检索结果-内蒙古大学图书馆

国际免疫学杂志 2015年第3期38卷 224-228页

作者：孙高翔潘新灵崔佳奕凌虹李迪哈尔滨医科大学医学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省感染与免疫创新团队、黑龙江省普通高校病原学重点实验室 150081

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞BL21中.用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）方法检测重组蛋白表达,检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量.采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化.结果成功构建重组表达质粒,重组蛋白经IPTG诱导后,2h开始明显表达且表达量无时间依赖性,在不同温度诱导下,重组蛋白的表达量随温度的增高而减少.重组蛋白以包涵体形式存在,经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白.结论成功构建并表达Rv0073蛋白,为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌 Rv0073 表达纯化

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线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体的构建及鉴定

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国际免疫学杂志 2015年第2期38卷 120-123页

作者：刘翠玉李玉军孙岚纪羽婷张庆猛魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室150081

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶... 详细信息

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶切，酶切产物过夜连接转化至大肠杆菌JMl09，挑取阳性克隆pcDNA6／myc—HisA—MAVS扩增后，提取重组质粒；利用PCR和核酸测序验证线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建的正确性；应用Western blotting的方法检测融合蛋白的表达。结果线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建成功，并且该载体能够在OL细胞中表达融合蛋白。结论成功构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体，为进一步研究该蛋白的功能和作用机制奠定基础。

关键词：线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体序列分析

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博尔纳病病毒X基因真核表达载体的构建及鉴定

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中国微生态学杂志 2015年第4期27卷 379-381,385页

作者：孙岚刘翠玉纪羽婷李玉军李爱梅魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-m... 详细信息

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-myc-His(A)载体上,转化至***感受态细菌后,提取质粒筛选阳性克隆,通过PCR法和DNA测序进行鉴定,并转染至OL细胞,通过Western blot方法验证重组蛋白的表达。结果测序鉴定目的基因序列正确插入至pc DNA6-myc-His(A)载体的酶切位点,PCR扩增的基因片段大小与目的基因相同,Western blot证明转染至OL细胞后可表达BDV X-His融合蛋白。结论成功构建了博尔纳病病毒X基因真核表达载体pc DNA6-myc-His(A)-BDV X。

关键词：博尔纳病病毒基因重组序列测定蛋白免疫印迹

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异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴改变的形态学研究

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中国男科学杂志 2014年第7期28卷 8-13页

作者：张盼盼刘凤霞阿地力江?伊明哈木拉提?吾甫尔迪丽达尔?库德热提毛吾兰?买买提依明朱彦刘莹新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室乌鲁木齐 830011 新疆医科大学维吾尔医学院新疆医科大学基础医学院微生物学教研室新疆医科大学基础医学院生物教研室新疆医科大学基础医学院病理生理学教研室

目的：研究异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴形态学的改变。方法选用90只性功能正常的雄性SD大鼠，从中随机抽取10只设为正常对照组，其余80只为造模组，采用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型。动态观测大鼠生... 详细信息

目的：研究异常黏液质型阳痿病证大鼠性腺轴形态学的改变。方法选用90只性功能正常的雄性SD大鼠，从中随机抽取10只设为正常对照组，其余80只为造模组，采用芫荽实+菠菜实+湿寒性环境的干预条件建立异常黏液质证候模型。动态观测大鼠生物学表征与勃起功能改变，造模20周后通过APO勃起实验和性行为学实验筛选出阳痿病证模型后，随机分为病证模型组、病证自然反证组和病证药物反证组，反证时间2周，实验终结时，取下丘脑、垂体和睾丸，HE染色，并于光镜和电镜下进行形态学观察。结果（1）下丘脑：正常组组织结构与细胞形态完好。病证模型组基质疏松，提示水肿；超微结构显示神经元核膜界线不清，线粒体水肿，内质网轻微扩张。自然反证组，部分细胞水肿变性；超微结构显示线粒体水肿，粗面内质网有轻度扩张。药物反证组，得到一定程度修复。（2）垂体：正常组结构与细胞形态完好。病证模型组基质疏松，轻度水肿，超微结构可见内质网明显扩张，线粒体普遍空泡样变。自然反证组基质亦疏松，细胞核细胞质边界不清，细胞水肿；超微结构显示大部分线粒体呈空泡样变，粗面内质网扩张。药物反证组基质疏松有所改善，水肿有所减轻。（3）睾丸：正常组结构与细胞形态完好，病证模型组可见生精小管明显变形，生精细胞层数与数量明显减少，间质减少；超微结构显示，生精细胞数量减少且排列紊乱，可见有精原细胞、精母细胞核固缩。自然反证组，生精细胞数量较少，超微结构下可见支持细胞水肿，内质网扩张呈囊泡状。药物反证组生精细胞数量上升，支持细胞增加，管腔内可见一定数量的精子。结论维医异常黏液质阳痿病证大鼠性腺轴可发生明显的病理改变，提示性腺轴的病理性改变可能是该病证发生发展的重要机制之一。

关键词：异常黏液质阳痿下丘脑-垂体-性腺轴

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人7型腺病毒的分离与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2014年第5期48卷 353-357页

作者：杨金峰商蕾董妥齐桂云王迎晨高虹刘振卫于惠崧郭微媛曲章义哈尔滨医科大学卫生微生物学教研室哈尔滨医科大学附属第二医院检验科黑龙江哈尔滨150081

目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩... 详细信息

目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩增腺病毒五邻体、六邻体基因,将扩增的PCR产物进行基因测序,并将测序结果 BLAST比对,初步判断其型别。结果从采集的标本中分离到1株人腺病毒毒株。BLAST比对五邻体、六邻体测序结果,表明该毒株与人7型腺病毒五邻体、六邻体的同源性为100%,初步判定该毒株为人7型腺病毒。结论从哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本中分离到1株人7型腺病毒。

关键词：直接免疫荧光腺病毒病毒培养空斑试验

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高危型人乳头瘤病毒基因组整合的研究进展

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微生物与感染 2014年第1期9卷 54-60页

作者：叶雪瑞董瑞李立群谷鸿喜商庆龙哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081

高危型人乳头瘤病毒(HPV)基因组整合在宫颈癌等多种肿瘤中被发现。流行病学和实验证据支持高危型HPV基因组整合在宫颈癌等相关肿瘤中起重要作用,其发生可能与宿主染色体不稳定和DNA甲基化相关。近年来发现克隆选择与干扰素通路相关。另... 详细信息

高危型人乳头瘤病毒(HPV)基因组整合在宫颈癌等多种肿瘤中被发现。流行病学和实验证据支持高危型HPV基因组整合在宫颈癌等相关肿瘤中起重要作用,其发生可能与宿主染色体不稳定和DNA甲基化相关。近年来发现克隆选择与干扰素通路相关。另外,整合对宿主细胞基因影响和整合位点检测方法方面的研究也取得了重要进展。本文就高危型HPV基因组整合研究的最新进展作一综述。

关键词：高危型人乳头瘤病毒整合致癌

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雌性大鼠交配实验模型的建立

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中国男科学杂志 2014年第6期28卷 6-9页

作者：张盼盼王丽阿地力江·伊明刘凤霞迪丽达尔·库德热提新疆医科大学基础医学院人体解剖学教研室乌鲁木齐 830011 新疆医科大学中医学院中西医临床2012-2班新疆医科大学基础医学院微生物学教研室

目的：建立最佳雌性大鼠交配实验模型。方法正常雌性SD大鼠30只，随机分为自然组、黄体酮组和去势＋药物组，每组10只。自然组大鼠不给于任何处理；黄体酮组于交配前4h仅注射黄体酮500μg/只；去势＋药物组统一行双侧卵巢切除术，于交... 详细信息

目的：建立最佳雌性大鼠交配实验模型。方法正常雌性SD大鼠30只，随机分为自然组、黄体酮组和去势＋药物组，每组10只。自然组大鼠不给于任何处理；黄体酮组于交配前4h仅注射黄体酮500μg/只；去势＋药物组统一行双侧卵巢切除术，于交配实验前48h和4h分别皮下注射苯甲酸雌二醇20μg/只和黄体酮500μg/只。各组于交配前进行阴道涂片，并正常雄鼠进行交配实验，检测其交配成功率。结果自然组1只大鼠发情，交配成功率10%；黄体酮组2只大鼠发情，交配成功率20%；去势＋药物组阴道涂片显示全部处于发情期，交配成功率为100%。结论雄鼠的性行为与雌鼠是否发情密切相关，在性行为学检测中，经雌孕激素处理的去势雌鼠为最佳交配实验模型。

关键词：卵巢切除术大鼠交配模型

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人类免疫缺陷病毒B亚型包膜糖蛋白V4区变异与CD4^＋T细胞数相关性分析

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国际免疫学杂志 2014年第1期37卷 74-77页

作者：李妍李迪杨丹王甲业庄敏凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

目的探讨人类免疫缺陷病毒感染者包膜蛋白V4区变异与CD4^＋T细胞数之间的关系。方法本研究从Los Alamos HIV序列数据库中选取369条HIV-1B亚型且已知CD4^＋T细胞数的V4区氨基酸序列。分析CD4^＋T细胞数与V4区氨基酸序列长度、潜在糖基化... 详细信息

目的探讨人类免疫缺陷病毒感染者包膜蛋白V4区变异与CD4^＋T细胞数之间的关系。方法本研究从Los Alamos HIV序列数据库中选取369条HIV-1B亚型且已知CD4^＋T细胞数的V4区氨基酸序列。分析CD4^＋T细胞数与V4区氨基酸序列长度、潜在糖基化位点（PNGS）及净电荷数的相关性。V4区氨基酸序列按CD4^＋T细胞数高低分成两组：CD4^＋T细胞数〈200个／μL组（n=216）和CD4^＋T细胞数≥200个／μL组（n=153），比较两组V4区氨基酸的差异。结果CD4^＋T细胞数与V4区氨基酸序列长度及PNGS数正相关（r=0．248，0．136，P均〈0．01），而与V4区净电荷数负相关（r=-0．154，P〈0．01）。CD4^＋T细胞数〈200个／μL与CD4^＋T细胞数〉200个／μL组相比，V4区氨基酸序列长度较短（P〈0．01）、PNGS数较少（P〈0．05）。但CD4^＋T细胞数高低两组V4区净电荷数之间无统计学意义（P=0．17）。结论V4区变异和HIV-1感染的病程具有相关性，随着CD4^＋T细胞数的降低，V4区序列变短、PNGS数减少。

关键词：人类免疫缺陷病毒-1 包膜糖蛋白 V4区 CD4^+T细胞数

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柯萨奇病毒B组3型2B蛋白诱导细胞自噬及其基序鉴定

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国际病毒学杂志 2014年第6期21卷 253-259页

作者：王瑞雪吴珩陈阳潘博佟雷王天楹赵文然钟照华哈尔滨医科大学机能学实验教学中心哈尔滨150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨150081

目的探讨柯萨奇病毒B组3型（CVB3） woodruff病毒2B蛋白对细胞自噬的诱导作用,及其自噬相关基序的鉴定.方法分别构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与CVB3 woodruff病毒2B蛋白及其9种截短蛋白的融合蛋白（EGFP-2B、EGFP-2B1-249、EGFP-2B... 详细信息

目的探讨柯萨奇病毒B组3型（CVB3） woodruff病毒2B蛋白对细胞自噬的诱导作用,及其自噬相关基序的鉴定.方法分别构建增强型绿色荧光蛋白（EGFP）与CVB3 woodruff病毒2B蛋白及其9种截短蛋白的融合蛋白（EGFP-2B、EGFP-2B1-249、EGFP-2B1-201、EGFP-2B1-153、EGFP-2B1-105、EGFP-2B1-57、EGFP-2B106.201、EGFP-2B106-249、EGFP-2 B205-297、EGFP-2B106-201）真核表达载体,红色荧光蛋白（mCherry）与微管相关蛋白轻链3（LC3）的融合蛋白真核表达载体pmCherry-LC3;应用激光共聚焦与蛋白质免疫印迹（Western blot）检测病毒2B蛋白对宫颈癌细胞（HeLa） LC3表达的影响;荧光显微镜观察9种截短蛋白在HeLa细胞中的表达;Western blot检测pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后LC3的表达;观察自噬抑制剂3-甲基腺苷（3-MA）处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249诱导细胞自噬的情况.结果 CVB3攻击HeLa细胞后,mCherry-LC3呈现细胞核周点状聚集表达,Western blot检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;pEGFP-2B与pmCherry-LC3共转染后也可见细胞核周围绿色荧光与红色荧光均成点状聚集并相互重叠,且LC3-Ⅱ条带明显;9种截短融合蛋白质粒分别转染HeLa细胞后,其中可见细胞核周围绿色荧光点状聚集的最短截短蛋白为EGFP-2B106-249;pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249转染细胞后可检测出现清晰LC3-Ⅱ条带;3-MA处理后,pEGFP-2B和pEGFP-2B106-249分别与pmCherry-LC3共转染的细胞均未见绿色和红色荧光的核周点状聚集.结论 CVB3 woodruff病毒2B蛋白可以诱导宿主细胞发生自噬,其中截短蛋白2B106-249是病毒蛋白2B诱导HeLa细胞发生自噬的功能基序.

关键词：柯萨奇病毒B组3型自噬基序融合蛋白微管相关蛋白轻链3 Microtubule-associated protein light chain 3

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SELEX技术在自身免疫病中的研究进展

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国际免疫学杂志 2014年第1期37卷 10-12页

作者：王壵宋武琦王亚贤张凤民黑龙江中医药大学微生物与免疫学教研室哈尔滨150040 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086

SELEX技术利用大容量的随机寡核苷酸文库与靶分子的相互作用，从中筛选出高亲和力和高特异性的寡核苷酸适配体。适配子和靶分子结合后可阻断靶分子的生物学活性，与相应抗体分子相比适配子具有许多优越性，如分子量小、易于修饰、无免... 详细信息

SELEX技术利用大容量的随机寡核苷酸文库与靶分子的相互作用，从中筛选出高亲和力和高特异性的寡核苷酸适配体。适配子和靶分子结合后可阻断靶分子的生物学活性，与相应抗体分子相比适配子具有许多优越性，如分子量小、易于修饰、无免疫原性等。该技术在多种疾病的诊断、治疗方面都有广泛的应用前景。

关键词： SELEX技术自身免疫病适配体

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