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RAB5A基因表达改变对人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-a1的分化和侵袭特性影响

Acta Genetica Sinica 2002年第12期29卷 1043-1047页

作者：刘芳莉李钰高凌寒傅松滨李璞哈尔滨医科大学生物教研室哈尔滨150086

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SP... 详细信息

为探讨RAB5A基因对两种人肺腺癌细胞系GLC 82和SPC al分化及侵袭特性的影响 ,利用细胞转染技术将构建的RAB5A反义RNA重组质粒 (pcDNA3 AntiRAB5A)和RAB5A正义真核表达载体分别转染入低分化人肺腺癌细胞系GLC 82和低转移人肺腺癌细胞系SPC al中 ,在稳定筛选后 ,通过裸鼠体内实验和体外人工基底膜侵袭和细胞趋化运动实验 ,观察转染后细胞分化和转移特性的改变。观察转染前后细胞 ,发现转染后GLC 82细胞体外侵袭重组基底膜能力及趋化运动能力降低 (t检验P <0 .0 2 ) ;裸鼠体内成瘤实验 ,瘤块切片病理观察转染后GLC 82细胞出现腺腔样及基底模样结构 ,分化程度增高。转染后SPC al细胞体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力均增强 (t检验P <0 .0 2 )。RAB5A基因通过影响细胞的体外趋化运动能力、侵袭重组基底膜能力等对GLC 82和SPC al细胞的侵袭转移表型形成及GLC 82细胞的分化性发挥重要作用。

关键词： RAB5A 基因表达肺腺癌细胞系 GLC-82 SPC-a1 侵袭特性反义RNA 肿瘤侵袭肿瘤分化

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中国6个人群中Y染色体15个双等位基因标记变异频率分布及单体群分析

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Acta Genetica Sinica 2002年第4期29卷 283-289页

作者：于敏张咏莉陈峰薛雅丽于旸马琳琳黄小义刘岸史榕茜吕芙蕖黄承滨张贵寅李璞傅松滨哈尔滨医科大学生物教研室与医学遗传学研究室哈尔滨150086

以 6个群体 (5个民族 ) 342名男性为研究对象 ,采用等位基因特异性PCR技术对Y染色体上 15个双等位基因标记进行基因分型 ,得到 15个标记的变异频率分布并界定了 6个群体的单体群。结果显示 ,两个汉族人群中M9G的频率相当高 (96 2 0 %和... 详细信息

以 6个群体 (5个民族 ) 342名男性为研究对象 ,采用等位基因特异性PCR技术对Y染色体上 15个双等位基因标记进行基因分型 ,得到 15个标记的变异频率分布并界定了 6个群体的单体群。结果显示 ,两个汉族人群中M9G的频率相当高 (96 2 0 %和 96 4 3% ) ,为一特征性标志 ;四川汉族以高M95T(82 14 % )为显著特点 ;回族以M4 5A(18 5 7% )的高频率有别于其他 5个群体 (0 % )。进一步对单体群分析表明 ,4个少数民族群体享有共同的基本单体群 ,并根据群体间的共有单体群比较推测出 4个少数民族间的相对遗传距离。

关键词：中国基因标记变异频率分布 Y染色体双等位基因单体群

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大鼠缺血脑组织中树突状细胞的来源与作用

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中国免疫学杂志 2002年第12期18卷 813-819页

作者：李呼伦钟照华李国忠关丽荣王辉金连弘哈尔滨医科大学微生物教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第一附属医院神经内科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第二附属医院哈尔滨150086 哈尔滨医科大学组胚学教研室哈尔滨150086

目的 :探讨大鼠脑缺血后DC在脑损伤过程的意义。方法 :线栓法封闭大鼠右侧大脑中动脉。免疫组化检测缺血脑组织中DC的存在以及胶质细胞巨噬细胞转化成DC的情况 ,并检测了DC样细胞的功能。结果 :比较缺血组两侧半球 ,缺血侧DC数量显著... 详细信息

目的 :探讨大鼠脑缺血后DC在脑损伤过程的意义。方法 :线栓法封闭大鼠右侧大脑中动脉。免疫组化检测缺血脑组织中DC的存在以及胶质细胞巨噬细胞转化成DC的情况 ,并检测了DC样细胞的功能。结果 :比较缺血组两侧半球 ,缺血侧DC数量显著增多 (P <0 0 0 1)。比较缺血组与对照组 ,缺血组DC表达MHC II分子显著增高 (P <0 0 0 1) ,表达IL 10在 2 4h、48h也增高 (P <0 0 1,P <0 0 0 1)。比较缺血组两侧半球 ,6h和 12h缺血侧DC表达IL 1β明显增加 (P <0 0 5和P<0 0 1) ,12h、2 4h和 48hIL 6的表达显著升高 (P <0 0 5 ) ,TNF α的表达高峰分别为 6h～ 12h(P<0 0 5、P<0 0 1)和 48h～6d(P <0 0 1、P <0 0 5 )。结论 :脑缺血后DC参与了脑缺血病理过程 ,表达细胞因子产生免疫效应。

关键词：脑缺血树突状细胞细胞因子免疫组化动物模型免疫学

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喉癌颈淋巴结增生性滤泡反应分型及其意义

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中国肿瘤临床 2002年第9期29卷 613-615,629页

作者：徐晋张杰武宁晓明徐玉东王荣华贾深汕哈尔滨医科大学基础医学院生物教研室哈尔滨市150086 哈尔滨医科大学第三临床医学院头颈外科哈尔滨医科大学第三临床医学院病理科哈尔滨医科大学解剖教研室哈尔滨医科大学组织胚胎教研室

目的:探讨肿瘤引流淋巴结中增生性滤泡反应在抗肿瘤免疫中的作用。方法:47例喉癌患者的157枚淋巴结标本经重新制备,用抗CD45RO和抗CD20单克隆抗体免疫组化染色,对这些淋巴结中的滤泡反应进行分型研究。结果:滤泡反应可以分为两型:在生... 详细信息

目的:探讨肿瘤引流淋巴结中增生性滤泡反应在抗肿瘤免疫中的作用。方法:47例喉癌患者的157枚淋巴结标本经重新制备,用抗CD45RO和抗CD20单克隆抗体免疫组化染色,对这些淋巴结中的滤泡反应进行分型研究。结果:滤泡反应可以分为两型:在生发中心的中央区域有大量T淋巴细胞聚集的滤泡归为T细胞增生型,平均密度为(260±29)个/mm2;T淋巴细胞在生发中心散在分布者归为T细胞非增生型,平均密度为(58±24)个/mm2;两组密度差异极显著(P<0.001)。19例具有T细胞增生型滤泡反应的患者比28例T细胞非增生型患者有明显较高的5年生存率(P<0.01)和较低的淋巴结转移率(P<0.05)。结论:肿瘤引流淋巴结的滤泡反应类型对喉癌患者的长期生存有明显的影响。具有T细胞增生型滤泡反应的患者预后良好,而具有T细胞非增生型滤泡反应的患者则预后不良。

关键词：喉癌颈淋巴结增生性滤泡反应预后临床分型免疫组织化学

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胚胎植入前非整倍体筛查

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国际移植与血液净化杂志 2003年第6期 330-330页

染色体非整倍体改变在体外受精胚胎中十分多见,是导致人类辅助生殖失败的常见原因.胚胎细胞染色体的非整倍体筛查,已成为胚胎植入前遗传学诊断的主要内容.体外受精后胚胎活检,进行荧光原位杂交,避免非整倍体胚胎移入母体宫腔,能起到显... 详细信息

染色体非整倍体改变在体外受精胚胎中十分多见,是导致人类辅助生殖失败的常见原因.胚胎细胞染色体的非整倍体筛查,已成为胚胎植入前遗传学诊断的主要内容.体外受精后胚胎活检,进行荧光原位杂交,避免非整倍体胚胎移入母体宫腔,能起到显著提高着床率和改善受孕率的效果.

关键词：胚胎植入前遗传学诊断非整倍体荧光原位杂交

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肺腺癌同源正常组织中差异表达基因的克隆

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 578-581页

作者：王辉杨秋霞李殿俊李呼伦马建群张欣吕雪莹哈尔滨医科大学免疫学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第三附属医院黑龙江哈尔滨150086

目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组... 详细信息

目的　从与肺腺癌同源的正常组织中筛选差异表达基因 ,以期从分子水平阐明机体抑制肿瘤发生的机制。方法　利用抑制性消减杂交分别获得肺腺癌组织及肺腺癌同源正常组织cDNA片段 ,并建立相应的cDNA文库。用肺腺癌组织及与其同源的正常组织cDNA片段作为探针 ,分别进行逆向和正向斑点杂交 ,筛选与同源正常组织探针杂交而不与肺腺癌组织探针杂交的阳性克隆并测序 ,测序结果与GenBank中的序列进行同源性分析。结果　在肺腺癌同源正常组织中 ,获得 12个差异表达基因片段 ,其中 4个与细胞凋亡相关基因有较高的同源性 ;8个与人类不同染色体的不同区域有较高的同源性 ,功能不详。结论　推测肺腺癌同源正常组织中存在凋亡相关基因等 ,它们可能通过多种途径促进细胞凋亡而抑制细胞异常增殖。

关键词：克隆肺腺癌同源正常组织差异表达基因抑制性消减杂交细胞凋亡

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野生型p53基因转移抑制兔心肌细胞生长的实验研究

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中国地方病学杂志 2002年第5期21卷 348-350页

作者：滕宗艳张一娜尹新华凌虹哈尔滨医科大学附属第二医院黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨野生型 p5 3基因转移对兔心肌细胞生长的抑制作用及 p5 3基因用于心肌肥厚基因治疗的可能性。方法　将腺病毒介导的野生型 p5 3基因转入体外培养的乳兔心肌细胞 ,应用生化染色方法、Westernblot杂交检测野生型 p5 3基因的转... 详细信息

目的　探讨野生型 p5 3基因转移对兔心肌细胞生长的抑制作用及 p5 3基因用于心肌肥厚基因治疗的可能性。方法　将腺病毒介导的野生型 p5 3基因转入体外培养的乳兔心肌细胞 ,应用生化染色方法、Westernblot杂交检测野生型 p5 3基因的转染效率及表达结果 ,采用透射电镜、MTT增殖抑制实验 (MTT)及流式细胞仪细胞周期分析方法研究野生型 p5 3基因对细胞生长的抑制作用。结果　重组腺病毒能有效地将野生型 p5 3基因转入心肌细胞中 ,并且检测到 p5 3基因表达 ;转入的 p5 3基因导致心肌细胞收缩、体积变小 ;MTT结果显示 ,野生型 p5 3基因能够抑制心肌细胞生长 ,且生长抑制率呈现时间和剂量依赖性 ;心肌细胞增殖周期结果显示 ,细胞G0 - G1 期 DNA百分含量明显高于对照组 ,提示发生 G1 期阻滞。结论　野生型 p5 3基因能高效转染体外培养的心肌细胞 ,对心肌细胞生长有明显的抑制作用 ,其抑制作用的机理是由于野生型 p5 3基因影响心肌细胞的增殖周期 ,以上结果为心肌肥厚的基因治疗提供了重要的实验依据。

关键词：实验研究野生型p53基因心肌细胞腺病毒心肌肥厚基因治疗

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大鼠脑缺血后胶质细胞向树突状细胞转化的研究

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细胞与分子免疫学杂志 2002年第6期18卷 524-527页

作者：李呼伦钟照华李国忠金连弘哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学第一附属医院神经内科黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学组胚学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨缺血脑组织中树突状细胞 (DC)的来源 ,以其及是否参与脑缺血损伤的过程。方法　用线栓方法封闭大鼠右侧大脑中动脉制作动物模型。用免疫组化染色法 ,检测脑缺血 1h到第 6天时 ,缺血脑组织中DC(OX6 2 + )的存在 ,以及胶质细胞 ... 详细信息

目的　探讨缺血脑组织中树突状细胞 (DC)的来源 ,以其及是否参与脑缺血损伤的过程。方法　用线栓方法封闭大鼠右侧大脑中动脉制作动物模型。用免疫组化染色法 ,检测脑缺血 1h到第 6天时 ,缺血脑组织中DC(OX6 2 + )的存在 ,以及胶质细胞 /巨噬细胞 (OX4 2 + )转化成DC(OX6 2 + )的情况。同时检测活化后的DC样细胞表达MHC Ⅱ类分子的水平。结果　缺血脑半球和假手术的脑半球相比较 ,在 12hDC的数量明显增加 (P <0 .0 0 1)。在脑缺血组中 ,缺血脑半球与非缺血脑半球相比较 ,DC的数量也增多 (P <0 .0 0 1)。脑缺血第 6天 ,缺血组与假手术组进行比较 ,DC表达MHC Ⅱ类分子 (OX6 2 + OX6 + )显著升高(P <0 .0 0 1)。缺血脑半球在 1h到第 6天 ,OX4 2 + 的细胞转变成OX6 2 + OX4 2 + 的细胞逐渐增加 ,第 6天缺血脑半球与非缺血脑半球相比较显著增多 (P <0 .0 0 1)。脑缺血损伤的面积与以每 10 0mm2 脑组织切片为单位的OX6 2 + 细胞的数量呈正相关 (R2 =0 .8914 ,P <0 .0 0 1)。结论　脑缺血后 ,脑缺血组织中DC数量的增加与脑损伤的面积呈正相关 ,提示DC参与了脑缺血过程。大鼠脑缺血后 ,从胶质细胞向DC样细胞的转化是缺血脑组织中DC的来源之一。

关键词：大鼠树突状细胞脑缺血胶质细胞巨噬细胞损伤机制

来源：评论

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PC12细胞硫氧还蛋白cDNA的克隆及在大肠杆菌中的表达

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基础医学与临床 2002年第1期22卷 59-62页

作者：谢振华王爱民马春刘长振刘明杨歌德贺雨虹哈尔滨医科大学生物化学和分子生物学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨150086 清华大学生命科学院北京100084

硫氧还蛋白 (Thioredoxin ,TRX)是广泛存在于原核和真核细胞中的低分子量蛋白质 ,它含有保守的Cys Gly Pro Cys活性位点 ,作为多效性细胞因子而具有重要的生物学功能。从PC1 2细胞中提取总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出硫氧还蛋白cDN... 详细信息

硫氧还蛋白 (Thioredoxin ,TRX)是广泛存在于原核和真核细胞中的低分子量蛋白质 ,它含有保守的Cys Gly Pro Cys活性位点 ,作为多效性细胞因子而具有重要的生物学功能。从PC1 2细胞中提取总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出硫氧还蛋白cDNA并克隆到PUC1 8质粒上。序列分析表明 ,克隆所得序列与GenBank中大鼠硫氧还蛋白cDNA序列完全一致。将该基因亚克隆到表达质粒pQE30上 ,质粒pQE30 TRX在大肠杆菌M1 5中获得高效表达。带 6His的融合蛋白约占总菌体蛋白的 30 %。分析鉴定表明 ,纯化的融合蛋白质分子量是 1 4kD ,且具有二硫键还原酶活性。

关键词： PC12细胞硫氧还蛋白 RT-PCR 克隆表达大肠杆菌

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造血干细胞基因治疗甲状旁腺功能低下症的实验研究

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中华实验外科杂志 2002年第6期19卷 594-597页

作者：周毅宋纯许评宋春芳吕冰洁哈尔滨医科大学附属第一临床医学院普通外科 150001 哈尔滨医科大学基础医学院生物教研室

目的　探讨造血干细胞基因治疗甲状旁腺功能低下症 (HPT)的实验效果。方法　构建重组甲状旁腺素 (PTH)基因的小鼠干细胞病毒 (MSCV)重组质粒 ,转染PA31 7包装细胞 ,G41 8筛选阳性克隆 ,获得的重组病毒液感染造血干细胞 ,静脉注入HPT小... 详细信息

目的　探讨造血干细胞基因治疗甲状旁腺功能低下症 (HPT)的实验效果。方法　构建重组甲状旁腺素 (PTH)基因的小鼠干细胞病毒 (MSCV)重组质粒 ,转染PA31 7包装细胞 ,G41 8筛选阳性克隆 ,获得的重组病毒液感染造血干细胞 ,静脉注入HPT小鼠血中 ,检测各组小鼠症状改善情况、血PTH及血钙变化情况。结果　获得滴度为 2× 1 0 7CFU(集落形成单位 ) /ml的分泌人PTH的浓缩病毒悬液 ,1× 1 0 6 个细胞培养 48h时PTH的分泌量为 1 5ng。经聚合酶链反应 (PCR)扩增未检测到有野生型病毒存在 ,可以安全应用。感染造血干细胞输注后 ,实验组动物未再出现HPT临床表现 ,而且血钙及血PTH均可长期保持在接近正常值范围内 ,较单纯注射浓缩病毒悬液具有更好的疗效。结论　获得MSCV PTH重组质粒及高滴度的分泌人PTH的浓缩病毒悬液。整合有PTH基因的造血干细胞输注后达到较长期治愈小鼠HPT ,为进一步HPT的临床基因治疗提供了可靠依据。

关键词：造血干细胞基因治疗甲状旁腺功能低下症实验研究

来源：评论

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