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人类免疫缺陷病毒与结核分枝杆菌双重感染的流行病学、致病机制与诊断的研究进展

国外医学（免疫学分册） 2005年第4期28卷 239-243页

作者：曾明刘畅凌虹 150086 哈尔滨医科大学 518036 北京大学深圳医院哈尔滨医科大学微生物学教研室寄生虫教研室

近十年来,由于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)感染率在全球范围内不断上升,许多机会感染的发生率也随之而上升。其中最多见的就是HIV和结核分枝杆菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB)的联合感染。近... 详细信息

近十年来,由于Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV-1)感染率在全球范围内不断上升,许多机会感染的发生率也随之而上升。其中最多见的就是HIV和结核分枝杆菌(Mycobacterial tuberculosis,MTB)的联合感染。近年来的研究表明,这种联合感染并不是单纯的两种病症的叠加,而是一个相互促进的过程,这样使得HIV感染者和结核病患者的死亡率大大升高。本文从分子机制上综述了近年来对于HIV和MTB两种病原体相互促进的机制的研究进展,以及对HIV感染者进行MTB检测的最新技术。

关键词： HIV-1 MTB 双重感染机制诊断

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HIV-1黑龙江省分离株CHNHLJ03009包膜克隆及分析

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第11期25卷 885-889页

作者：周海舟李妍凌虹刘延成黄秉成服部俊夫哈尔滨医科大学微生物学和寄生虫学教研室 150086 黑龙江省疾病预防控制中心病毒病研究所日本东北大学医学系研究科感染病态学分野

目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV21)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分... 详细信息

目的分析黑龙江省Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type1,HIV21)原代分离株包膜糖蛋白的变异性及表型特征。方法从一名HIV阳性但未发病的感染者外周血单个核细胞提取DNA,采用保守引物进行HIV包膜直接克隆,进行序列分析及系统树分析。构建了一株带该包膜蛋白的伪病毒并利用表达CXCR4和CCR5的靶细胞进行了感染实验,观察该病毒包膜利用辅助受体的表型特征。结果共获得2个有功能全长env克隆,分别命名为CHNHLJ03009c34(Gen-Bank序列号为AY905493)和CHNHLJ03009c33。用全长env氨基酸序列与国内外分离株进行同源性比较分析发现,与分离株CHNHLJ03009c34的包膜同源性最高的病毒为云南的HIV-1B′亚型分离株RL42,同源性为91.52%。系统发育分析结果表明,该株为泰国B′亚型,与云南分离株RL42的遗传距离最近。对包膜蛋白结构分析结果显示,分离株CHNHLJ03009c34包膜在抗原性和亲水性上与RL42没有明显差别。感染性检测结果显示该病毒只能感染***5细胞,不能感染***2CR4细胞。结论本研究从黑龙江省一名HIV21阳性者克隆到HIV-1CHNHLJ03009病毒的包膜基因,该病毒属于B′亚型(泰国亚型),为R5亲嗜性毒株。该包膜基因克隆为首次报道的黑龙江分离株。

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒(HIV-1) 包膜变异性亚型感染

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SIVmac239对恒河猴B淋巴细胞生长繁殖的抑制作用研究

SIVmac239对恒河猴B淋巴细胞生长繁殖的抑制作用研究

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第三届全国中青年流行病学工作者学术会议

作者：姚振江王滨有李洪源赵景波高桥めぐみ高桥秀实哈尔滨医科大学公共卫生学院流行病学教研室日本医科大学微生物学免疫学教研室

目的:为探讨恒河猴免疫缺陷病毒SIVmac239感染CD4+T淋巴细胞后,可否产生某些抑制B淋巴细胞的生长活性因子,为HIV/AIDS进一步的病原学研究和控制提供有益的线索. 方法:用MTT实验观察不同时间收集的SIVmac239感染的CD4+T淋巴细胞(C8166... 详细信息

目的:为探讨恒河猴免疫缺陷病毒SIVmac239感染CD4+T淋巴细胞后,可否产生某些抑制B淋巴细胞的生长活性因子,为HIV/AIDS进一步的病原学研究和控制提供有益的线索. 方法:用MTT实验观察不同时间收集的SIVmac239感染的CD4+T淋巴细胞(C8166)上清和未感染SIVmac239的CD4+T淋巴细胞的上清对恒河猴B淋巴细胞(MM133)生长的抑制作用情况. 结果:SIVmac239感染的CD4+T淋巴细胞(C8166)上清含有抑制猕猴B淋巴细胞生长的因子,并且,其抑制作用效果随着作用时间的延长而增加. 结论:SIVmac239感染CD4+T淋巴细胞(C8166)可产生抑制B淋巴细胞(MM133)生长的因子.

关键词： SIVmac239 CD4+T淋巴细胞 B淋巴细胞抑制作用免疫缺陷病毒动物模型

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博尔纳病病毒持续感染细胞系中病毒RNA的原位PCR检测

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中国微生态学杂志 2005年第3期17卷 170-171页

作者：杨爱英张凤民马培林林志国刘玉芳谷鸿喜生田和良哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150000 日本大阪大学微生物病研究所

目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的原位PCR方法。方法首先设计BDV特异性引物以及检测BDV-RNA的原位PCR扩增系统,然后对BDV持续感染细胞(BDV/OL)和正常细胞(OL细胞)爬片进行原位PCR扩增,进而分别用DNA酶或RNA酶消化处理BDV/OL细胞爬片... 详细信息

目的建立检测博尔纳病病毒(BDV)RNA的原位PCR方法。方法首先设计BDV特异性引物以及检测BDV-RNA的原位PCR扩增系统,然后对BDV持续感染细胞(BDV/OL)和正常细胞(OL细胞)爬片进行原位PCR扩增,进而分别用DNA酶或RNA酶消化处理BDV/OL细胞爬片后,再进行原位PCR扩增。结果经原位PCR扩增后,约60%～70%的BDV持续感染细胞核中出现了阳性反应信号,但正常细胞无信号出现,并且病毒感染细胞中的阳性信号在RNA酶消化作用下消失,但不受DNA酶作用的影响。结论该研究建立的PCR检测方法具有BDV和RNA特异性,可以应用于检测相关动物或神经精神疾病患者的脑组织中BDV-RNA,为进一步证明BDV的致病性奠定基础。

关键词：博尔纳病病毒持续感染原位细胞系 PCR扩增 PCR检测方法正常细胞感染细胞 RNA酶 PCR方法特异性引物消化处理阳性反应消化作用精神疾病 DNA 细胞核无信号性信号酶作用脑组织致病性神经动物

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病毒分离和PCR-RFLP法对急性结膜炎标本中腺病毒感染及其型别的分析

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中国微生态学杂志 2005年第2期17卷 97-99页

作者：李莉宋武琦李小光马培林张凤民哈尔滨医科大学第一临床医学院眼科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　分析2 0 0 3年下半年收集的哈尔滨医科大学第一临床医学院急性结膜炎标本中的腺病毒( Adenovirus,Ad V)感染情况及其型别。方法　采集5 9例临床确诊为急性结膜炎患者的结膜拭子标本,在观察和分析接种细胞的病变( CPE)情况的基础上... 详细信息

目的　分析2 0 0 3年下半年收集的哈尔滨医科大学第一临床医学院急性结膜炎标本中的腺病毒( Adenovirus,Ad V)感染情况及其型别。方法　采集5 9例临床确诊为急性结膜炎患者的结膜拭子标本,在观察和分析接种细胞的病变( CPE)情况的基础上,采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析( PCR- RFL P)法,特异性检测CPE阳性细胞中腺病毒核酸的存在情况,并对PCR阳性扩增产物进行病毒型别的分析。结果　70 .7% ( 4 1/5 9)的急性结膜炎标本接种于培养细胞后可以引起明显的CPE;其中,5 3.6 % ( 2 2 / 4 1)的CPE阳性标本可以扩增出腺病毒核酸,RFL P分析证实6 8.18% ( 15 / 2 2 )的腺病毒感染为Ad3型,31.82 % ( 7/ 2 2 )的腺病毒感染为Ad7。结论2 0 0 3年下半年哈尔滨市急性结膜炎主要以腺病毒3、7型感染为主。提示结合病毒分离培养和PCR- RFL P方法。

关键词：腺病毒感染结膜炎 PCR 急性标本型别病毒分离限制性片段长度多态性分析 2003年下半年聚合酶链式反应 RFLP分析病毒核酸特异性检测分析与研究 CPE 医科大学感染情况阳性细胞扩增产物培养细胞哈尔滨市分离培养

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黑龙江地区乙型肝炎病毒耐药变异与基因型

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世界华人消化杂志 2005年第14期13卷 1696-1699页

作者：李迪张淑云谷鸿喜程险峰王晓燕哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学附属第二医学院科研实验中心黑龙江省哈尔滨市150086 黑龙江省医院南岗分院泌尿外科黑龙江省哈尔滨市150001 哈尔滨医科大学附属第二医学院传染科黑龙江省哈尔滨市150086

目的:探讨黑龙江地区乙型肝炎病毒发生YMDD基因变异与HBV基因型的关系. 方法:首先HBVA-F6个主要基因型特异性多引物对巢式PCR法对106例接受拉米夫定抗病毒治疗患者的血清HBV DNA进行基因分型和分析.再采用实时荧光PCR法对标本进行YMDD... 详细信息

目的:探讨黑龙江地区乙型肝炎病毒发生YMDD基因变异与HBV基因型的关系. 方法:首先HBVA-F6个主要基因型特异性多引物对巢式PCR法对106例接受拉米夫定抗病毒治疗患者的血清HBV DNA进行基因分型和分析.再采用实时荧光PCR法对标本进行YMDD变异检测. 结果:在106例标本中有8例为B基因型,其阳性率为7.6%;有94例为C基因型,其阳性率为88.7%:4例为D基因型,其阳性率为3.8%.从106例血清标本中检测出63例YMDD发生变异占59.4%,其余43例为野生型YMDD.在8例B基因型的标本中,有5例发生YMDD变异,变异率为62.5%:在94例C基因型的标本中,有55例发生YMDD变异,变异率为58.5%. HBV B,C两基因型间的YMDD变异率无显著性差异(P>0.05).在5例B基因型YMDD变异的标本中,有1例发生YIDD变异(20%),其余4例发生YVDD (YMDD+YVDD)变异占80%;在55例C基因型YMDD 变异的标本中,有26例发生YIDD(YMDD+YIDD)变并占47.3%,17例发生YVDD(YMDD+YVDD)变异占30.9%,12例发生YIDD+YVDD变异占21.8%.HBV B,C两基因型间的YMDD不同变异类型发生率无显著性差异(P>0.05). 结论:在黑龙江地区拉米夫定抗病毒治疗2—4 a,HBV YMDD变异率为59.4%;HBV B,C基因型标本间发生YMDD变异率及基因变异类型均无显著性差异.

关键词：黑龙江地区乙型肝炎病毒耐药变异基因型拉米夫定抗病毒治疗乙型肝炎

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人轮状病毒HRB-02株的分离鉴定

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微生物学杂志 2005年第1期25卷 104-107页

作者：宋岩魏丽丽程志东北农业大学动医学院病原分子生物学实验室黑龙江哈尔滨150030 哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室黑龙江哈尔滨150036

从哈尔滨医科大学第二临床医学院发生腹泻患儿粪便中取得标本 ,用MA10 4细胞传代培养 ,传至第4代时 ,细胞出现明显病变 ;电镜观察见到典型的轮状病毒颗粒 ;其RNA电泳型为 4∶2∶3∶2型 ,属A群轮状病毒。对其蚀斑特性和血凝特性进行了初... 详细信息

从哈尔滨医科大学第二临床医学院发生腹泻患儿粪便中取得标本 ,用MA10 4细胞传代培养 ,传至第4代时 ,细胞出现明显病变 ;电镜观察见到典型的轮状病毒颗粒 ;其RNA电泳型为 4∶2∶3∶2型 ,属A群轮状病毒。对其蚀斑特性和血凝特性进行了初步研究 ,把这株轮状病毒地方株命名为HRB 0 2株。为研究该株轮状病毒的分子生物学特性 ,从而研制诊断性抗原和疫苗奠定基础。

关键词：轮状病毒分离鉴定特性研究

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流感病毒RNA聚合酶的结构和功能研究进展

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中华结核和呼吸杂志 2004年第4期27卷 261-263页

作者：曲章义刘佳杨力明杨宝峰哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学药理学教研室 150086

流行性感冒病毒(influenza virus), 简称流感病毒,是引起流行性感冒(简称流感)的病原体.在20世纪人类遭受了4次流感大流行,致使数千万人失去了生命[1].近几年来禽流感等跨越种属障碍给人类健康和安全带来了更大的威胁,使人们清楚地认识... 详细信息

流行性感冒病毒(influenza virus), 简称流感病毒,是引起流行性感冒(简称流感)的病原体.在20世纪人类遭受了4次流感大流行,致使数千万人失去了生命[1].近几年来禽流感等跨越种属障碍给人类健康和安全带来了更大的威胁,使人们清楚地认识到加强和完善对流感这类经呼吸道传播并有可能来源于动物的传染性疾病的预防、控制和治疗具有重大科学意义和实际应用价值[2].

关键词：流感病毒 RNA聚合酶结构功能研究进展

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HIV-1包膜V3区在病毒侵入靶细胞中的增强作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第4期24卷 275-278页

作者：凌虹谷鸿喜李殿俊林道红张凤民傅松滨服部俊夫哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学免疫学教研室哈尔滨医科大学生物学教研室日本东北大学医学系研究科

目的　明确Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (humanimmunodeficiencyvirustype 1,HIV 1)包膜糖蛋白gp12 0第三可变区 (variableregion ,V3)在病毒进入靶细胞的早期阶段中的作用。方法　合成了 3个环状V3多肽 ,包括V3 BH10、V3 ADA和V3 89.6以及直链... 详细信息

目的　明确Ⅰ型人免疫缺陷病毒 (humanimmunodeficiencyvirustype 1,HIV 1)包膜糖蛋白gp12 0第三可变区 (variableregion ,V3)在病毒进入靶细胞的早期阶段中的作用。方法　合成了 3个环状V3多肽 ,包括V3 BH10、V3 ADA和V3 89.6以及直链和短链多肽V3 BH10 /CA、V3 NNT2 4和V3 IRI12。构建了 3株分别带HIVHXB2株、ADA株和 89.6株包膜的伪病毒并观察了多肽对不同嗜性HIV侵入靶细胞能力的影响。结果　 (1)HIV 1V3区多肽以毒株特异性模式增强HXB2、ADA和 89.6进入靶细胞 ;(2 )直链V3多肽与其环状多肽具有相似作用 ;带有C末端的短肽V3 NNT2 4也有与长链V3 BH10 /CA相近的作用 ,只有中央保守区的短链V3 IRI12没有类似功能。结论　本研究首次发现HIV 1V3区在病毒进入靶细胞早期阶段中具有毒株特异性增强病毒侵入的作用。该发现有助于进一步明确HIV

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒包膜糖蛋白靶细胞病毒感染细胞培养

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人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达

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中国公共卫生 2004年第4期20卷 433-435页

作者：李迪谷鸿喜庄敏张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086

目的　构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法　以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA... 详细信息

目的　构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法　以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA与质粒 (pUC19)重组构建重组质粒 (pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒 (pQE32 )做表达载体构建重组质粒(pQE32 -HPV18L1) ,并用酶切电泳验证。将重组质粒 pQE32 -HPV18L1转入工程菌 (M 15 ) ,用酶切电泳验证重组工程菌 (pQE32 -HPV18L1/M15 )正确性。利用SDS -聚丙酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基 - β-D -半乳糖苷 (IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质 (Westernblot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果　PCR扩增DNA片段约为 1 7Kb ,与预期结果相同。克隆重组质粒 pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同 ,而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒 pQE32 -HPV18L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为 1mmol/LIPTG诱导 4h后 ,获得HPV18L1最佳蛋白表达量 :SDS -PAGE显示 ,约 6

关键词：人乳头瘤病毒18型L1基因基因重组蛋白表达

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