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国际免疫学杂志 2016年第6期39卷 543-546页

作者：钱钧郭彩玲崔洪波宋武琦李爱梅哈尔滨医科大学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省高校医学病原学重点实验室、伍连德研究所 150081

目的构建人Toll样受体4（TLa-4）3＇非编码区（UTR）野生型/突变型基因重组表达质粒.方法在293T细胞中提取基因组DNA为模板,扩增并获得TLR4基因的3＇UTR片段.根据TLR43＇UTR与miR-122的靶点预测,设计TLR4 3＇UTR突变型TLR4 3＇UTR-m1.... 详细信息

目的构建人Toll样受体4（TLa-4）3＇非编码区（UTR）野生型/突变型基因重组表达质粒.方法在293T细胞中提取基因组DNA为模板,扩增并获得TLR4基因的3＇UTR片段.根据TLR43＇UTR与miR-122的靶点预测,设计TLR4 3＇UTR突变型TLR4 3＇UTR-m1.将pmiR-RB-REPORT^TM质粒和TLR4 3＇UTR/TLR4 3＇UTR-m1 PCR产物双酶切,将酶切后的载体与PCR产物连接,转化入DHSα细胞,在含Amp抗生素的LB固体培养基上培养,筛选阳性菌株,进行PCR验证及序列测定.结果成功构建人TLR4 3＇UTR野生型/突变型重组质粒.结论构建的质粒可以用于TLR4与miR-122相互作用的研究,为研究miRNA的作用提供依据.

关键词： Toll样受体4 基因重组质粒

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上调核糖核酸酶抑制因子对小鼠黑色素瘤B16细胞生长和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2015年第13期37卷 1331-1337页

作者：潘湘阳彭源陈俊霞重庆医科大学基础医学院:细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院第一临床学院重庆400016

目的研究核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达对小鼠黑色素瘤B16细胞生长和凋亡的影响。方法构建RI真核表达质粒p IRES2-EGFP-RI稳定转染B16细胞,未转染和空质粒作对照组(p IRES2-EGFP组),经G418筛选出阳性克隆。RT-... 详细信息

目的研究核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因表达对小鼠黑色素瘤B16细胞生长和凋亡的影响。方法构建RI真核表达质粒p IRES2-EGFP-RI稳定转染B16细胞,未转染和空质粒作对照组(p IRES2-EGFP组),经G418筛选出阳性克隆。RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光检测RI的表达;MTT检测细胞的增殖;流式细胞术、TUNEL及Hochest33342检测细胞周期及凋亡;Western blot检测凋亡相关的蛋白及ILK/PI3K/AKT信号通路关键分子的表达;分别注射各组B16细胞到C57/BL小鼠建立移植瘤模型,观察肿瘤的生长及肿瘤微血管的变化,进一步分析ILK/PI3K/AKT信号通路蛋白在肿瘤组织中的表达。结果转染RI细胞组的RI mRNA和蛋白表达水平显著升高;MTT结果显示B16-RI细胞较对照组增殖能力明显降低,流式细胞结果显示B16-RI细胞的S期明显增加,表明RI表达上调后细胞生长停滞于S期(P<0.05);Hochest 33342、TUNEL及Annexin V和PI双染色流式法细胞凋亡检测结果证实,B16-RI细胞与对照组相比出现大量凋亡细胞(P<0.01)及典型凋亡形态特征:染色质凝集,核碎裂和明亮的蓝色荧光等;Western blot结果显示,与对照组相比,B16-RI细胞中ILK、p-Akt、p-GSK3β、Bcl-2及β-catenin的表达明显降低,而活化的Caspase-3和Bax蛋白的表达显著增加(P<0.01);动物的移植瘤实验结果显示,转RI组的小鼠的瘤重显著降低(P<0.01),瘤组织中的血管密度明显减少,同时ILK、p-Akt、p-GSK3β、β-catenin在瘤组织中表达减少。TUNEL肿瘤组织凋亡检测结果与体外细胞一致。结论过表达RI可能通过调节ILK/PI3K/AKT信号通路显著抑制了小鼠黑色素瘤B16细胞的生长并诱导了B16细胞的凋亡。

关键词：核糖核酸酶抑制因子 B16细胞增殖凋亡 ILK/PI3K/AKT信号通路

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表达海肾荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型质粒的构建及鉴定

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国际病毒学杂志 2015年第3期22卷 149-153页

作者：王慧武帅钦陈阳钟照华赵文然佟雷哈尔滨医科大学病原学实验教学中心哈尔滨150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

目的构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达... 详细信息

目的构建能表达荧光素酶的重组柯萨奇病毒B组3型（coxsackievirus B3,CVB3）,以实现定量检测CVB3.方法将荧光素酶基因克隆至CVB3基因组开放读码框起始位置,重组病毒基因组DNA转染HeLa细胞以恢复病毒、测序,评价重组病毒的荧光素酶表达,扩增重组病毒并测定重组病毒株毒力.结果成功构建2个重组病毒质粒,转染HeLa细胞,表达海肾荧光素酶（humanizedform of Renilla Luc,hRLuc）、荧火虫荧光素酶（firefly luciferase,Luc）的pCVB3-hRLuc和pCVB3-Luc转染后第1代均可检测到hRLuc和Luc活性,但只有pCVB3-hRLuc转染细胞有明显细胞病变.扩增和纯化的CVB3-hRLuc病毒感染HeLa细胞可见明显细胞病变及hRLuc活性.扩增的CVB3-Luc没有观察到明显的细胞病变,且从第2代病毒开始就未能检测到荧光素酶活性.用HeLa细胞经空斑形成试验进行毒力测定,CVB3-hRLuc的毒力为1.4（107 pfu/ml）.结论成功构建了表达hRLuc的重组CVB3毒株CVB3-hRLuc,为定量研究CVB3感染打下基础.

关键词：柯萨奇病毒B组3型海肾荧光素酶基因重组

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高等医学院校生物学科主干课程整合与教学体系重构初探

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中国细胞生物学学报 2015年第4期37卷 542-546,587页

作者：李轶张莹刘先俊陈俊霞易发平唐吟宇朱慧芳卜友泉重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016

课程整合及相应的教学体系重构是当前高等医学教育改革的核心与热点。医学教育中,生物学学科主干课程的整合很有必要,但目前尚无成熟的模式。作者尝试将《生物化学》、《分子生物学》、《细胞生物学》和《医学遗传学》四门生物学主干课... 详细信息

课程整合及相应的教学体系重构是当前高等医学教育改革的核心与热点。医学教育中,生物学学科主干课程的整合很有必要,但目前尚无成熟的模式。作者尝试将《生物化学》、《分子生物学》、《细胞生物学》和《医学遗传学》四门生物学主干课程进行整合,对原有教学内容进行优化、精简和融合,形成了一门新的整合课程。在课程教学中,"以学生为中心",采用基于案例和问题的小组讨论式教学;采取形成性评价与总结性评价相结合的方法进行课程考核和成绩评定;跨科室组建教学团队,实行多学科联组教学。这些尝试为高等医学院校生物学相关课程的整合提供了有益的借鉴和经验。

关键词：生物化学分子生物学细胞生物学医学遗传学整合课程

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LncRNAs参与免疫调节及自身免疫性疾病的研究进展

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国际免疫学杂志 2015年第4期38卷 375-378页

作者：李兆瀛李矜玥孙博李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室 150081

在基因组非编码基因特异性的RNA分子表达产物中，长链非编码RNA（lncRNAs）在许多生物学过程中发挥了重要的调节作用，越来越多的研究发现，lncRNAs还参与了一些疾病的发生发展过程。目前较多的研究热点集中于lncRNAs和肿瘤的关系上，... 详细信息

在基因组非编码基因特异性的RNA分子表达产物中，长链非编码RNA（lncRNAs）在许多生物学过程中发挥了重要的调节作用，越来越多的研究发现，lncRNAs还参与了一些疾病的发生发展过程。目前较多的研究热点集中于lncRNAs和肿瘤的关系上，但是近年来人们发现lncRNAs还可能在免疫调节的不同时期发挥调控作用：在固有免疫应答中调节了免疫细胞的发生发展；在适应性免疫应答中调节效应免疫细胞的应答敏感性。这说明lncRNAs可能参与一些自身免疫性疾病的发病过程，了解近年来lncRNAs与免疫调节及自身免疫性疾病相关的研究成果很有意义。

关键词： LncRNAs 免疫调节 LincRNA 自身免疫性疾病

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过表达核糖核酸酶抑制因子通过调节ILK/PI3K/AKT信号途径抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞体内外生长

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中国生物化学与分子生物学报 2015年第4期31卷 373-382页

作者：黄梦鸽潘湘阳陈俊霞田强泸州医学院临床医学系四川泸州646000 重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 泸州医学院医学细胞生物学与遗传学教研室四川泸州646000

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿... 详细信息

核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)是胞浆内的一种酸性蛋白质.已有研究证明,RI与核糖核酸酶A(RNase A)和血管生成素(angiogenin,ANG)结合可抑制其活性.本室前期实验证实,RI可有效抑制某些肿瘤的生长和转移.然而,RI抑制肿瘤的分子机制尚不清楚.本研究探讨RI对小鼠黑色素瘤B16-F10细胞生长和凋亡的影响及其机制.MTT法结合流式细胞术分析结果证明,RI基因稳定转染导致B16-F10黑色素瘤细胞S期阻滞,抑制B16-F10黑色素瘤细胞增殖.Annexin V/PI结合流式细胞术结果显示,RI过表达引起细胞凋亡.与此相一致,蛋白质印迹分析显示,过表达RI引起抗凋亡分子Bcl-2表达下调,而Bax上调,同时伴有Pro-casepase 3激活.C57BL/6小鼠移植成瘤实验显示,与对照相比,转染RI的B16-F10细胞形成的肿瘤重量显著减少,同时伴有肿瘤组织微血管密度降低.提示RI过表达能抑制微血管生成.此外,体内外组织/细胞免疫化学和蛋白质印迹结果揭示,过表达RI可显著抑制整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)下游靶分子Akt和GSK-3β的磷酸化,并降低β-联蛋白的表达.研究结果证明,过表达RI可通过抑制ILK/PI3K/AKT信号通路,促进细胞凋亡,引起S期阻滞,并抑制血管生成,从而显著抑制小鼠黑色素瘤B16-F10细胞在体内、外的生长.上述结果提示,RI可能是治疗黑色素瘤的有效分子靶点.

关键词：核糖核酸酶抑制因子 B16-F10细胞细胞凋亡 ILK/PI3K/AKT信号通路

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Ⅰ型人类免疫缺陷病毒包膜gp120与乙型肝炎病毒表面抗原免疫原性比较

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国际免疫学杂志 2016年第4期39卷 313-318页

作者：王明霞王甲业李妍陈文江田丹袁丽庄敏凌虹哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室150081

目的比较Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）及乙型肝炎病毒（HBV）包膜蛋白初次免疫及加强免疫后诱导产生抗体的规律,为提高HIV-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型,分别用HIV-1 06044... 详细信息

目的比较Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）及乙型肝炎病毒（HBV）包膜蛋白初次免疫及加强免疫后诱导产生抗体的规律,为提高HIV-1包膜蛋白诱导保护性抗体产生能力提供创新思路.方法以10周龄雌性C57BL/6小鼠为动物模型,分别用HIV-1 06044毒株gp120三聚体（gp120T）、HBV表面抗原（HBsAg）蛋白与AddaVax佐剂免疫小鼠,背部皮下注射,共免疫3次,每次免疫间隔3周,第一、第二次免疫后7d和第三次免疫后3d、7d取血;第一次免疫后7d、第三次免疫后3d、7d取脾组织.用酶联免疫吸附实验（ELISA）及酶联免疫斑点实验（ELISpot）方法检测免疫小鼠血浆特异性结合抗体滴度及抗体分泌细胞（ASC）数量.结果 gp120T和HBsAg两种蛋白初次免疫后,动物均未产生明显的特异性抗体.两种蛋白加强免疫后特异性抗体水平明显升高,gp120T一次加强免疫及两次加强特异性抗体滴度逐渐升高,而HBsAg一次加强抗体滴度已经接近两次加强的水平.二次加强免疫后,gp120T和HBsAg免疫鼠脾脏特异性ASC数量差异不显著.结论 HIV-1包膜gp120T加强免疫诱导抗体水平达到高峰慢于HBsAg加强免疫,即加强免疫后gp120T诱导的回忆反应慢于HBsAg.

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp120 乙型肝炎病毒表面抗原

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6种明胶胶囊药壳对小鼠骨髓细胞微核率的影响

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广东医学 2015年第13期36卷 1982-1986页

作者：覃默韦美艳周芹方玲韦力嘉郑茳尧广西医科大学第一临床医学院南宁530021 广西医科大学广西医科大学细胞生物学与遗传学教研室南宁530021

目的探讨6种明胶胶囊药壳的致突变性,为研究药用明胶空心胶囊的安全性提供实验数据。方法以小鼠为受试对象,利用微核实验技术检测6种明胶胶囊药壳在4种不同剂量下对小鼠骨髓细胞微核率的影响,并制作肝脏病理切片观察小鼠肝组织病理学改... 详细信息

目的探讨6种明胶胶囊药壳的致突变性,为研究药用明胶空心胶囊的安全性提供实验数据。方法以小鼠为受试对象,利用微核实验技术检测6种明胶胶囊药壳在4种不同剂量下对小鼠骨髓细胞微核率的影响,并制作肝脏病理切片观察小鼠肝组织病理学改变。结果在临床成人使用剂量及临床成人使用剂量100倍条件下,6种明胶胶囊药壳未引起小鼠微核率的明显升高(P>0.05),仅在高于临床成人使用剂量的200、400和800倍情况下,有3种明胶胶囊药壳对小鼠微核率的影响有统计学意义(P<0.05,P<0.01),但这6种明胶胶囊药壳对于小鼠肝脏均未造成有意义的病理改变。结论选用的6种明胶胶囊药壳在临床成人使用剂量及低剂量条件下没有诱导染色体损伤的遗传毒性,但在中、高剂量下,有3种明胶胶囊药壳具有致染色体损伤的效应,这种潜在的遗传毒理威胁应引起行业注意,选用优质的明胶胶囊药壳是关键。

关键词：明胶胶囊药壳微核嗜多染红细胞

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山竹果皮提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响

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广西医学 2016年第4期38卷 452-456页

作者：赖燕燕黄应雯黄丹玚伍兰岚罗彬尤李晓龙广西卫生职业技术学院细胞生物学与遗传学教研室南宁市530021 广西中医药大学第一附院医院办公室南宁市530021 广西医科大学南宁市530021

目的探讨山竹提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度山竹提取物对HepG2细胞增殖的影响;分别应用Annexin-V/PI双重染色、PI单染法检测山竹提取物对HepG2凋亡和细胞周期的影响;天冬氨酸特异性... 详细信息

目的探讨山竹提取物对人肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响及其作用机制。方法采用MTT法检测不同浓度山竹提取物对HepG2细胞增殖的影响;分别应用Annexin-V/PI双重染色、PI单染法检测山竹提取物对HepG2凋亡和细胞周期的影响;天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)试剂盒检测山竹提取物对HepG2细胞Caspase-3酶活化的影响。结果不同浓度(100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L)山竹提取物均可抑制人肝癌细胞HepG2的增殖活性,且随着山竹提取物浓度及其作用时间的增加,细胞抑制率升高(P<0.05);山竹提取物浓度为256.67μmol/L时可诱导人肝癌细胞HepG2出现早期凋亡,并且随着山竹提取物作用时间的增加,凋亡早期癌细胞的比率增高。细胞周期分析结果显示随着山竹提取物的浓度升高(0μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L),G1期HepG2细胞比例升高,而S期细胞比例下降(P<0.05)。与对照组(0μmol/L)比较,各浓度(200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L、800μmol/L)山竹提取物组HepG2细胞的Caspase-3酶活性均升高(P<0.05),给药组的酶活力单位随给药浓度的增加而明显增加(P<0.05)。结论山竹提取物对人肝癌细胞HepG2有抑制增殖和促进凋亡的作用,其作用机制可能与抑制HepG2细胞进入S期和激活Caspase-3有关。

关键词：肝癌人肝癌细胞HepG2 山竹提取物增殖凋亡细胞周期天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3

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血管生成素及其突变体与核糖核酸酶抑制因子蛋白的相互作用

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基础医学与临床 2015年第3期35卷 313-317页

作者：刘玉林庄翔陈俊霞重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的研究血管生成素(ANG)突变体与核糖核酸酶抑制因子(RI)的相互作用。方法构建p CMV-3×flagANGH13R和p CMV-3×flag-ANGH114R突变体质粒;用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG突变体蛋白在BIU-87细胞内的定位;用... 详细信息

目的研究血管生成素(ANG)突变体与核糖核酸酶抑制因子(RI)的相互作用。方法构建p CMV-3×flagANGH13R和p CMV-3×flag-ANGH114R突变体质粒;用免疫荧光标记结合共聚焦显微镜技术来确立RI与ANG突变体蛋白在BIU-87细胞内的定位;用GST融合蛋白沉降技术检测RI与ANG突变体蛋白在细胞外的相互作用;用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测两蛋白在人膀胱癌BIU-87细胞内的相互作用。结果 p CMV-3×flag-ANGH13R和p CMV-3×flag-ANGH114R突变体质粒构建成功;RI和ANG突变体蛋白存在共定位现象;GST-RI融合蛋白诱导表达正确,RI和ANG突变体蛋白在原核反应体系中存在相互作用;RI与ANG突变体蛋白在真核细胞内存在相互作用。结论 RI和ANG突变体蛋白在原核反应体系和真核细胞中都存在相互作用,并且两突变型与RI相互作用存在一定的差异。

关键词：血管生成素突变体核糖核酸酶抑制因子 BIU-87细胞

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