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武警后勤学院学报（医学版） 2015年第3期24卷 182-184,F0002页

作者：王永光陈旭义刘英富陈小义钟士江河北医科大学河北石家庄050017 武警后勤学院附属医院天津300162 武警后勤学院细胞生物学与遗传学教研室天津300309

【目的】建立中性蛋白酶Ⅱ(DispaseⅡ)对神经球的分散、消化及消化后神经元的诱导培养方法。【方法】取15 d胎鼠的脑组织,经剪碎、研磨、血清培养基培养得到的神经球,培养2 d后观察细胞贴壁情况,并换成诱导剂培养液培养3 d,用DispaseⅡ... 详细信息

【目的】建立中性蛋白酶Ⅱ(DispaseⅡ)对神经球的分散、消化及消化后神经元的诱导培养方法。【方法】取15 d胎鼠的脑组织,经剪碎、研磨、血清培养基培养得到的神经球,培养2 d后观察细胞贴壁情况,并换成诱导剂培养液培养3 d,用DispaseⅡ消化已培养的神经球,后期将经DispaseⅡ消化后的细胞继续进行培养、诱导、鉴定。【结果】用DispaseⅡ消化神经细胞后体外培养并诱导,神经球能够诱导分化成神经元,并能形成典型的神经元细胞网状,经NSE鉴定阳性。【结论】利用DispaseⅡ消化的方法能够将神经球消化成单个细胞,消化后的细胞能够继续培养并向神经元分化。

关键词：中性蛋白酶Ⅱ 神经元神经球诱导培养

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基于体细胞突变的单克隆抗体制备技术自主多样化库系统的原理与应用

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国际免疫学杂志 2015年第5期38卷 459-464页

作者：潘超宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室 150081

自主多样化库（ADLib）是近年新建立的一种基于体细胞突变的生产抗体的系统，其原理为以鸡的传染性法式囊淋巴细胞瘤细胞（DT40，表达鸡IgM有膜结合与分泌两种形式）为靶细胞，利用-曲古酶抑菌素（TSA）抑制DT40的去乙酰活性酶，促进组... 详细信息

自主多样化库（ADLib）是近年新建立的一种基于体细胞突变的生产抗体的系统，其原理为以鸡的传染性法式囊淋巴细胞瘤细胞（DT40，表达鸡IgM有膜结合与分泌两种形式）为靶细胞，利用-曲古酶抑菌素（TSA）抑制DT40的去乙酰活性酶，促进组蛋白乙酰化，从而造成免疫球蛋白基因高频转换，在细胞的表面展示膜结合IgM文库，最后通过抗原标记磁珠分选法从文库中选择有抗原特异性鸡源性抗体的细胞，培养细胞获得分泌性单克隆抗体IgM。进而，通过将人IgG的重链Fc段DNA序列插入DT40细胞IgM重链区相应位置，建立了合成人Fc段鸡Fab段的嵌合人IgG（重链Fc段决定免疫球蛋白类型）的ADLib系统。ADLib系统可应用于生产诊断与治疗性抗体药物的单克隆抗体（mAb）。

关键词：自主多样化库系统曲古酶抑菌素单克隆抗体人嵌合抗体

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肠道菌群与自身免疫性疾病研究进展

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中国微生态学杂志 2015年第10期27卷 1233-1237页

作者：李苗孙迪付冰冰孙晓鹏佳木斯大学附属第一医院风湿免疫科黑龙江佳木斯154000 哈尔滨医科大学基础医学院微生物教研室黑龙江哈尔滨150006

自身免疫性疾病是以机体自身反应性T细胞和B细胞过度活化,大量自身抗体产生为特点,并引起多器官多系统广泛损伤的慢性系统性多关节炎症性疾病。研究证实,特定的肠道菌群可通过特定的分子模式诱导产生多种炎性细胞及炎性因子从而调节肠... 详细信息

自身免疫性疾病是以机体自身反应性T细胞和B细胞过度活化,大量自身抗体产生为特点,并引起多器官多系统广泛损伤的慢性系统性多关节炎症性疾病。研究证实,特定的肠道菌群可通过特定的分子模式诱导产生多种炎性细胞及炎性因子从而调节肠黏膜屏障的完整性,影响黏膜免疫功能,引起免疫性炎症。深入了解两者之间的关系,对进一步研究自身免疫性疾病的病因及发病机制,优化治疗策略等具有重要的临床应用价值。本文主要对肠道菌群与类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、脊柱关节炎等自身免疫性疾病的关系做一简要综述。

关键词：自身免疫性疾病肠道菌群黏膜免疫

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新人工阳离子多肽AIK抗肿瘤活性的初步研究

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中国肿瘤生物治疗杂志 2014年第6期21卷 617-623页

作者：范芳芳徐晖孙慧莹刘佳玮张海员李亦兰宁雪莲白静傅松滨周春水哈尔滨医科大学基础医学院医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的:研究新发现的人工阳离子多肽AIK在体内外对肿瘤细胞的抑制作用和杀伤机制。方法:MTS方法检测AIK对急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制作用,确定AIK最佳作用浓度及作用时间,并以此条件测定其对10株人肿瘤细胞(95C、95D、HL-60、He La... 详细信息

目的:研究新发现的人工阳离子多肽AIK在体内外对肿瘤细胞的抑制作用和杀伤机制。方法:MTS方法检测AIK对急性早幼粒白血病细胞HL-60的抑制作用,确定AIK最佳作用浓度及作用时间,并以此条件测定其对10株人肿瘤细胞(95C、95D、HL-60、He La、B95-8、HO-8910PM、HO-8910、SMMC-7721、U2OS和A549细胞)及人正常肝细胞HL-7702的抑制效应。流式细胞术检测AIK对宫颈癌He La细胞凋亡的影响,并经DAPI染色后荧光显微镜下观察细胞的形态学变化。制备小鼠荷肝癌H22细胞皮下移植瘤模型,将36只模型小鼠随机分为PBS阴性对照组、AIK低剂量组[8 mg/(kg·d)]、高剂量组[15 mg/(kg·d)]以及MTX阳性对照组[1 mg/(kg·d)],给予连续10 d瘤旁注射治疗,记录小鼠体质量并观察其活动状态;用药结束后,脊椎脱臼法处死小鼠,比较肿瘤质量及体积。结果:AIK对10种肿瘤细胞均有不同程度的杀伤活性,600μg/ml AIK作用24 h后对肺巨细胞癌95C、白血病HL-60和宫颈癌Hela细胞生长的抑制分别达(90.33±0.75)%、(89.06±1.28)%和(76.09±3.68)%。AIK处理组He La凋亡细胞[(4.88±0.57)%vs(0.51±0.19)%,P<0.05]及坏死细胞比例[(2.96±0.50)%vs(1.87±0.27)%,P<0.05]均显著高于对照组,400μg/ml AIK处理组50%以上的H22细胞出现胞膜破碎、细胞裂解等坏死表型。AIK高剂量组、低剂量组和MTX阳性对照组的移植瘤体积和质量均显著低于PBS阴性对照组(P<0.01)。4组小鼠体质量在治疗期间没有显著差异,但MTX组小鼠体质量在治疗第5天开始出现下降,其余3组在药物处理期间呈上升趋势。结论:AIK能够抑制多种肿瘤细胞的生长,诱导细胞凋亡和坏死;显著抑制肝癌H22细胞小鼠皮下移植瘤的生长,无明显不良反应。

关键词：阳离子多肽 AIK 肿瘤细胞凋亡细胞坏死

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胃癌BGC-823细胞增殖与NOTCH1和HES1表达的关系

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宁夏医科大学学报 2015年第8期37卷 906-909,封4页

作者：张竞文徐方胡以平秦憬张建中宁夏医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学系生育力保持教育部重点实验室银川750004 第二军医大学细胞生物学教研室上海200433 宁夏医科大学总医院病理科银川750004

目的探讨HES1蛋白在胃癌细胞增殖中的作用。方法在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下培养胃癌BGC-823细胞和肝干细胞系(LEPC),MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学检测HES1和NOTCH1表达。结果培养48h时,BGC-823和LEPC细胞生长良好,MTT比色法... 详细信息

目的探讨HES1蛋白在胃癌细胞增殖中的作用。方法在5%CO2、37℃、饱和湿度条件下培养胃癌BGC-823细胞和肝干细胞系(LEPC),MTT法检测细胞增殖活性,免疫细胞化学检测HES1和NOTCH1表达。结果培养48h时,BGC-823和LEPC细胞生长良好,MTT比色法检测显示,BGC-823细胞组增殖能力明显强于LEPC组,BGC-823组培养24、48和72h的OD值(分别为0.67±0.17、1.02±0.14和1.22±0.24)均明显高于LEPC组(分别为0.36±0.16、0.35±0.07和0.38±0.14)(P均<0.05)。免疫细胞化学染色可见,少数BGC-823细胞核HES1阳性,比较多的BGC-823细胞核周胞质呈HES1阳性,少数细胞阳性着色见于细胞质和细胞核;HES1阳性以弥漫性表达为主,细胞质表达明显多于细胞核,巨细胞表达更加明显。LEPC组部分细胞HES1免疫组化染色阳性,阳性着色主要见于细胞核。在培养48和72h,BGC-823组HES1蛋白免疫细胞化学染色平均光密度值(OD)均明显高于LEPC组(P<0.05)。BGC-823大多数细胞NOTCH1阴性,少数阳性。LEPC组可见部分细胞NOTCH1免疫组化染色阳性。在培养24、48和72h,BGC-823组NOTCH1平均OD值与LEPC组的差异无统计学意义(P>0.05)。结论 HES1高表达与BGC-823细胞增殖能力较强有关。

关键词： HES1,Notch信号通路 BGC-823细胞肝干细胞系,增殖

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肿瘤抑素41肽重组表达及活性研究

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医学分子生物学杂志 2015年第3期 150-154,158页

作者：张立新余思茗霍琳满刘兴汉黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室哈尔滨市 150086

目的：构建肿瘤抑素41肽重组质粒，使其高效表达并纯化得到41肽，研究其抗肿瘤活性。方法人工设计并合成肿瘤抑素41肽基因序列，克隆到表达载体 pTYB21上，转化到大肠埃希菌 BL?21（DE3）中， IPTG诱导融合蛋白高效表达，几丁质亲和层... 详细信息

目的：构建肿瘤抑素41肽重组质粒，使其高效表达并纯化得到41肽，研究其抗肿瘤活性。方法人工设计并合成肿瘤抑素41肽基因序列，克隆到表达载体 pTYB21上，转化到大肠埃希菌 BL?21（DE3）中， IPTG诱导融合蛋白高效表达，几丁质亲和层析柱纯化后经Tricine?SDS?PAGE鉴定41肽。利用MTT法、吖啶橙／溴化乙锭（ AO／EB）荧光染色、小鼠H22腹水型转移型肝癌实体瘤模型抑瘤实验并结合组织病理切片来研究肿瘤抑素41肽的生物学活性。结果构建肿瘤抑素41肽重组质粒，获得可溶性肿瘤抑素41肽。体外实验显示，41肽具有抑制人脐静脉内皮 HUVEC 细胞、人胃癌 HGC?27细胞和人肝癌HepG2细胞增殖和促进HUVEC、 HGC?27细胞凋亡的作用。体内实验显示，41肽对小鼠H22腹水型转移肝癌实体瘤生长具有明显的抑制作用，抑瘤率达到34?35％。结论成功构建了pTYB21?41肽重组质粒，肿瘤抑素41肽具有显著的抗肿瘤活性，为肿瘤抑素机制研究和临床应用研究奠定了基础。

关键词：肿瘤抑素基因重组蛋白表达抗肿瘤活性

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自身抗体及其作用与机制研究进展

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国际免疫学杂志 2015年第6期38卷 581-585页

作者：黄鸿鑫宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150086

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底... 详细信息

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底物水解，发挥调节作用，还有一部分自身抗体具有治疗潜能。因此，自身抗体作用与相关机制的阐明，对进一步加深对自身抗体的理解具有重要意义。

关键词：自身抗体细胞损伤催化酶细胞调控

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结核分枝杆菌北京基因型菌株流行的可能机制

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中国微生态学杂志 2015年第4期27卷 495-496,F0003页

作者：孙高翔李迪哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150086

北京基因型菌株是结核分枝杆菌的一个进化支,通过分子流行病学、实验和临床研究调查,基于其传播和引起疾病能力的增强及遗传同质性,可能比其他结核分枝杆菌菌株更有选择性优势。不同的细胞实验和动物模型证明,相比其他基因型菌株,北京... 详细信息

北京基因型菌株是结核分枝杆菌的一个进化支,通过分子流行病学、实验和临床研究调查,基于其传播和引起疾病能力的增强及遗传同质性,可能比其他结核分枝杆菌菌株更有选择性优势。不同的细胞实验和动物模型证明,相比其他基因型菌株,北京基因型菌株毒力更强,引起更严重的组织病理学改变,加速疾病的进程同时增加死亡率,抑制宿主免疫反应。文献报道显示,北京基因型菌株具有独特的基因型,其超毒力可以通过与宿主免疫系统的相互作用来说明。本文综述近年北京基因型菌株流行及菌株毒力方面的研究成果。

关键词：北京基因型基因多样性毒力

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肿瘤标志物——Ang-2对肺癌临床检测意义

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黑龙江医药 2015年第1期28卷 17-19页

作者：李明琦石学魁尤琦王大为贾云鹤王锡山张鹏宇哈尔滨医科大学附属肿瘤医院黑龙江哈尔滨市150040 牡丹江医学院病原生物学教研室黑龙江省牡丹江市157000 天津医科大学肿瘤医院检验科天津300060

目的:探讨一种新型肿瘤标志物促血管生成素-2(Ang-2)对肺癌诊断、治疗监测、预后判断的应用价值。方法:对112例肺癌患者,包括鳞癌(squamous cell carcinoma,SC)患者42例、腺癌(adenocarcinoma of lung,AC)46例、小细胞肺癌(small-cell l... 详细信息

目的:探讨一种新型肿瘤标志物促血管生成素-2(Ang-2)对肺癌诊断、治疗监测、预后判断的应用价值。方法:对112例肺癌患者,包括鳞癌(squamous cell carcinoma,SC)患者42例、腺癌(adenocarcinoma of lung,AC)46例、小细胞肺癌(small-cell lung cancer,SCLC)24例,以及16例健康者健康体检者以血清促血管生成素2(Ang-2)检测为主体,同步测定其他相关肿瘤标志物血清癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇酶(NSE)、角蛋白19片段(CYFRA21-1)、鳞状细胞癌相关抗原(SCC)。比较病理分型、临床分期及远处转移对血清Ang-2的影响。评价CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC与Ang-2联合检测的敏感性和并进行其与Ang-2相关性分析。结果:肺癌(鳞癌、腺癌、小细胞肺癌)血清Ang-2水平高于正常对照组(P<0.05);非小细胞肺癌Ⅲ、Ⅳ期患者血清Ang-2水平显著高于对照及Ⅰ、Ⅱ期;远处转移患者血清Ang-2水平显著高于非远处转移者;CEA、NSE、CYFRA21-1、SCC与Ang-2联合检测各病理类型肺癌阳性率高于单独检测阳性率;CEA、CYFRA21-1、SCC与Ang-2相关关系有统计学意义。结论:血清Ang-2对肺癌患者的诊断、治疗监测、预后判断均有临床意义,应用Ang-2与其他肿瘤标志物联合检测可提高肺癌诊断阳性率。

关键词：肺癌 NSCLC,血管发生 Ang-2 肿瘤标志物

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硒代半胱氨酸合成蛋白基因表达对过氧化氢介导的内皮细胞EVC-304损伤的影响

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中华地方病学杂志 2014年第4期33卷 383-387页

作者：赵汉东孙美娜李凤兰李晖哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室 150081

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS... 详细信息

目的：观察硒代半胱氨酸合成蛋白（SEPSECS）基因表达对过氧化氢（H2O2）介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304损伤的影响。方法体外培养人内皮细胞EVC-304，对细胞进行转染处理，分为对照组、SEPSECS低表达组、空载体转染组、SEPSECS高表达组，分别用0、200、400、600、800、1000μmol/L H2O2处理细胞6 h。转染后，用实时荧光定量PCR 法检测各组细胞SEPSECS基因表达，蛋白质免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞SEPSECS蛋白表达，流式细胞仪对各组细胞进行细胞周期检测。H2O2处理后，用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测各组细胞丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）含量。结果转染后对照组、SEPSECS 低表达组、空载体转染组、SEPSECS 高表达组 EVC-304细胞 SEPSECS mRNA 表达分别为1.03±0.24、0.43±0.11、0.98±0.27、1.61±0.13，SEPSECS 蛋白表达分别为1.00±0.26、0.51±0.10、1.12±0.38、1.51±0.20。其中SEPSECS低表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与对照组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）；SEPSECS高表达组SEPSECS mRNA、蛋白表达与空载体转染组比较，差异有统计学意义（P均〈0.05）。转染后，各组细胞周期未见明显改变（P 均〉0.05）。经H2O2处理的各组EVC-304细胞MDA含量均随H2O2浓度的升高而升高。其中H2O2为800、1000μmol/L时，SEPSECS低表达组MDA含量[（15.8±0.5）、（19.6±1.5）μmol/L]明显高于对照组[（12.4±0.1）、（17.1±0.5）μmol/L，P均〈0.05]，SEPSECS高表达组MDA含量[（10.8±0.4）、（14.2±1.1）μmol/L]明显低于空载体转染组[（12.7±0.7）、（16.2±1.1）μmol/L，P均〈0.05]。经H2O2处理的各组EVC-304细胞SOD含量均随 H2O2浓度升高而降低，且 H2O2为800、1000μmol/L 时，SEPSECS 低表达组SOD 含量[（7.7±0.4）、（2.4±0.3）μmol/L]明显低于对照组[（10.0±1.0）、（6.0±0.6）μmol/L，P均〈0.05]， SEPSECS高表达组SOD含量[（11.3±0.6）、（12.7±1.6）μmol/L]明显高于空载体转染组[（9.2±0.6）、（6.7±0.2）μmol/L，P均〈0.05]。结论 SEPSECS基因表达对H2O2介导的氧化应激状态下内皮细胞EVC-304具有保护作用，能够显著降低氧化应激所致的细胞损伤。

关键词：硒代半胱氨酸合成蛋白过氧化氢细胞培养技术

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