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哈尔滨医科大学学报 2023年第5期57卷 485-490+534页

作者：沃晓嫚张泽鹏王永晨哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

目的探索姜黄素通过调节神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)信号通路抑制黑素瘤增殖的分子机制。方法将对数生长的黑素瘤细胞用不同浓度姜黄素处理。... 详细信息

目的探索姜黄素通过调节神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)信号通路抑制黑素瘤增殖的分子机制。方法将对数生长的黑素瘤细胞用不同浓度姜黄素处理。采用噻唑蓝(MTT)法及集落形成实验检测姜黄素对黑素瘤细胞增殖的影响；流式细胞术检测姜黄素对黑素瘤细胞周期的影响；蛋白免疫印迹(Western blot)检测姜黄素对NEDD4、Cyclin A2、Cyclin D1、PTEN/AKT信号通路相关蛋白表达的影响；RT-PCR和免疫组化法检测NEDD4的mRNA及蛋白表达水平。结果姜黄素对体外黑素瘤细胞的增殖抑制呈浓度和时间依赖性，且具有周期阻滞的特点；NEDD4在黑色素瘤患者的癌组织中高表达；姜黄素通过下调NEDD4的表达，显著抑制PI3K/AKT通路的激活。结论姜黄素对黑素瘤生长有抑制作用且阻滞细胞周期，其分子机制可能与其对NEDD4的表达调控有关。

关键词：姜黄素黑素瘤神经前体细胞表达发育下调蛋白4 第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因

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抗B组柯萨奇病毒3型3C蛋白多克隆抗体的制备及初步应用

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国际免疫学杂志 2023年第3期46卷 233-239页

作者：牛孙敏张箭王立鑫王瑶赵朔暄邵恩泽沃晓嫚赵文然哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨150081

目的制备抗B组柯萨奇病毒(Coxsackievirus,CVB)3C蛋白的多克隆抗体。方法通过聚合酶链式反应从pcDNA3.1(+)-EGFP-3C中扩增编码3C的DNA片段,构建pET28a(+)-3C-6His表达载体,转化至大肠埃希菌(Escherichia coli,***)BL21(DE3)以表达3C重组蛋白。优化表达条件及菌体蛋白的提取方法,经超声破碎制备菌体总蛋白,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)后,用氯化钾进行胶染色,切胶回收相对分子质量为26000的蛋白,即纯化的3C重组蛋白(3C-6His的相对分子质量为26000)。用纯化的1 mg 3C重组蛋白加等量弗氏佐剂免疫新西兰大白兔,共免疫5次,每次间隔1周,免疫结束后1周取兔血清,检测抗体的特异性。结果在相对分子质量为26000的位置检测到了3C-6His融合蛋白的表达,成功构建了高效表达带His标签的3C重组蛋白载体。重组3C蛋白原核优化表达条件为37℃培养细菌6 h,加0.05 mmol/L异丙基β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)进行诱导。经SDS-PAGE分离菌体总蛋白,得到了纯化的3C重组蛋白。获得的兔免疫血清可以结合***及HeLa细胞表达的3C蛋白,还能识别感染CVB3或肠道病毒A71的HeLa细胞中表达的3C蛋白。结论获得了抗CVB33C蛋白酶的多克隆抗体,这一抗体可特异结合肠道病毒的3C蛋白酶,为进一步研究3C蛋白酶在肠道病毒致病机制中的作用奠定了基础。

关键词： B组柯萨奇病毒 3C蛋白多克隆抗体

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翻转课堂在临床本科生基础医学教学中的应用

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中国科技经济新闻数据库教育 2024年第9期 0017-0020页

作者：杨爱英时飒哈尔滨医科大学基础医学院细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150081

本文探讨了将翻转课堂应用于临床本科基础医学教学中的几个问题。本文通过分析该教学模式的现状,具体的实施策略,以及效果评估,讨论了该模式对学生的学业成就、学习动机与参与、能力提高等方面的影响。研究结果显示,将翻转课堂模式应用... 详细信息

本文探讨了将翻转课堂应用于临床本科基础医学教学中的几个问题。本文通过分析该教学模式的现状,具体的实施策略,以及效果评估,讨论了该模式对学生的学业成就、学习动机与参与、能力提高等方面的影响。研究结果显示,将翻转课堂模式应用于临床医学教学,可以有效地提高学生的学习效率,激发学生的学习兴趣与积极参与,促进教师角色的转换。因此,将翻转课堂应用于临床本科基础医学教学,具有十分重要的现实意义。

关键词：翻转课堂临床本科生基础医学教学教学模式学习评价

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HSPB5的研究进展

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中国医药导报 2022年第33期19卷 41-44页

作者：付佳李诗琪赵晓婷郑晓东哈尔滨医科大学(大庆)遗传学与细胞生物学教研室黑龙江大庆163319

HSPB5是一种以高度保守的晶体结构为核心的蛋白质,在体内以动态寡聚体的形式存在。HSPB5表达受多种生理和病理因素调节,如在热应激下表达升高,活性受到磷酸化、乙酰化和糖基化等多种翻译后修饰的调节。生理条件下,HSPB5作为分子伴侣样... 详细信息

HSPB5是一种以高度保守的晶体结构为核心的蛋白质,在体内以动态寡聚体的形式存在。HSPB5表达受多种生理和病理因素调节,如在热应激下表达升高,活性受到磷酸化、乙酰化和糖基化等多种翻译后修饰的调节。生理条件下,HSPB5作为分子伴侣样蛋白质,能够降低错误折叠蛋白质的聚集,也可以与多种蛋白质相互作用,从而抑制细胞调亡。病理条件下,HSPB5还可以影响多种疾病进程,如阿尔茨海默病、心肌病、肿瘤、缺氧等。本文简要综述了HSPB5在生理病理条件下的作用和机制进展。调节HSPB5的表达水平和活性可能作为多种疾病的新治疗策略。

关键词： HSPB5 蛋白质结构基因表达蛋白质功能疾病综述

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肺动脉高压新的致病基因和表观遗传机制研究进展

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解剖科学进展 2023年第4期29卷 430-432,436页

作者：王睿郑晓东白玉华哈尔滨医科大学大庆校区药物化学与天然药物化学教研室黑龙江大庆163319 哈尔滨医科大学大庆校区遗传学与细胞生物学教研室黑龙江大庆163319

肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)是一类因多种病因导致的严重危害患者健康的渐进性和致死性心血管类疾病。最近研究发现一些新的PAH的遗传因素如KCNK3、Cav1、TopBP1基因突变。此外,表观遗传调控机制DNA甲基化与去甲基... 详细信息

肺动脉高压(Pulmonary arterial hypertension,PAH)是一类因多种病因导致的严重危害患者健康的渐进性和致死性心血管类疾病。最近研究发现一些新的PAH的遗传因素如KCNK3、Cav1、TopBP1基因突变。此外,表观遗传调控机制DNA甲基化与去甲基化,组蛋白乙酰化与去乙酰化,以及非编码RNA也同时参与PAH。

关键词：肺动脉高压 DNA甲基化表观遗传调控组蛋白乙酰化去乙酰化 arterial 致病基因 hypertension

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基于网络药理学与分子对接的丹皮酚治疗结直肠癌的分子机制研究

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中国医科大学学报 2023年第11期52卷 992-998页

作者：高吴陆怡王静艳舒岑皓尚德淑韩锁商宇佳木斯大学基础医学院微生态-免疫调节网络与相关疾病重点实验室黑龙江佳木斯154007 佳木斯大学附属第一医院康复医学科黑龙江佳木斯154003 中国医科大学生命科学学院发育细胞生物学教研室教育部医学细胞生物学重点实验室沈阳110122 哈尔滨医科大学附属第四医院中心导管室哈尔滨150001

目的基于网络药理学与分子对接探讨丹皮酚治疗结直肠癌的靶点与作用机制。方法通过PubChem、SwissTargetPrediction和TargetNet数据库检索丹皮酚的药物靶点,使用Genecards、OMIM和TTD数据库检索结直肠癌的疾病靶点,通过Venny在线工具获... 详细信息

目的基于网络药理学与分子对接探讨丹皮酚治疗结直肠癌的靶点与作用机制。方法通过PubChem、SwissTargetPrediction和TargetNet数据库检索丹皮酚的药物靶点,使用Genecards、OMIM和TTD数据库检索结直肠癌的疾病靶点,通过Venny在线工具获得交集靶点。利用Metascape数据库完成交集靶点的基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组数据库(KEGG)信号通路富集分析。交集靶点经STRING数据库与Cytoscape软件分析其相互作用关系并筛选枢纽节点。采用LeDock与CB-Dock2软件完成丹皮酚与枢纽节点的分子对接,以筛选丹皮酚的核心药物靶点。结果经筛选得到21个药物靶点。富集分析结果显示,丹皮酚发挥作用的分子机制涉及癌症通路、Ras信号和Rap1信号等通路,而其涉及的生物过程包括细胞对缺氧的反应以及调控激酶活性等。蛋白质-蛋白质相互作用分析发现9个靶点为蛋白质相互作用的枢纽。分子对接结果显示,丹皮酚和枢纽节点中的SRC、EP300、MMP9具有最高亲和力,提示SRC、EP300以及MMP9可能是丹皮酚治疗结直肠癌的核心靶点。结论丹皮酚可能通过靶向SRC、EP300与MMP9,调控Ras、Rap1等信号通路与激酶活性等生物过程,进而发挥治疗结直肠癌的作用。

关键词：结直肠癌丹皮酚网络药理学分子对接

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姜黄素通过下调FoxM1、NEDD4及β-catenin抑制黑素瘤细胞增殖、迁移及侵袭

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哈尔滨医科大学学报 2022年第5期56卷 419-425页

作者：张泽鹏沃晓嫚刘添秦文欣林雨丝王永晨哈尔滨医科大学附属第二医院医务部哈尔滨医科大学细胞生物学教研室哈尔滨医科大学附属第二医院皮肤科黑龙江哈尔滨150081

目的研究姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法将两种人黑素瘤细胞系(A375和A875)分别用不同浓度的姜黄素处理,应用MTT、划痕、Transwell实验观察姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,利用蛋白印迹技术测... 详细信息

目的研究姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其分子机制。方法将两种人黑素瘤细胞系(A375和A875)分别用不同浓度的姜黄素处理,应用MTT、划痕、Transwell实验观察姜黄素对黑素瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,利用蛋白印迹技术测定细胞周期蛋白A2(CyclinA2)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、叉头框蛋白M1(forkhead box protein M1,FoxM1)、神经前体细胞表达发育下调蛋白4(neural precursor cell expressed developmentally down-regulated protein 4,NEDD4)、β-连环蛋白(β-catenin)的表达情况。结果MTT与集落形成实验结果显示,姜黄素处理后细胞相对活力下降,细胞增殖能力显著下降,且具有剂量依赖性(P<0.001)。划痕和侵袭实验结果显示,姜黄素处理后黑素瘤细胞迁移相对距离明显增加,侵袭的相对细胞数明显减少,差异具有统计学意义(P<0.001;P<0.05)。Western blot结果显示,姜黄素处理后Cyclin D1和Cyclin A2、FoxM1表达水平降低(P<0.001;P<0.05);过表达FoxM1促进NEDD4表达,敲减FoxM1则抑制NEDD4表达(P<0.001)。与对照组比较,姜黄素处理后细胞核中β-catenin水平明显降低,而细胞质中β-catenin水平明显升高(P<0.001)。结论姜黄素可通过下调FoxM1/NEDD4和β-catenin抑制黑素瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。

关键词：姜黄素黑素瘤神经前体细胞表达发育下调蛋白4 叉头框蛋白M1 β-连环蛋白

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白屈菜提取物的抗肿瘤作用与免疫调节作用的机制研究

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哈尔滨医科大学学报 2021年第1期55卷 1-6页

作者：董艳艳张娜何文倩赵鑫杨宝峰张妍哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学药学院细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究白屈菜提取物血根碱对小鼠胃癌细胞的抑制作用及对小鼠免疫力的影响。方法通过MTT实验、流式实验、细胞迁移实验和细胞侵袭实验研究不同浓度的血根碱对小鼠胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响;通过皮下注射小鼠胃癌细胞建立B... 详细信息

目的研究白屈菜提取物血根碱对小鼠胃癌细胞的抑制作用及对小鼠免疫力的影响。方法通过MTT实验、流式实验、细胞迁移实验和细胞侵袭实验研究不同浓度的血根碱对小鼠胃癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响;通过皮下注射小鼠胃癌细胞建立BALB/c荷瘤小鼠模型,观察给予不同浓度血根碱灌胃给药30 d后对荷瘤小鼠体重、肿瘤体积、肿瘤重量及对小鼠免疫力的影响。结果血根碱(200、400μg·mL^(-1))明显抑制了小鼠胃癌细胞增殖(P<0.001),诱导胃癌细胞的凋亡(P<0.05),显著性抑制胃癌细胞的迁移、侵袭(P<0.01);在动物水平上与对照组比较,阳性药5-FU(10 mg·kg^(-1))和血根碱(200、600 mg·kg^(-1))均有效抑制了荷瘤小鼠肿瘤的生长(P<0.001、P<0.01);小鼠白细胞数和脾淋巴细胞转化实验结果显示,与对照组相比5-FU组(10 mg·kg^(-1))小鼠白细胞数和脾淋巴转化能力显著下降(P<0.01或P<0.001),血根碱组(70 mg·kg^(-1))小鼠白细胞数和脾淋巴转化能力显著升高(P<0.001)。结论血根碱具有免疫刺激和肿瘤抑制作用。

关键词：血根碱肿瘤抑制作用 BALB/c荷瘤小鼠免疫调节

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半乳糖凝集素3调控高糖下肾小球系膜细胞增殖的研究

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第三军医大学学报 2020年第19期42卷 1913-1919页

作者：林子越张攀扬崇馨煜孙艳彭睿张政重庆医科大学基础医学院:细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院:生物信息学教研室重庆400016

目的探究半乳糖凝集素3(galectin-3,Gal-3)对高糖培养的肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)增殖的作用及机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测Gal-3在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)、正常小鼠肾脏组织和高低糖条件下MCs中的表达... 详细信息

目的探究半乳糖凝集素3(galectin-3,Gal-3)对高糖培养的肾小球系膜细胞(mesangial cells,MCs)增殖的作用及机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测Gal-3在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)、正常小鼠肾脏组织和高低糖条件下MCs中的表达;构建、合成Gal-3过表达质粒和siRNA,qRT-PCR和Western blot检测转染效率;在高糖培养的MCs中转染Gal-3-siRNA;在低糖培养的MCs中转染Gal-3过表达质粒,通过5-乙基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-Ethynyl-2′-deoxyuridine, EdU)检测MCs的增殖能力,通过Western blot检测高低表达Gal-3对Mek和磷酸化Mek表达的影响。结果 qRT-PCR结果显示:与正常小鼠相比,Gal-3在DN小鼠肾脏组织中表达显著升高(P<0.01),且与低糖下的MCs相比,高糖条件下的MCs中Gal-3表达显著升高(P<0.01)。过表达Gal-3后,MCs增殖能力显著提高(P<0.01)且磷酸化Mek表达上调(P<0.01),而在siRNA沉默Gal-3后,MCs增殖能力显著降低(P<0.01)且磷酸化Mek表达下调(P<0.001)。结论 Gal-3在DN中显著上调,并且可能通过调控Mek磷酸化影响MCs的增殖,进而在DN中发挥重要的调节作用。

关键词：糖尿病肾病 galectin-3 肾小球系膜细胞细胞增殖 Mek

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肉桂醛对大鼠肠系膜动脉的作用和机制

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贵州医科大学学报 2021年第2期46卷 152-158页

作者：程筱涵白玉华齐靖邢妍陈紫洁张渝王瞳李丽静郑晓东哈尔滨医科大学大庆校区药物化学与天然药物化学教研室黑龙江大庆163319 哈尔滨医科大学哈尔滨医科大学大庆校区药理教研室黑龙江大庆163319 哈尔滨医科大学大庆校区遗传学与细胞生物学教研室黑龙江大庆163319

目的探讨肉桂醛(CA)对大鼠肠系膜动脉的作用和机制。方法 Sprague Dawley(SD)大鼠5只经水合氯醛麻醉后分离出肠系膜组织,取肠系膜动脉制备2~3 mm血管分为对照组、去内皮组(发丝刮除血管内皮)、左旋硝精氨酸甲酯(L-NAME)+吲哚美辛(Indo)... 详细信息

目的探讨肉桂醛(CA)对大鼠肠系膜动脉的作用和机制。方法 Sprague Dawley(SD)大鼠5只经水合氯醛麻醉后分离出肠系膜组织,取肠系膜动脉制备2~3 mm血管分为对照组、去内皮组(发丝刮除血管内皮)、左旋硝精氨酸甲酯(L-NAME)+吲哚美辛(Indo)组(100 mmol/L L-NAME和10μmol/L Indo孵育30 min)、KCl组(60 mmol/L KCl)及二硫苏糖醇(DTT)组(3 mmol/L DTT孵育30 min)、各组血管段分别用苯肾上腺素(1μmol/L PE)预收缩后,加不同浓度CA(1、10及30μmol/L),采用Myograph血管张力检测系统记录各组大鼠肠系膜动脉张力数值变化;SD大鼠6只水合氯醛麻醉分离肠系膜动脉,分离培养肠系膜动脉内皮细胞(MAECs)和动脉平滑肌细胞(MASMCs),利用细胞免疫荧光实验检测血小板-内皮细胞黏附分子(CD31)和α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;将MAECs设置为常氧组(21%Fi O2)和缺氧组(3%Fi O2),分别均给予二甲基亚砜(DMSO)、10及30μmol/L CA处理24 h,采用Western blot实验检测各组MAECs中p-eNOS蛋白的表达;MASMCs分别加DMSO及1、10、30μmol/L CA,采用激光扫描共聚焦显微镜技术检测各组MASMCs中Ca2+浓度的变化。结果1、10及30μmol/LCA均可以舒张PE预收缩后的肠系膜动脉(P<0.001);L-NAME+Indo对1、10、30μmol/L CA舒张肠系膜动脉没有影响(P>0.05);去内皮组1和30μmol/L CA肠系膜动脉血管舒张程度明显低于对应浓度对照组(P<0.001);60 mmol/L KCl组和3 mmol/L DTT组血管舒张程度明显低于对照组血管舒张程度(P<0.001);细胞免疫荧光结果显示,不表达血小板-内皮细胞黏附分子CD31的MAECs数量少于表达CD31的MAECs数量,不表达α平滑肌肌动蛋白α-SMA的MASMCs数量少于表达α-SMA的MASMCs数量;不同浓度CA组大鼠MAECs中p-eNOS蛋白表达水平无差异(P>0.05);不同浓度CA对大鼠MASMCs中Ca2+浓度变化无影响(P>0.05)。结论 CA可以舒张肠系膜动脉,其机制不依赖COX及NO途径,可能与血管内皮完整性、内皮源性超极化因子途径及氧化还原途径有关。

关键词：肠系膜动脉二硫苏糖醇血管舒张氧化还原肉桂醛内皮源性超极化因子

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