检索结果-内蒙古大学图书馆

中国地方病学杂志 2007年第1期26卷 98-100页

作者：王燕商庆龙谷鸿喜韩聪邵迪李茉李承刚哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌... 详细信息

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶（HAT）的选择培养基及有限稀释法进行克隆化，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数．同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞，命名为AE3和AG7，染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1：5120和1：80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞，为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。

关键词：宫颈肿瘤乳头状瘤病毒,人 L1蛋白抗体,单克隆

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HPV6b L1重组蛋白在大肠埃希菌中的表达与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第1期41卷 11-12,15页

作者：韩聪王燕商庆龙魏兰兰刘希君谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究人乳头瘤病毒6b型主要衣壳蛋白L1(HPV6b L1)在原核系统中的表达及鉴定。方法酶切pBluescript M13-HPV6b重组质粒,构建原核表达质粒pBAD-HPV6b L1,并转入大肠埃希菌Top10菌株,经L-Arabinose诱导,表达融合蛋白6×His-L1,用SDS... 详细信息

目的研究人乳头瘤病毒6b型主要衣壳蛋白L1(HPV6b L1)在原核系统中的表达及鉴定。方法酶切pBluescript M13-HPV6b重组质粒,构建原核表达质粒pBAD-HPV6b L1,并转入大肠埃希菌Top10菌株,经L-Arabinose诱导,表达融合蛋白6×His-L1,用SDS-PAGE和蛋白印迹方法进行检测。结果HPV6b L1蛋白在Top10菌中高效表达,其相对分子量60kD,并保有HPV6b L1特异性。结论HPV6b L1蛋白在原核表达系统中获高效表达,为该蛋白质的功能及HPV的基因工程疫苗的研究提供了物质基础。

关键词：人乳头瘤病毒6b型 L1蛋白尖锐湿疣

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pET21b-HPV16E4重组质粒的构建及鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第2期41卷 112-114页

作者：李承刚商庆龙谷鸿喜王燕邵迪哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建HPV16 E4重组表达质粒,以获得HPV16 E4活性蛋白,为进一步研究打基础。方法从宫颈癌组织中提取DNA,用PCR方法扩增HPV16E4 DNA片段,定向克隆到原核表达载体pET21b质粒中,利用菌液PCR方法筛选重组阳性菌株。提取重组质粒,利用酶切... 详细信息

目的构建HPV16 E4重组表达质粒,以获得HPV16 E4活性蛋白,为进一步研究打基础。方法从宫颈癌组织中提取DNA,用PCR方法扩增HPV16E4 DNA片段,定向克隆到原核表达载体pET21b质粒中,利用菌液PCR方法筛选重组阳性菌株。提取重组质粒,利用酶切图谱分析方法和核酸序列测定验证重组质粒pET21b-HPV16E4构建的正确性。结果用PCR方法从宫颈癌组织中扩增出HPV16 E4片段,大小为0.3kb。从PCR筛选的重组菌株中提取重组质粒pET21b-HPV16E4,经单酶切得到5.7kb的片断,HindⅢ和BamHⅠ双酶切得到5.4kb和0.3kb两个片段,并且测序结果与已知序列相符,证实了重组质粒构建的正确性。结论pET21b-HPV16E4重组质粒构建成功。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E4基因 PCR 基因重组

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乙型肝炎病毒X基因的克隆与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第3期41卷 221-223页

作者：苏辉李玉军佟松翟爱霞李小光张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,以进一步研究其基因产物的功能及致病机制。方法以肝炎患者血清DNA为模板,用PCR方法扩增乙型肝炎病毒X基因,构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,经酶切电泳验证重组质粒的正确... 详细信息

目的构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,以进一步研究其基因产物的功能及致病机制。方法以肝炎患者血清DNA为模板,用PCR方法扩增乙型肝炎病毒X基因,构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,经酶切电泳验证重组质粒的正确性,并对X基因进行测序鉴定。结果PCR结果显示,扩增片断大小约465 bp,与预期相同。重组质粒经酶切电泳判断有目的片段插入,方向正确,经测序证实插入片段是乙型肝炎病毒X基因,编码框无误。结论成功构建乙型肝炎病毒X基因重组质粒pQE30-HBx。

关键词：乙型肝炎病毒 X基因原核表达系统

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HIV-1 ADA株gp140真核表达载体的构建与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第4期41卷 303-305页

作者：李玉雪王甲业李庆海李妍凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选... 详细信息

目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定。结果获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体。此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础。

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp140 重叠延伸剪接法

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Balb/c乳鼠心肌细胞的分离和体外培养方法的优化

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哈尔滨医科大学学报 2007年第4期41卷 324-326页

作者：张中海包琳史巧云李晓波钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳... 详细信息

目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰。分离细胞时消化次数最好控制在不多于6次,每次消化时间不超过20min。2h差速贴壁可以提高心肌细胞纯度,经肌动蛋白鉴定,心肌细胞达94.6%。结论本研究优化了分离和原代培养Blab/c乳鼠心肌细胞的方法。

关键词：心肌细胞 Balb/c乳鼠原代细胞培养

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当归补血汤对免疫抑制合并隐孢子虫感染小鼠的治疗作用的研究

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中国人兽共患病学报 2007年第7期23卷 710-713页

作者：张晓莉于新慧唐小云刘爱琴宋宝辉刘亚威王志龙凌虹牡丹江医学院病原生物学教研室牡丹江157011 哈尔滨医科大学微生物学寄生虫学教研室150081

目的探讨当归补血汤(Angelicae Sinensis Decoction for Supplementing Blood,ASDSB)对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用。方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染模型,随后用ASDSB治疗,并设对照组。每日计数小鼠粪便中卵囊数量,测... 详细信息

目的探讨当归补血汤(Angelicae Sinensis Decoction for Supplementing Blood,ASDSB)对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用。方法建立免疫抑制合并隐孢子虫感染模型,随后用ASDSB治疗,并设对照组。每日计数小鼠粪便中卵囊数量,测定外周血T细胞亚群、血清可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)和肠液分泌型免疫球蛋白A(sIgA)的水平,并进行肠组织病理检测。结果与模型组相比较,大剂量ASDSB组的小鼠粪便卵囊排出数量明显减少(P<0.01),肠粘膜损伤较模型组轻,并且可以提高免疫抑制小鼠的CD4+T水平,促进肠道粘膜sIgA的产生,降低外周血sIL-2R水平。结论大剂量ASDSB对免疫抑制合并隐孢子虫感染的小鼠的治疗作用是通过提高机体免疫功能发挥的。

关键词：免疫抑制隐孢子虫当归补血汤(ASDSB) 免疫功能

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松针油体外抗腺病毒作用研究

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中草药 2007年第7期38卷 1059-1062页

作者：魏凤香商蕾曲章义陈晶高虹王鹏张鸿彦哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

腺病毒是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一。腺病毒感染人类可引起许多疾病,如急性上、下呼吸道感染,暴发性眼结膜炎,急性出血性膀胱炎,风湿性关节炎,免疫缺损疾病,脑炎,脑膜炎以及婴幼儿胃肠炎等,而其中呼吸道疾病的发病率是... 详细信息

腺病毒是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一。腺病毒感染人类可引起许多疾病,如急性上、下呼吸道感染,暴发性眼结膜炎,急性出血性膀胱炎,风湿性关节炎,免疫缺损疾病,脑炎,脑膜炎以及婴幼儿胃肠炎等,而其中呼吸道疾病的发病率是最高的。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受到关注。在5岁以下儿童的急性呼吸道疾病中,大约5%是由腺病毒引起的,在3岁以下儿童还易引起急性肺炎,腺病毒不仅可以引起致命的肺炎,而且还能留下远期肺部损害。[第一段]

关键词：抗腺病毒作用急性呼吸道疾病急性出血性膀胱炎下呼吸道感染体外松针油风湿性关节炎婴幼儿胃肠炎

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HPV16L1VLP纯化、鉴定及血凝抑制实验方法的建立

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微生物学杂志 2007年第2期27卷 29-32页

作者：邵迪王燕谷鸿喜韩聪李茉商庆龙李承刚哈尔滨医科大学微生物学教研室

摘要通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达HPV16L1 VLP,纯化鉴定后利用其建立血凝抑制实验,检测HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。利用重组杆状病毒感染悬浮培养的昆虫细胞表达HPV16L1蛋白,大量获得VLP;优化扩增蛋白的条件并用SDS-PAGE... 详细信息

摘要通过昆虫细胞-杆状病毒表达系统表达HPV16L1 VLP,纯化鉴定后利用其建立血凝抑制实验,检测HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。利用重组杆状病毒感染悬浮培养的昆虫细胞表达HPV16L1蛋白,大量获得VLP;优化扩增蛋白的条件并用SDS-PAGE分析鉴定;经氯化铯密度梯度离心法纯化VLP;利用所得VLP建立血凝抑制试验,鉴定制备的HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制活性。优化蛋白表达条件结果显示,当重组杆状病毒感染细胞的MOI=10时目的蛋白表达量最大;按此滴度感染悬浮培养的昆虫细胞,收获、纯化VLP并鉴定其特异性;利用所得VLP建立了血凝抑制实验,鉴定HPV16L1单克隆抗体的血凝抑制效价为1∶16。建立的血凝实验,可用于鉴定和检测HPV16L1相关抗体,为HPV诊断试剂的开发提供实验基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型悬浮培养病毒样颗粒 HPV16L1单克隆抗体血凝抑制

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七年制医学微生物学实验教学探讨

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2007年第1期9卷 39-40页

作者：钱钧佟雷包丽丽哈尔滨医科大学微生物学教研室

医学微生物学是一门基础学科，而实验课是其重要的组成部分。为培养跨世纪人才，对七年制实验教学模式进行探索，针对学生的特点在双语教学和课堂的组织上进行改进，注意知识更新，使学生形成系统的科学思维及培养创新能力。达到更好的... 详细信息

医学微生物学是一门基础学科，而实验课是其重要的组成部分。为培养跨世纪人才，对七年制实验教学模式进行探索，针对学生的特点在双语教学和课堂的组织上进行改进，注意知识更新，使学生形成系统的科学思维及培养创新能力。达到更好的教学效果。

关键词：微生物学实验教学教学组织

来源：评论

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