检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2015年第12期31卷 1753-1763页

作者：范芳芳孙慧莹徐晖刘佳玮张海员李亦兰宁雪莲孙悦白静傅松滨周春水哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLA... 详细信息

利用Gateway克隆技术构建重组抗瘤肽AIK的原核表达体系,建立表达及纯化重组AIK的最优条件,为深入研究和利用AIK奠定基础。首先,设计含AttB重组位点的引物,通过重叠PCR技术扩增出Att B-TEV-FLAG-AIK序列,利用BP重组反应将目的序列TEV-FLAG-AIK克隆到供体载体pDONR223中,构建入门载体,再通过LR重组反应,将目的序列转移到目的载体pDEST15中,构建GST-AIK融合蛋白原核表达质粒。随后,在BL21(DE3)工程菌中优化诱导融合蛋白表达的条件。以谷胱甘肽磁珠纯化GST-AIK融合蛋白,再以rTEV酶切除GST,获得FLAG-AIK重组蛋白。最后以MTS法检测FLAG-AIK对白血病细胞HL-60的细胞毒性。菌液PCR验证和测序分析表明成功构建了重组抗瘤肽AIK的入门质粒和原核表达质粒。在BL21(DE3)工程菌中实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达。并测得在37℃下以0.1 mmol/L IPTG诱导工程菌(OD600=1.0)4 h,重组蛋白表达量占菌体总蛋白的30%以上。经GST亲和层析、rTEV酶切除GST标签及二次GST亲和层析获得纯度高于95%的FLAG-AIK蛋白。MTS法测得所制备的FLAG-AIK蛋白抑瘤活性与化学合成的AIK相当。总之,本课题应用Gateway克隆系统成功构建了抗瘤肽AIK的原核表达质粒,实现了GST-AIK融合蛋白的高效可溶性表达,经亲和层析获得了有生物活性的重组AIK多肽,为后续深入研究和大规模制备奠定了基础。

关键词：阳离子多肽位点特异性重组 GST融合蛋白诱导表达亲和层析抑瘤活性

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构建Neuregulin1克隆载体的实验

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中国临床康复 2005年第15期9卷 117-119页

作者：张际绯金连弘傅松滨史忠诚于旸哈尔滨医科大学组织学与胚胎学教研室哈尔滨医科大学医学遗传学教研室

目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用... 详细信息

目的:Schwann细胞具有促进神经元再生的作用,Neuregulin1(NRG1)具有促进神经元再生和Schwann细胞增殖的效应,构建NRG1克隆载体,可为下一步建立NRG1转染的Schwann细胞系,对神经损伤模型进行Schwann细胞移植,观察其对神经损伤的修复作用提供重要实验方法。方法:实验于2003-09/2004-01在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。提取幼龄大鼠脑RNA,反转录聚合酶链反应,用XbaⅠ和EcoRⅠ对目的基因和载体质粒进行双酶切,T4连接酶连接Schwann后转化Top10感受态大肠杆菌,挑取LB(Amp+)平板生长克隆菌摇菌扩增,用菌液扩增聚合酶链反应检测目的基因,同时提取质粒与空载体并列电泳验证克隆质粒,进行克隆载体测序。结果:获得一株NRG1克隆质粒,测序结果显示为NRG1新的异构体,用基因组DNA和cDNA为模板扩增聚合酶链反应验证是NRG1新的剪切体。结论:构建的NRG1克隆异构体是大鼠NRG1基因克隆载体,可用于进一步的细胞转染、蛋白表达功能检测和细胞移植研究。

关键词：克隆载体 Schwann细胞反转录聚合酶链反应聚合酶链反应检测哈尔滨医科大学神经元再生基因组DNA 细胞移植目的基因医学遗传学细胞增殖实验方法修复作用神经损伤损伤模型脑RNA 幼龄大鼠载体质粒大肠杆菌 cDNA

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环状RNA hsa_circ_0050900在乳腺癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的机制研究

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中国癌症杂志 2020年第12期30卷 977-983页

作者：王晓松陈俊霞重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室重庆400016

背景与目的:环状RNA(circular RNA,circRNA)作为特殊的非编码RNA,一般在体内低表达,且不易被RNA酶降解,结构与表达稳定。随着测序技术的进步,目前发现多种肿瘤的发生、发展与circRNA有关。但未见乳腺癌的发生、发展与hsa_circ_0050900... 详细信息

背景与目的:环状RNA(circular RNA,circRNA)作为特殊的非编码RNA,一般在体内低表达,且不易被RNA酶降解,结构与表达稳定。随着测序技术的进步,目前发现多种肿瘤的发生、发展与circRNA有关。但未见乳腺癌的发生、发展与hsa_circ_0050900的异常表达相关的报道。探究乳腺癌组织中hsa_circ_0050900的表达以及其影响乳腺癌细胞生物学行为的机制。方法:选取在重庆医科大学附属第一医院经手术切除的4例女性乳腺癌组织及对应的癌旁组织,采用RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)进行测序分析,并运用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)验证乳腺癌中hsa_circ_0050900的表达,其中包括30例乳腺癌组织及其癌旁组织(在重庆医科大学附属第一医院经手术切除),正常人乳腺上皮细胞系即对照组细胞MCF-10A以及两种乳腺癌细胞系MCF-7、SK-BR-3。通过RTFQ-PCR验证乳腺癌细胞中hsa_circ_0050900被敲低后的表达水平;分别运用细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)实验和EdU实验、细胞划痕实验、transwell实验验证细胞的增殖、迁移功能;细胞凋亡的检测采用TUNEL一步法;Hoechst 33342实验通过对细胞核染色确定细胞的状态以检测细胞凋亡;细胞周期蛋白D2(cyclin D2,CCND2)和周期蛋白依赖性激酶4(cyclin-dependent kinase 4,CDK4)的表达采用蛋白质印迹法(Western blot)检测。结果:根据测序结果,挑选出在乳腺癌和细胞中明显高表达的circRNA hsa_circ_0050900;构建的si-circ质粒可显著降低hsa_circ_0050900在乳腺癌细胞中的表达,转染si-circ的细胞增殖能力降低,并促进细胞凋亡,且降低细胞周期相关蛋白CCND2、CDK4的表达。结论:circRNA hsa_circ_0050900在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织,敲低hsa_circ_0050900对细胞增殖、迁移能力、细胞凋亡及细胞周期有调控作用。

关键词：环状RNA 乳腺癌 hsa_circ_0050900 增殖迁移凋亡细胞周期

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MiR-490对B组3型柯萨奇病毒复制的抑制作用

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病毒学报 2014年第6期30卷 619-623页

作者：王琳琳钟照华王蔷鲁平李梅徐海燕哈尔滨医科大学附属第一医院实验诊断教研室哈尔滨市150001 哈尔滨医科大学微生物教研室哈尔滨市150081

为了研究miR-490对柯萨奇病毒B组3型（Coxsackievirus B type 3,CVB3）的作用,本文采用体外实验将miR-490转染入HeLa细胞,用带有海肾荧光素酶（Renilla luciferase,RLuc）基因的CVB3重组体（RLuc-CVB3）感染HeLa细胞,感染后0~40h,每隔8h收获一次细胞,测定荧光素酶活性,观察miR-490对RLuc-CVB3复制的作用。同时在另一实验组我们用带有绿色荧光（Enhanced green fluorescence protein,EGFP）表达的CVB3重组体（EGFP-CVB3）攻击表达miR-490的HeLa细胞和用反义miR-490（AMO-miR-490）沉默miR-490表达的HeLa细胞,观察miR-490对EGFP-CVB3复制和表达的影响。结果我们发现miR-490抑制RLuc-CVB3复制,miR-490在RLuc-CVB3感染后32h抑制效果最显著（P〈0.05）。同时发现在感染EGFP-CVB3后32h,miR-490对EGFPCVB3的复制和表达也有显著的抑制作用,但抑制作用可以被反义miR-490完全抵消。因此我们得出结论,miR-490能够显著抑制CVB3的复制和表达。

关键词：柯萨奇病毒 miR-490 抑制病毒复制

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中国北方汉族人mtDNA D环多态性研究

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中华医学遗传学杂志 1999年第4期16卷 246-248页

作者：陈伟李钰陈宇冯会臣傅松滨张贵寅李璞哈尔滨医科大学生物教研室

目的探讨中国汉族人群ｍｔＤＮＡＤ环遗传多态性及平均核苷酸歧异频率。方法应用聚合酶链反应技术扩增ｍｔＤＮＡＤ环４６５ｂｐ高变区ＤＮＡ片段，分别进行６种限制性内切酶１０个位点的限制性片段长度多态性分析，部分标本进行聚合酶... 详细信息

目的探讨中国汉族人群ｍｔＤＮＡＤ环遗传多态性及平均核苷酸歧异频率。方法应用聚合酶链反应技术扩增ｍｔＤＮＡＤ环４６５ｂｐ高变区ＤＮＡ片段，分别进行６种限制性内切酶１０个位点的限制性片段长度多态性分析，部分标本进行聚合酶链反应产物直接自动测序分析。结果６种限制性内切酶１０个位点的限制性片段长度多态性分析结果共产生１４种限制性类型，根据Ｎｅｉ公式计算出汉族人ｍｔＤＮＡＤ环平均核苷酸歧异频率为０．０２９１。结论Ｄ环区较ｍｔＤＮＡ平均核苷酸岐异频率明显增高。

关键词：线粒体DNA D环遗传多态性中国北方汉族

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人体肺腺癌细胞系LGC-7910的G显带高分辨染色体研究

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中华肿瘤杂志 1990年第1期12卷 15-17+84页

作者：郭立荣李璞刘权章宋岩哈尔滨医科大学生物教研室

本文应用G显带和高分辨染色体分析的方法,对人体肺腺癌细胞系LGC-7910的第150、173及183三代细胞进行了系统的细胞遗传学研究。对该细胞系第150代计数100个细胞,发现其染色体众数为67～69,用G显带技术分别对第150、173及183代分析细胞10... 详细信息

本文应用G显带和高分辨染色体分析的方法,对人体肺腺癌细胞系LGC-7910的第150、173及183三代细胞进行了系统的细胞遗传学研究。对该细胞系第150代计数100个细胞,发现其染色体众数为67～69,用G显带技术分别对第150、173及183代分析细胞10、12及10个,发现本细胞系具有许多涉及复杂染色体重排的标记染色体,其中12个可全部或部分识别其结构来源。另外具有涉及7号染色体短臂7p15-p13缺失和1号染色体短臂(1p13)断裂的标记染色体,尚有7号染色体数目增多。本细胞系在长期的离体培养过程中是比较稳定的。作者认为这些染色体改变可能与人体肺癌的发生有一定联系。

关键词：肿瘤细胞系染色体显带

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柯萨奇B组病毒的RACE扩增与序列分析

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中国地方病学杂志 2005年第2期24卷 161-163页

作者：李小光张凤民马培林陈小贝杨爱英哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086

目的探讨3'RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术检测柯萨奇B组病毒(CVB)的可行性,并建立相应的实验检测方法。方法首先自行设计柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物sp1;然后从柯萨奇病毒(CVB1￣CVB6)感染的Hela细胞,... 详细信息

目的探讨3'RACE(rapidamplificationofcDNAends)技术检测柯萨奇B组病毒(CVB)的可行性,并建立相应的实验检测方法。方法首先自行设计柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物sp1;然后从柯萨奇病毒(CVB1￣CVB6)感染的Hela细胞,提取总RNA,用引物sp1结合OligodT进行3'RACE扩增,将产物克隆到pGEM-T载体上,挑取阳性菌落进行序列测定,与标准株进行同源性比对。结果获得了柯萨奇B组病毒6个型别的3'末端扩增产物及其核苷酸序列,同源性分析的结果显示扩增毒株与标准株之间的核苷酸同源性在95%￣99%之间,氨基酸同源性在98%￣100%之间。结论设计的引物“sp1”是柯萨奇B组病毒6个型别病毒基因组的一条通用引物;该引物结合OligodT进行的3'RACE扩增可用于柯萨奇B组病毒的检测。

关键词：柯萨奇B组病毒扩增产物型别 CVB 通用引物柯萨奇病毒阳性 RACE 病毒基因组毒株

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三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞作用的体外观察

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中华医学杂志 2009年第2期89卷 133-137页

作者：栾天竹傅松滨周立君李为民黄永麟哈尔滨医科大学附属第一临床医学院心内科 150001 哈尔滨医科大学遗传教研室

目的探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞（HCSMC）的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义。方法将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养，将细胞分为正常对照组、三氧化二砷（浓度分别为1．0、2．0、3．0、4．0及5．0μmol／L）组，... 详细信息

目的探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞（HCSMC）的促凋亡作用及其对损伤动脉再狭窄防治的意义。方法将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养，将细胞分为正常对照组、三氧化二砷（浓度分别为1．0、2．0、3．0、4．0及5．0μmol／L）组，通过透射电镜、DNA电泳、原位细胞凋亡检测试剂盒（TUNEL）、四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞活性观察三氧化二砷促细胞凋亡作用，Western印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化。结果随三氧化二砷浓度的增加能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关，观察第7天、浓度为5．0μmol／L时细胞生存数为[（4.41±0．10）×10^5／ml，正常对照组（30．11±0．93）×10^5／ml差异有统计学意义，P〈0．05]，透射电镜下可见凋亡小体、DNA电泳可见典型凋亡后梯形条带、TUNEL可见凋亡细胞由（16．0±3．1）％增至（38．7±2．7）％（P〈0．05），三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl—2表达。正常对照组均不见典型上述变化。结论三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡，抑制其过度增殖。

关键词：三氧化二砷平滑肌细胞细胞凋亡

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组特异性成份(Gc)亚型在六个民族中的分布

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人类学学报 1993年第2期12卷 175-181页

作者：尹娇杨张贵寅于世辉王晓明沈阳医学院生物教研室哈尔滨医科大学遗传研究室哈尔滨150086

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术结合改良的磺基水杨酸沉淀法(PharmalytepH4.5-5.4)检测了中国六个民族1 021名彼此无关的血清的Gc亚型。哈尔滨汉族、鄂温克族、达翰尔族、蒙古族、鄂伦春族、锡伯族的Gc 1F基因频率分别为0.4... 详细信息

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳技术结合改良的磺基水杨酸沉淀法(PharmalytepH4.5-5.4)检测了中国六个民族1 021名彼此无关的血清的Gc亚型。哈尔滨汉族、鄂温克族、达翰尔族、蒙古族、鄂伦春族、锡伯族的Gc 1F基因频率分别为0.4246、0.4941、0.4479、0.4107、0.4606、0.4503;Gc 1S的基因频率分别为0.2587、0.2936、0.3151、0.2798、0.3370、0.3035;Gc 2的基因频率分别为0.3065、0.2064、0.2266、0.3006、0.2022、0.2388。在五个民族中发现了十六名个体携带罕见的Gc等位基因(1A2、1A6、1A7、1A9、1C2、1C3、1C4、1C10、2A?)。

关键词：组特异性成份遗传多态性人类遗传

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悬浮培养昆虫细胞表达重组HPV16 L1蛋白

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中华实验和临床病毒学杂志 2007年第4期21卷 352-354页

作者：韩聪王燕商庆龙魏兰兰陈思佳哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—P... 详细信息

目的用悬浮培养昆虫细胞方式表达人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，为获得病毒样颗粒（VLPs）及进一步深入研究疫苗和诊断试剂盒打基础。方法优化昆虫细胞Si9的悬浮培养条件；优化扩增病毒和蛋白的条件；空斑试验测定病毒滴度；SDS—PAGE和Western Blot分析目的蛋白的表达情况；透射电镜观察细胞内HPV16 L1蛋白形成的VLPs。结果优化后，悬浮培养昆虫细胞初始接种密度为5×10^5 cell／ml，以MOI（Multiplicity of Infection）=10接种重组病毒rBacV／HPVl6L1，72～84h收获细胞沉淀为最佳。经透射电镜观察，在重组病毒感染的昆虫细胞内，存在HPV16L1蛋白形成的VLPs。结论优化了细胞悬浮培养、病毒扩增和蛋白表达的条件；电镜观察在重组病毒rBacV／HPV16L1感染的昆虫细胞中，HPV16L1蛋白可形成VLPs。

关键词：乳头状瘤病毒人蛋白质L1 细胞培养的病毒样颗粒

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