刺激致颤阈(VFT)有明显提高作用,但与胺碘酮和RP58866相比,抗心律失常作用明显低于前者。电生理结果显示:苦参碱和小檗胺对家兔Ikl,Ikr,Iks和犬Ito有抑制作用,但较胺碘酮和RP58866作用弱。结论苦参碱和小檗胺的抗心律失常作用及对Ikl,Ikr,Iks和Ito的抑制作用弱于胺碘酮和RP58866。

关键词：苦参碱胺碘酮小檗胺 RP58866 钾通道

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M_3受体对体外H_2O_2 诱导大鼠心肌细胞凋亡的保护作用(英文)

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药学学报 2004年第11期39卷 887-891页

作者：刘艳孙宏丽吴红高彦辉李呼伦杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学克山病研究所哈尔滨医科大学神经生物教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨M3受体激动对H2 O2 诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用 ,进一步阐明其机制。方法　末端标记法 (TUNEL)进行细胞凋亡检测 ;免疫组化方法检测Bcl 2和Fas的表达 ;共聚焦显微镜观察 [Ca2 + ]i荧光强度变化。结果　M3受体激动剂胆... 详细信息

目的　探讨M3受体激动对H2 O2 诱导的大鼠培养心肌细胞凋亡的作用 ,进一步阐明其机制。方法　末端标记法 (TUNEL)进行细胞凋亡检测 ;免疫组化方法检测Bcl 2和Fas的表达 ;共聚焦显微镜观察 [Ca2 + ]i荧光强度变化。结果　M3受体激动剂胆碱 (10mmol·L- 1 )可减少H2 O2 诱导的心肌细胞凋亡的数量 ,并可增加心肌Bcl 2的表达 ,减少Fas表达 ,抑制H2 O2 诱导的 [Ca2 + ]i荧光强度的升高。但预先应用 4DAMP (10nmol·L- 1 )阻断M3受体可逆转胆碱作用。结论　激动M3受体对H2 O2 诱导的心肌细胞凋亡有保护作用 ,其机制可能与Bcl 2和Fas表达以及下调[Ca2 + ]i有关。

关键词： M3受体细胞凋亡培养的心肌细胞过氧化氢原位缺口末端标记共聚焦显微镜钙

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哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常的离子作用靶点

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药学学报 2004年第5期39卷 328-332页

作者：龚冬梅单宏丽周宇宏董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150086 黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的观察畦巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌单细胞离子通道的作用,确定两药诱发心律失常时离子靶点和最佳靶点,建立细胞水平的心律失常模型。方法用全细胞膜片钳技术记录哇巴因和乌头碱对酶解法分离的豚鼠和大鼠心肌细胞离子通道的作用... 详细信息

目的观察畦巴因和乌头碱对豚鼠和大鼠心肌单细胞离子通道的作用,确定两药诱发心律失常时离子靶点和最佳靶点,建立细胞水平的心律失常模型。方法用全细胞膜片钳技术记录哇巴因和乌头碱对酶解法分离的豚鼠和大鼠心肌细胞离子通道的作用。结果 5;μmol·L^(-1)哇巴因使豚鼠心肌细胞APD延长、I_(Ca-L)增加、I_k减少、I_(k1)减少;1μmol·L^(-1)乌头碱使大鼠心肌细胞APD延长、I_(Ca-L)增加、I_(to)减少、I_(k1)增加。结论哇巴因和乌头碱诱发心律失常的离子靶点有APD,I_(Ca-L),I_k,I_(to)和I_(k1)而最佳靶点应为APD,I_(Ca-L),I_k和I_(to)。在单细胞水平分别应用哇巴因和乌头碱诱发豚鼠和大鼠心律失常.具有稳定性高、条件可控、重复性好等优点,可用于药物筛选和机制研究。

关键词：哇巴因乌头碱豚鼠心律失常大鼠离子通道离子靶点

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重组人成骨生长肽治疗去卵巢大鼠骨质疏松的实验观察

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中国地方病学杂志 2004年第4期23卷 318-320页

作者：余琼周凌云刘兴汉徐建永王淑静周宏博林雪松哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150086 黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学分校检验系

目的探讨重组人成骨生长肽(recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide,rhOGP)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,经rhOGP治疗12周后,测定骨密度(BMD)、血清中的酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)... 详细信息

目的探讨重组人成骨生长肽(recombinanthumanosteogenicgrowthpeptide,rhOGP)对去卵巢大鼠骨质疏松的治疗作用。方法通过切除大鼠卵巢建立骨质疏松模型,经rhOGP治疗12周后,测定骨密度(BMD)、血清中的酸性磷酸酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(BGP)。结果rhOGP治疗组碱性磷酸酶(233.77±42.07)U/L、骨钙素(1.95±0.15)μg/L和骨密度明显高于骨质疏松模型组(156.23±23.38)U/L、(1.33±0.24)μg/L(P<0.01),而酸性磷酸酶(19.27±4.24)U/L,明显低于骨质疏松模型组(29.98±3.08)U/L(P<0.05)。结论rhOGP能刺激成骨细胞的活性,增加骨密度,提高骨量,对去卵巢大鼠所引起的骨质疏松有效,有可能成为治疗骨质疏松症的有效药物。

关键词：重组人成骨生长肽治疗去卵巢大鼠骨质疏松实验

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