检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2001年第2期18卷 135-138页

作者：杨焕杰宋岩刘权章李钰傅松滨张贵寅李璞哈尔滨医科大学医学遗传教研室 150086

目的　结合 G-显带核型分析诊断染色体易位 ,并对 G显带技术难以鉴定的微小易位进行分析。方法　采用生物素标记的显微切割制备的 X、Y、14q、10号染色体特异性探针 ,与患者外周血培养淋巴细胞中期染色体进行荧光原位杂交。结果　室温... 详细信息

目的　结合 G-显带核型分析诊断染色体易位 ,并对 G显带技术难以鉴定的微小易位进行分析。方法　采用生物素标记的显微切割制备的 X、Y、14q、10号染色体特异性探针 ,与患者外周血培养淋巴细胞中期染色体进行荧光原位杂交。结果　室温存放近 10年的标本、- 80℃冻存标本及新鲜标本均可看到清晰的杂交信号 ,染色体结构异常很清楚。结论　染色体涂染技术结合 G显带核型分析 ,可以准确识别G显带技术难以鉴定的染色体微小易位。

关键词：荧光原位杂交染色体涂染技术染色体结构异常诊断

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肌肽对PC12细胞氧化应激损伤的保护作用

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基础医学与临床 2001年第6期21卷 551-553页

作者：刘长振王爱民谢振华聂丹瑶马春杨歌德贺雨虹哈尔滨医科大学生物化学教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨150086 清华大学生命科学院北京100084

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞 ,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组 :正常对照组 ;损伤组 ;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠 ;肌肽保护组 ,同损伤组的制备 ,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞... 详细信息

本研究采用过氧化氢和谷氨酸纳作用于PC12细胞 ,成功的制作了氧化应激损伤的细胞模型。将培养的细胞进行分组 :正常对照组 ;损伤组 ;分别给予过氧化氢和谷氨酸钠 ;肌肽保护组 ,同损伤组的制备 ,但予先加入肌肽。用MTT法检测了各组细胞的生长状态并测定了LDH活性 ,观察了细胞形态和蛋白电泳等。结果表明 :在保护组 ,MTT的测定结果高于损伤组 ,LDH低于损伤组 ,其细胞生长状态和蛋白质电泳结果也与损伤组有显著差异 ,证明了肌肽对PC12细胞的氧化应激损伤有明显保护作用。

关键词： PC12细胞肌肽氧化应激损伤

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柯萨奇病毒B1/B3型二价VP1基因疫苗的构建及其免疫试验

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中华医学杂志 2001年第8期81卷 480-484页

作者：吴晓羽赵铁强田野沈景霞孟繁超刘雅君王乐民李晓光钟照华李呼伦哈尔滨医科大学第一临床医学院心内科 150001 哈尔滨市第一医院心内科哈尔滨医科大学微生物教研室

目的　构建柯萨奇病毒 (CV)B1/B3型二价VP1基因免疫质粒 ,并探讨其免疫原性。方法　通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增CVB1的主要中和抗原VP1基因 ,将分别由CMV和SV40启动子控制的CVB1和CVB3的VP1基因反向串联插入到真核表达载体... 详细信息

目的　构建柯萨奇病毒 (CV)B1/B3型二价VP1基因免疫质粒 ,并探讨其免疫原性。方法　通过逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术扩增CVB1的主要中和抗原VP1基因 ,将分别由CMV和SV40启动子控制的CVB1和CVB3的VP1基因反向串联插入到真核表达载体pCR3 Uni中。将该质粒转染鼠NIH3T3细胞 ,于转染后 2 4、48、96h进行免疫荧光及RT PCR检测。应用该重组质粒免疫BALB/c小鼠 ,于免疫前、免疫后 2、4、6周分别断尾采血 ,用ELISA方法检测CVB特异性抗体。结果　获得了含有CVB1和CVB3的VP1基因免疫质粒 ,RT PCR及免疫荧光检测结果表明该质粒在NIH3T3细胞获得瞬时表达 ,小鼠免疫后 4、6周均有特异性抗体产生。结论　本研究构建的CVB1/B3型二价VP1基因疫苗能诱导小鼠产生CVB特异性抗体 ,可以作为候选基因疫苗。

关键词：柯萨奇病毒基因疫苗免疫试验病毒性心肌炎

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纤溶酶原激活物抑制剂1反义RNA对猪主动脉内皮细胞中成纤维细胞生长因子的影响

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中华病理学杂志 2001年第3期30卷 215-216页

作者：富路梅宇李晖哈尔滨医科大学附属第一医院心内科 150001 哈尔滨医科大学生物化学教研室

许多研究表明纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)在动脉粥样硬化病变处的表达增加.PAI-1可以通过促进细胞外基质积聚、促进血栓形成和调节平滑肌细胞迁移和增殖而促进动脉粥样硬化的发展[1],因此,降低动脉壁PAI-1表达有可能延缓动脉粥样硬化... 详细信息

许多研究表明纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)在动脉粥样硬化病变处的表达增加.PAI-1可以通过促进细胞外基质积聚、促进血栓形成和调节平滑肌细胞迁移和增殖而促进动脉粥样硬化的发展[1],因此,降低动脉壁PAI-1表达有可能延缓动脉粥样硬化的发展.我们观察了构建的PAI-1反义RNA重组质粒转导入离体培养的猪主动脉内皮细胞(EC)后,表达的PAI-1反义RNA对细胞中PAI-1表达的作用及对成纤维细胞生长因子(FGF)的影响.

关键词：主动脉内皮细胞成纤维细胞生长因子纤溶酶原激活物抑制剂1

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高低转移肺腺癌细胞系中肿瘤抑制基因p16、p21和p53表达研究

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中华医学遗传学杂志 2001年第2期18卷 128-131页

作者：王柏秋闫承慧吴焱高慧王琦金焰黄承滨张贵寅傅松滨李璞哈尔滨医科大学医学遗传学教研室 150086

目的　探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法　利用 Fu Gene转染方式分别将 p2 1和 p16基因的表达质粒转入一对肺腺癌细胞系 Anip973和 AGZY83- a中 ,同时用含野生型 p5 3基因的腺病毒感染 p16基因转染前后的这一对细胞系... 详细信息

目的　探讨肿瘤抑制基因对肺腺癌细胞生长的抑制作用。方法　利用 Fu Gene转染方式分别将 p2 1和 p16基因的表达质粒转入一对肺腺癌细胞系 Anip973和 AGZY83- a中 ,同时用含野生型 p5 3基因的腺病毒感染 p16基因转染前后的这一对细胞系。对 P16和 P2 1蛋白过表达的细胞系进行了细胞生长曲线、克隆形成率、原位末端标记分析和流式细胞仪分析。结果　 p16基因的过表达只能使细胞系的 G1 期细胞比例提高 ,但细胞生长曲线、克隆形成率均未出现改变 ,未检测到凋亡信号。 P2 1蛋白过表达的一对细胞系细胞生长曲线斜率降低 ,克隆形成能力下降 ,并出现明显的 G1 期阻滞 ,但未检测到凋亡信号。p5 3基因感染 AGZY83- a、Anip973及经过 p16基因转染的细胞 AGZY83- ap16和 Anip973p16后呈现时间依赖性表达 ,细胞生长曲线和四唑盐比色法分析提示 ,野生型 p5 3基因的大量表达明显抑制以上 4种细胞的生长 ,Anip973和 Anip973p16的生长抑制率高于 AGZY83- a和 AGZY83- ap16 ;Anip973p16和 AGZY83- ap16的生长抑制率高于 Anip973和 AGZY83- a。这 4种细胞在感染 p5 3后出现典型的凋亡信号。结论　 p16基因的过表达并不能抑制细胞系的生长 ,而 p2 1基因的过表达通过 G1 期阻滞抑制这 1对肺腺癌细胞的生长 ;野生型 p5

关键词：高低转移肺腺癌肿瘤抑制期 p16 p21 p53 基因表达基因治疗

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酵母RNA聚合酶ⅡRpb2和Rpb3两亚基间相互作用位点的定位

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微生物学报 2001年第5期41卷 592-597页

作者：曲章义郑树谷鸿喜石滨明浙江大学肿瘤学研究所杭州310009 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150086

为研究S .pombeRNApolⅡ各亚基间体内装配成复合体的机制 ,本文首次用酵母双杂交系统鉴定了Rpb2和Rpb3两亚基间体内相互作用的位点。首先将Rpb2的 4个片段克隆至Gal4BD表达载体pAS2上 ,构建BD Rpb2片段融合蛋白重组质粒 ;同时将Rpb3克隆... 详细信息

为研究S .pombeRNApolⅡ各亚基间体内装配成复合体的机制 ,本文首次用酵母双杂交系统鉴定了Rpb2和Rpb3两亚基间体内相互作用的位点。首先将Rpb2的 4个片段克隆至Gal4BD表达载体pAS2上 ,构建BD Rpb2片段融合蛋白重组质粒 ;同时将Rpb3克隆至Gal4AD表达载体pGADGH上 ,构建AD Rpb3融合蛋白重组质粒。其次 ,将pGADGHRpb3分别与pAS2Rpb2各片段重组质粒共转化到受体酵母菌Y1 90感受态细胞内 ,筛选并鉴定β gal活性阳性 (β gal+)的共转化子。最后 ,将β gal+共转化子中的Rpb2片段进行序列分析并进行同源序列比较确定其在Rpb2中的位置。结果表明 ,Rpb2与Rpb3相互作用的位点位于Rpb2的 90 2～

关键词：酵母 RNA聚合酶亚基相互作用双杂交系统 Rpb2 Rpb3

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原位RT-PCR法定位检测柯萨奇B病毒RNA

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中国公共卫生 2001年第9期17卷 775-776页

作者：郭淑元郭彩玲庄敏谷鸿喜张凤民赵德超哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学第二附属医院

目的　用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法　对柯萨奇B病毒 ( 1～ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果　经... 详细信息

目的　用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法　对柯萨奇B病毒 ( 1～ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果　经原位RT PCR扩增后 ,病毒感染的HeLa细胞呈蓝黑阳性信号 ;并且这种阳性信号经RNaseA作用而消失 ,却不受DNase作用的影响 ;而非感染的HeLa细胞则不着色 ,其显示的结果与RT PCR的结果一致。结论　原位RT PCR法可特异地检测柯萨奇B病毒感染HeLa细胞中的病毒RNA ,是一种特异和敏感的定位检测方法 ,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系。

关键词：柯萨奇B病毒原位RT-PCR HeLa细胞

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PC12细胞APE/ref-1cDNA的克隆和表达

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第5期17卷 585-589页

作者：谢振华王爱民刘长振马春哈尔滨医科大学生物化学和分子生物学教研室神经生物学教研室哈尔滨150086

APE Ref 1是双功能核蛋白 ,它既能在碱基切除修复过程中切除脱嘌呤脱嘌啶位点 ,又能促进包括AP 1、Myb和NF κB等受氧化还原调节的转录因子对DNA的结合 .从PC12细胞中抽提总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出APE ref 1cDNA并克隆到pQE3 ... 详细信息

APE Ref 1是双功能核蛋白 ,它既能在碱基切除修复过程中切除脱嘌呤脱嘌啶位点 ,又能促进包括AP 1、Myb和NF κB等受氧化还原调节的转录因子对DNA的结合 .从PC12细胞中抽提总RNA ,经逆转录PCR(RT PCR)扩增出APE ref 1cDNA并克隆到pQE3 1表达质粒上的BamHⅠ和PstⅠ位点间 .经测序表明 ,PC12细胞的APE ref 1cDNA以正确的阅读框架重组进入表达质粒 ,表达重组质粒pQE3 1 APE在宿主菌BL2 1中得到稳定表达 .SDS PAGE鉴定表明 ,带 6个组氨酸的融合蛋白分子量为 3 8kD ,并经Ni NTA琼脂糖亲和纯化得到电泳纯融合蛋白 .Western印迹证明重组蛋白为APE ref 1融合蛋白 .

关键词： PC12细胞 APE/ref-1 RT-PCR 克隆表达限速酶

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人乳头瘤病毒16型结构蛋白在昆虫细胞中的表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第4期15卷 309-313页

作者：魏兰兰韩立群任皎田厚文骆卫锋陆振华谷鸿喜阮力中国预防医学科学院病毒学研究所遗传免疫研究室北京100052 哈尔滨医科大学微生物教研室

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白 ,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础。方法　将目的基因克隆至杆状病毒转移载体 ,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9... 详细信息

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白 ,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础。方法　将目的基因克隆至杆状病毒转移载体 ,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9,通过同源重组获得重组杆状病毒 ,用SDS PAGE凝胶电泳和Westernblot法检测重组子在昆虫细胞中表达的目的蛋白。结果　获得了稳定高效表达HPV16结构蛋白的重组杆状病毒 ,L1和L2蛋白的相对分子质量分别为 5 70 0 0和970 0 0 ,L1蛋白的表达产量约占昆虫细胞总体蛋白的 2 5 %～ 30 %。结论　人乳头瘤病毒

关键词：人乳头状瘤病毒病毒蛋白质类病毒体疫苗

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河南部分人群D_(16)S_(539)、D_7S_(820)、D_(13)S_(317)基因座遗传多态性分析

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河南医科大学学报 2001年第5期36卷 550-552页

作者：陈辉连建华刘清云刘华齐华宋国英李晓雯程晓丽游文凤河南医科大学细胞生物学与医学遗传学教研室郑州450052

目的 :了解河南地区人群中D16S539、D7S82 0 、D13S317基因座的遗传多态性 ,获得群体遗传数据。方法 :对2 30份无血缘关系个体的抗凝血样提取DNA ,应用多位点复合PCR扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分型方法调查D16S539、D7S82 0 、D13S... 详细信息

目的 :了解河南地区人群中D16S539、D7S82 0 、D13S317基因座的遗传多态性 ,获得群体遗传数据。方法 :对2 30份无血缘关系个体的抗凝血样提取DNA ,应用多位点复合PCR扩增技术结合聚丙烯酰胺凝胶电泳分型方法调查D16S539、D7S82 0 、D13S317基因座在河南地区群体中的基因型分布。结果 :D16S539基因座在河南地区人群中存在 9个等位基因 ,2 8种基因型 ;D7S82 0 基因座存在 9个等位基因 ,2 9种基因型 ;D13S317存在 8个等位基因 ,31种基因型。基因型频率分布符合Hardy Weinberg平衡。结论 :D16S539、D7S82 0 、D13S317基因座是进行人类群体遗传学和法医遗传学研究十分有用的遗传标记。

关键词：短串联重复序列遗传多态性聚合酶链反应 STR

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