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药学学报 2015年第4期50卷 393-399页

作者：刘艳吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理系、黑龙江省生物医药重点实验室、省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

心血管疾病因其具有高发病率和死亡率的特点,严重威胁着人类的健康。人们一直在致力于对心血管疾病的研究,期望可以找到更有效的治疗方法。在心脏上发现存在功能性毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,m Ach R,M受... 详细信息

心血管疾病因其具有高发病率和死亡率的特点,严重威胁着人类的健康。人们一直在致力于对心血管疾病的研究,期望可以找到更有效的治疗方法。在心脏上发现存在功能性毒蕈碱型乙酰胆碱受体(muscarinic acetylcholine receptor,m Ach R,M受体)中的M3受体后,M3受体便成为了研究心血管疾病的新领域。而随着研究的深入进行,人们发现M3受体对多种心血管疾病具有保护作用,这也使M3受体有望成为治疗心血管疾病的新靶点。本综述围绕M3受体,主要从其在心脏上的功能、对心血管疾病的影响以及其机制等方面进行阐述,期望能对今后M3受体相关疾病的研究起到支持、借鉴和鼓励作用。

关键词： M3受体心血管疾病药物靶点转基因信号分子

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肿瘤抑素41肽重组表达及活性研究

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医学分子生物学杂志 2015年第3期 150-154,158页

作者：张立新余思茗霍琳满刘兴汉黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市 150086

目的：构建肿瘤抑素41肽重组质粒，使其高效表达并纯化得到41肽，研究其抗肿瘤活性。方法人工设计并合成肿瘤抑素41肽基因序列，克隆到表达载体 pTYB21上，转化到大肠埃希菌 BL?21（DE3）中， IPTG诱导融合蛋白高效表达，几丁质亲和层... 详细信息

目的：构建肿瘤抑素41肽重组质粒，使其高效表达并纯化得到41肽，研究其抗肿瘤活性。方法人工设计并合成肿瘤抑素41肽基因序列，克隆到表达载体 pTYB21上，转化到大肠埃希菌 BL?21（DE3）中， IPTG诱导融合蛋白高效表达，几丁质亲和层析柱纯化后经Tricine?SDS?PAGE鉴定41肽。利用MTT法、吖啶橙／溴化乙锭（ AO／EB）荧光染色、小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理切片来研究肿瘤抑素41肽的生物学活性。结果构建肿瘤抑素41肽重组质粒，获得可溶性肿瘤抑素41肽。体外实验显示，41肽具有抑制人脐静脉内皮 HUVEC 细胞、人胃癌 HGC?27细胞和人肝癌HepG2细胞增殖和促进HUVEC、 HGC?27细胞凋亡的作用。体内实验显示，41肽对小鼠H22腹水型转移肝癌实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达到34?35％。结论成功构建了pTYB21?41肽重组质粒，肿瘤抑素41肽具有显著的抗肿瘤活性，为肿瘤抑素机制研究和临床应用研究奠定了基础。

关键词：肿瘤抑素基因重组蛋白表达抗肿瘤活性

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尼古丁调控lncRNA诱发动脉粥样硬化新机制——内皮向间质转化(EndMT)

尼古丁调控lncRNA诱发动脉粥样硬化新机制——内皮向间质转化(End...

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中国毒理学会第七次全国毒理学大会暨第八届湖北科技论坛

作者：张勇张隆吟刘鑫陈晓辉张庆伟李佳敏侯良宇鞠谨周童哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验-省部共建国家重点实验室培育基地教育部心血管研究重点实验室

【目的】吸烟是动脉粥样硬化等血管性疾病的独立危险因素,尼古丁是烟草中的主要有害成分。内皮一间质转化（Endothelial to mesenchymal transition,EndMT）是血管内皮细胞失去内皮表型而获得间充质表型的转变过程。本研究旨在探究EndM... 详细信息

【目的】吸烟是动脉粥样硬化等血管性疾病的独立危险因素,尼古丁是烟草中的主要有害成分。内皮一间质转化（Endothelial to mesenchymal transition,EndMT）是血管内皮细胞失去内皮表型而获得间充质表型的转变过程。本研究旨在探究EndMT在尼古丁诱发动脉粥样硬化中的作用及长链非编码RNA（Long Non-Coding RNAs,lncRNAs）在其中的调控作用。【材料和方法】收集临床手术动脉组织（吸烟组和非吸烟组）,建立尼古丁诱发动脉粥样硬化动物模型(ApoE小鼠:对照组和尼古丁组),免疫组化原位检测主动脉内皮EndMT相关蛋白（CD3 1、α-SMA）的表达;提取主动脉内膜RNA,real-time PCR检测EndMT相关基因的表达量变化。培养人主动脉内皮细胞系（Human aortic endothelia cells,HAECs）,分为对照组和尼古丁组,应用倒置相差显微镜观察内皮细胞形态;收集细胞RNA和蛋白,利用Real timePCR技术和Western blot技术检测EndMT相关基因（CD31、VE-cadherin、α-SMA、FSPl）的表达;免疫荧光技术检测EndMT相关蛋白的表达和分布;运用Transwell标记物漏出法及单层细胞跨膜电阻测定实验检测内皮通透性。将HAEC细胞系分为对照组和尼古丁组,收集其RNA,使用Arraystar Human LncRNA Array V3.0芯片进行lncRNA表达谱芯片检测,筛选出差异表达的lncRNA,应用生物信息学分析方法进行数据处理,筛选出与EndMT相关的lncRNA。【结果】临床手术动脉组织吸烟组与非吸烟组相比,ApoE小鼠尼古丁组与对照组相比,血管内皮细胞相关蛋白CD31、VE-cadherin表达下调,间质细胞相关蛋白α-SMA、FSP1表达上调。尼古丁刺激HAEC后,内皮细胞形态由卵圆形变成长梭形,内皮细胞相关基因CD31、VE-cadherin表达下调,间质细胞相关基因α-SMA、FSP1表达上调。Transwell标记物漏出法及单层细胞跨膜电阻测定实验发现尼古丁显著增强内皮通透性。lncRNA表达谱芯片检测显示尼古丁处理组与对照组相比lncRNA差异表达显著。【结论】尼古丁通过诱导血管内皮细胞发生EndMT来诱发动脉粥样硬化,尼古丁可显著改变内皮细胞IncRNA表达,lncRNA可能是EndMT的关键调控分子。

关键词：吸烟尼古丁 EndMT lncRNA

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血浆中的microRNA-1作为一个新的生物标记物用于急性心肌梗死的诊断和预警梗死后心力衰竭的发生

血浆中的microRNA-1作为一个新的生物标记物用于急性心肌梗死的诊...

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中国药理学会生化与分子药理专业委员会2014年研讨会

作者：张荣孙丽华杨宝峰艾静哈尔滨医科大学药理教研室省部共建国家重点实验室培育基地-黑龙江省生物医药工程重点实验室哈尔滨150081

目的:检测急性心肌梗死(AMI)患者血浆中microRNA-1 (miR-1)的表达水平,并探讨其与AMI发生的关系,揭示其潜在的临床意义.方法:研究对象包括AMI患者93例(其中有多普勒超声心动图的患者49例)和健康体检人群66例,共计159例.通过外周血的采集...

目的:检测急性心肌梗死(AMI)患者血浆中microRNA-1 (miR-1)的表达水平,并探讨其与AMI发生的关系,揭示其潜在的临床意义.方法:研究对象包括AMI患者93例(其中有多普勒超声心动图的患者49例)和健康体检人群66例,共计159例.通过外周血的采集,应用荧光实时定量RT-PCR(qRT-PCR)技术对其血浆中的miR-1表达水平进行定量.miR-1表达量的变化采用Wilcoxon秩和检验进行组间比较(对照组和AMI组),Wilcoxon符号秩和检验进行成对比较(AMI组入院时及出院时).采用线性回归和逻辑回归分析以及Pearson相关性分析评价miR-1同临床指标和心功能指标的相关性.

关键词：

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丹参酮ⅡA调节microRNA-1保护缺氧心肌细胞的作用研究

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现代生物医学进展 2014年第28期14卷 5463-5467页

作者：李雪连关会林王璐郭瑞赵丹丹郭振丰张佳琳单宏丽哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江哈尔滨150081 心血管药物研究教育部重点实验室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081 牡丹江医学院黑龙江牡丹江157011

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内... 详细信息

目的:研究丹参酮Ⅱ A(TanshinoneⅡA)通过调节microRNA-1抗心肌细胞缺氧损伤的作用。方法:原代培养新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞缺氧模型。MTT法检测心肌细胞存活率(%);TUNEL、流式细胞术测心肌细胞凋亡率;激光共聚焦检测心肌细胞内钙离子[Ca2+]i浓度的变化情况。结果:MTT结果显示丹参酮ⅡA对缺氧心肌细胞及过表达miR-1引起心肌细胞损伤具有保护作用。丹参酮ⅡA增加了缺氧心肌细胞的存活率(P<0.05),同时给予丹参酮ⅡA和miR-1组与单独miR-1损伤组相比较,存活率也明显升高,呈现剂量依赖性。TUNEL结果显示丹参酮ⅡA可以抑制缺氧诱导的细胞凋亡,丹参酮ⅡA可以明显降低由缺氧导致的细胞凋亡率(P<0.05)。共聚焦检测结果显示,缺氧损伤的心肌细胞内[Ca2+]i显著升高1322.72±5.16(vs正常对照组,P<0.05),丹参酮ⅡA则有效抑制由缺氧引起过高的[Ca2+]i。miR-1诱导的细胞内[Ca2+]i升高至1349.33±62.63,约为正常对照组的1.96倍,而丹参酮ⅡA则有效抑制胞内过高的[Ca2+]i,从而发挥心肌保护作用。结论:丹参酮ⅡA可能是通过抑制胞内miR-1的表达,参与对钙离子浓度的调控,发挥其对心肌细胞的保护作用。

关键词：丹参酮ⅡA 缺氧心肌细胞 miR-1 细胞内钙细胞凋亡

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三氧化二砷与白藜芦醇联用对急性早幼粒细胞性白血病NB4细胞存活率的影响

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中国地方病学杂志 2011年第1期30卷 9-12页

作者：于金玲何开文初文峰朴贤美乔国芬吕延杰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地150081

目的观察三氧化二砷（ATO）与白藜芦醇（Res）联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法采用不同剂量的ATO[0（对照）、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol... 详细信息

目的观察三氧化二砷（ATO）与白藜芦醇（Res）联用对人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4细胞存活率的影响,并探讨其作用机制.方法采用不同剂量的ATO[0（对照）、0.1875、0.3750、0.7500、1.1250、1.5000、2.2500、3.0000、5.0000 μmol/L]、Res[0（对照）、1.5625、3.1250、6.2500、12.5000、18.7500、25.0000、37.5000、50.0000 μmol/L]孵育NB4细胞.应用四氮唑盐比色法（MTT）检测不同处理组的细胞存活率,计算ATO和Res对NB4细胞的半数抑制浓度（IC50）.根据IC50,设置联合用药比例分别为1.5∶18、.5∶25、.5∶35,并根据药物联合指数计算公式,分别计算出联合用药在不同抑制效应（0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9）时的联合指数,判断ATO与Res在不同抑制效应时各自所需药物浓度之间的相互作用.应用DCFH-DA荧光探针检测对照组、ATO（1.5000 μmol/L）加药组、Res（25.0000 μmol/L）加药组、联合用药组（0.9000 μmol/L ATO＋12.5000 μmol/L Res）NB4细胞活性氧（ROS）水平,每组各检测10份样品.结果 ①ATO（≥0.7500 μmol/L）加药组NB4细胞存活率明显低于对照组（P＜0.05）,呈剂量依赖性的量效关系,IC50为（1.78±0.11）μmol/L.②Res（≥18.7500 μmol/L）加药组NB4细胞存活率明显低于对照组（P＜0.05）,呈剂量依赖性的量效关系,IC50为（18.71±0.18）μmol/L.③ATO和Res联合应用对NB4细胞存活抑制效应呈现拮抗作用.④Res加药组NB4细胞内ROS水平（1670.55±13.97）明显低于对照组（2345.88±14.48,P＜0.05）.ATO加药组NB4细胞内ROS水平（3092.42±94.84）明显高于对照组（P＜0.05）.联合用药组NB4细胞内ROS水平（1860.27±15.99）明显低于ATO加药组（P＜0.05）.结论 ATO、Res均可致NB4细胞存活率下降,而两者联合应用时表现为拮抗效应,ROS可能参与了这种拮抗作用.

关键词：三氧化二砷白藜芦醇 NB4细胞药物拮抗作用细胞存活

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心律失常调节的新靶点--microRNA的研究进展与应用前景

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药学学报 2011年第1期46卷 6-11,4页

作者：张荣董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

转化医学是近年来提出的关于基础与临床密切结合的新概念,其目的是实现基础研究成果真正转化为临床实践。microRNA(miRNA)是新发现的基因表达调控因子,由长约21～25核苷酸的单链RNA分子构成。近年来,miRNA在心血管系统中的关键调控作用... 详细信息

转化医学是近年来提出的关于基础与临床密切结合的新概念,其目的是实现基础研究成果真正转化为临床实践。microRNA(miRNA)是新发现的基因表达调控因子,由长约21～25核苷酸的单链RNA分子构成。近年来,miRNA在心血管系统中的关键调控作用不断得以阐明,尤其是在心律失常中的调节作用,取得了令人瞩目的研究成果。一系列研究证实miRNA参与调控多种心脏电活动相关蛋白的表达,是心律失常发生和抗心律失常药物作用的潜在靶点。miRNA作为治疗靶点通过调节靶基因mRNA的稳定性或抑制翻译过程而发挥作用。在靶器官中稳定相应miRNA的表达水平可能成为疾病治疗的一个新方式。本文将从miRNA表达改变引起功能失调这一角度,采用拟miRNA技术和抗miRNA技术纠正靶蛋白的功能,为心律失常的治疗提供新的切入点。借助miRNA类似物(miRNA mimics)和胆固醇连接的miRNA反义核苷酸抑制剂(antagomirs),miRNA用于治疗多种心血管疾病有望实现,将为转化医学的实现注入新的动力。

关键词：转化医学 microRNA 心律失常

来源：评论

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MicroRNA在心律失常研究中的进展及其应用前景

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分子诊断与治疗杂志 2011年第4期3卷 266-273页

作者：王宁吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

心律失常与多种心血管疾病的发生发展有关,并与心源性猝死密切相关。研究心律失常的分子机制及其可能的治疗手段具有重要意义。microRNA与心脏多种离子通道蛋白表达以及心律失常的发生有紧密关系。同时,microRNA干扰技术的发展和应用为... 详细信息

心律失常与多种心血管疾病的发生发展有关,并与心源性猝死密切相关。研究心律失常的分子机制及其可能的治疗手段具有重要意义。microRNA与心脏多种离子通道蛋白表达以及心律失常的发生有紧密关系。同时,microRNA干扰技术的发展和应用为心律失常的生物或基因治疗奠定了基础。

关键词： MicroRNA 心律失常治疗

来源：评论

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心律失常发病机制研究进展

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国际药学研究杂志 2010年第2期37卷 81-88页

作者：杨宝峰蔡本志哈尔滨医科大学药学院药理学教研室省部共建生物医药国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

心律失常是心血管疾病常见的临床表现形式,尤其是室性心动过速、心室颤动等恶性心律失常,不但加重原有心脏疾病,还可诱发心源性猝死。目前抗心律失常药物的疗效并不十分理想,总有效率只有30%～60%。人们对心律失常作用机制的认识仍有限... 详细信息

心律失常是心血管疾病常见的临床表现形式,尤其是室性心动过速、心室颤动等恶性心律失常,不但加重原有心脏疾病,还可诱发心源性猝死。目前抗心律失常药物的疗效并不十分理想,总有效率只有30%～60%。人们对心律失常作用机制的认识仍有限,因此,揭示心律失常发生的深层机制,寻找新的作用靶点是抗心律失常研究领域的重点、难点。近年人们发现心房特异性钾离子通道电流IKur、IKAch等参与了心房颤动,这使心房颤动治疗的研究向前推进一步。钙渗漏、缝隙连接蛋白及钙通道自身抗体在心律失常发生中发挥重要作用。这些发现为开发更有效的抗心律失常药物提供了理论基础。近年研究发现,一类调控基因的小分子RNA(microRNA,miRNA)在心血管疾病的发生、发展中起重要作用,特别是对心律失常及其引起的猝死起关键作用。miR-1、miR-133、miR-590等对心肌缺血、心肌梗死伴随的心律失常表现出明显调控作用。miRNA的生物学特性是同时对多个靶点具有调控作用,这使其具有成为理想抗心律失常靶点的潜力,为心律失常及猝死的防治带来希望。

关键词：心律失常离子通道小分子RNA M3受体心房颤动缝隙连接蛋白心肌梗死 AT1受体溶血磷脂酰胆碱类

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心肌微环境诱导骨髓间充质干细胞心肌化时电生理特性研究

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哈尔滨医科大学学报 2010年第1期44卷 26-28,32页

作者：朱松龄蔡本志刘嘉祺赵静李建平陈楠王刚吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化过程中离子通道电流的表达情况,为临床BM-SCs移植的安全性提供参考。方法分离培养BMSCs及乳鼠心肌细胞(NRVM s),并以1∶10的比例共培养,应用全细胞膜片钳技术记录共培养的BMSCs上离子通... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌细胞分化过程中离子通道电流的表达情况,为临床BM-SCs移植的安全性提供参考。方法分离培养BMSCs及乳鼠心肌细胞(NRVM s),并以1∶10的比例共培养,应用全细胞膜片钳技术记录共培养的BMSCs上离子通道电流的表达情况。结果成功分离培养BMSCs和NRVM s并建立了共培养模型,共培养1周后,BMSCs形态发生了明显变化;在心肌微环境诱导下,向心肌分化的BMSCs平均膜电位为-(40.37±3.68)mV,平均膜电容为(35.18±4.96)pF;共培养的BMSCs上可记录到IK1、Ito、IKsus,未记录到INa和ICa,也未记录到KCa。结论BMSCs和NRVM s共培养1周后,BMSCs上记录到IK1、Ito及IKsus,但未记录到INa和ICa。

关键词：骨髓间充质干细胞心肌细胞膜片钳膜电流

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