检索结果-内蒙古大学图书馆

医学分子生物学杂志 2010年第3期7卷 219-224页

作者：林建炜刘平李祥柱赵文君郭风劲重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆市400016

目的构建靶向人XBP1S的siRNA真核表达载体（pSUPER-XBP1S）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.方法设计并合成针对XBP1S基因的siRNA,退火成互补双链后克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒,并将其转染入HeLa细胞和HepG... 详细信息

目的构建靶向人XBP1S的siRNA真核表达载体（pSUPER-XBP1S）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.方法设计并合成针对XBP1S基因的siRNA,退火成互补双链后克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒,并将其转染入HeLa细胞和HepG2细胞中.采用RT-PCR检测转染前后XBP1S在HeLa细胞和HepG2细胞中的转录,Western印迹检测转染前后XBP1S蛋白的表达;MTT法、细胞计数检测重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖能力的影响.结果重组质粒能有效地抑制HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S基因的转录和表达;转染HeLa细胞和HepG2细胞后,细胞增殖抑制率及细胞增殖数与对照组比较,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论成功构建了靶向人XBP1S的siRNA表达载体pSUPER-XBP1S,并且有效的抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中XBP1S的转录和表达,有效抑制了细胞的增殖能力.

关键词：人类X盒结合蛋白 siRNA 真核表达载体

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人腺病毒3型感染对H9c2细胞microRNA表达谱的影响

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国际免疫学杂志 2009年第3期32卷 173-175页

作者：林乐勋赵文然佟雷武帅钦刘慧敏刘惠彬栾天王博马倩倩钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞，6h后收获总RNA，基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱，H9c2细胞... 详细信息

目的研究腺病毒感染对大鼠心肌来源的H9c2细胞microRNA表达谱的影响。方法用人腺病毒3型（Ad3）攻击成层和未成层的H9c2细胞，6h后收获总RNA，基因芯片检测microRNA表达谱。结果比较未成层与成层的H9c2细胞microRNA的表达谱，H9c2细胞成层后有54种microRNA表达显著下调，7种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较，Ad3感染的未成层H9c2细胞有41种microRNA表达显著下调，12种microRNA表达显著上调。与未感染病毒的细胞比较，Ad3感染成层H9c2细胞后有8种microRNA的表达显著下调，62种microRNA的表达显著上调。结论细胞不同的生长状态及Ad3感染显著改变了H9c2细胞的microRNA表达谱。

关键词：人腺病毒 H9c2细胞 microRNA芯片心肌炎

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miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控

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中国生物制品学杂志 2009年第4期22卷 341-343页

作者：徐晓明张政彭惠民晏宁重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达... 详细信息

目的探讨miRNA-21对肺癌A549细胞抑癌基因PTEN表达的调控作用。方法人工合成miRNA-21序列,插入到质粒pGenesil-1中,构建重组真核表达质粒,并转染至肺癌A549细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测细胞PTEN基因mRNA转录水平和蛋白的表达水平。结果经酶切和测序鉴定,表明重组真核表达质粒构建正确。转染重组真核表达质粒的A549细胞PTEN基因mRNA转录水平与未转染组相比,差异无统计学意义,蛋白表达水平较未转染组明显降低。结论miRNA-21可能主要在翻译水平调控PTEN基因的表达。

关键词：微小RNA-21 真核表达载体肺癌 PTEN基因

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RI基因siRNA干扰质粒的构建及其对人膀胱癌细胞迁移和侵袭能力的影响

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中国生物制品学杂志 2009年第5期22卷 431-437页

作者：欧阳溪陈俊霞何晓燕褚颖豪夏俊重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233030

目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通... 详细信息

目的构建核糖核酸酶抑制因子(RI)基因siRNA干扰质粒,并检测其对人膀胱癌细胞BIU-87迁移和侵袭能力的影响。方法设计并构建针对RI基因mRNA的2个特异性siRNA表达载体和1个无同源性的阴性对照载体,经酶切和DNA测序鉴定后,转染BIU-87细胞,通过RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学法检测干扰的有效性。光镜及HE染色观察细胞形态的改变,黏附试验、划痕试验和Transwell法检测细胞黏附、迁移和侵袭能力的变化,激光共聚焦显微镜观察细胞骨架微丝结构。结果酶切和测序结果证明干扰质粒构建正确;转染特异性siRNA表达载体的BIU-87细胞RI蛋白的表达水平明显降低,对照组未发生明显改变;转染干扰质粒的细胞堆叠严重,细胞黏附能力显著降低,迁移和侵袭能力显著提高,细胞骨架微丝聚集,伸展出片状伪足。结论已成功构建RI基因siRNA干扰质粒,其可显著提高膀胱癌细胞的迁移和侵袭能力,说明RI可作为抑制肿瘤迁移和侵袭的有效靶点。

关键词：核糖核酸酶抑制因子 RNA干扰膀胱癌细胞迁移侵袭

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钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及侵袭转移能力的影响

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第四军医大学学报 2009年第1期30卷 49-52页

作者：廖晓敏汤为学赖洁娟蒲淑萍孙双凌重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学病理生理学教研室重庆400016

目的:探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响.方法:在培养基中加入150μmol/LCoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil,VPL)组.用逆转录-聚合酶链反应(RT-P... 详细信息

目的:探讨低氧条件下钙信号对乳腺癌细胞HIF-1α表达及其侵袭转移能力的影响.方法:在培养基中加入150μmol/LCoCl2模拟化学缺氧;将实验分成对照组、CoCl2组、CoCl2和钙通道阻滞剂维拉帕米(verapamil,VPL)组.用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测各组中HIF-1α的mRNA水平;蛋白印迹实验和免疫细胞化学检测乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中HIF-1α蛋白的表达;Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测各实验组中细胞侵袭迁移能力的改变.结果:两株细胞各实验组都存在HIF-1α的mRNA转录和蛋白的表达,CoCl2组HIF-1αmRNA水平和蛋白水平较对照组显著增高(P<0.01),加VPL干预后,HIF-1αmRNA水平和蛋白水平都大大降低(P<0.01),MCF-7和MDA-MB-231间有显著差异(P<0.01);两株细胞的侵袭迁移能力VPL+CoCl2组较CoCl2组明显降低(P<0.05),MDA-MB-231更明显(P<0.01).结论:阻断钙信号转导途径可以使HIF-1α的表达下调,进而抑制乳腺癌细胞的侵袭转移能力.

关键词：钙信号乳腺肿溜肿瘤细胞系 HIF-1α表达侵袭转移

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人类X盒结合蛋白1的融合表达、纯化及多克隆抗体的制备

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第四军医大学学报 2009年第22期30卷 2533-2536页

作者：林建炜李婧刘平郭风劲重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌***2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的... 详细信息

目的:将以构建的未剪接型X盒结合蛋白1(XBP1u)的原核表达,纯化及人XBP1多克隆抗体的制备.方法:重组质粒pET32a-XBP1u转化入宿主菌***2l(DE3),在IPTG诱导下表达,经SDS-PAGE鉴定正确后,用Ni2+-NTA柱式亲和层析法纯化蛋白,将纯化后的目的蛋白经透析袋复性后进行蛋白质定量,再以此蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔,末次免疫后心脏取血,采用ELISA法检测抗血清效价;免疫印迹和免疫组化法检测兔抗XBP1u血清的特异性.结果:XBP1u蛋白为包涵体表达,包涵体裂解后经过纯化、复性进行免疫,得到抗血清的效价大于1∶64000,免疫印迹结果出现特异Mr33×103XBP1u条带,免疫组化法在兔肝细胞中成功检测到XBP1u的表达.结论:成功表达和纯化人XBP1u蛋白,并得到高特异性、高效价兔抗XBP1u多克隆抗体.

关键词：未剪接型X盒结合蛋白1 效价纯化多克隆抗体免疫印迹

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喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及临床意义

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哈尔滨医科大学学报 2009年第3期43卷 222-225,228页

作者：徐晋李燕华梁爽杨昌霖张杰武哈尔滨医科大学细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学儿少卫生与妇幼保健学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第三临床医学院头颈外科黑龙江哈尔滨150081

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的... 详细信息

目的通过研究喉鳞癌中ΔNp63和ΔNp73的表达及与患者各临床病理参数的关系,探讨其在喉鳞癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化二步法,检测40例喉鳞癌及相应癌旁组织中ΔNp63和ΔNp73的表达情况。结果ΔNp63和ΔNp73在喉鳞癌组织中的阳性表达率分别为85%(34/40)和82.5%(33/40)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达显著高于相应癌旁组织(P<0.001)。ΔNp63在喉癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05);而与患者性别、临床分期、有无淋巴结转移等无关。ΔNp73在喉癌组织中的表达与患者性别、肿瘤分化程度、临床分期、有无淋巴结转移等无关(P>0.05)。喉癌组织中ΔNp63和ΔNp73的表达无显著相关性(r=0.16,P>0.05)。结论ΔNp63和ΔNp73可能作为癌基因维持肿瘤细胞干细胞样的增殖特性,在喉鳞癌的发生、发展中发挥重要作用,并可能成为喉癌成瘤机制研究中的重要靶点。

关键词： △Np63 △Np73 喉鳞癌免疫组化

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Let-7a负性调控肺癌A549细胞中NIRF基因的表达

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第四军医大学学报 2009年第23期30卷 2702-2706页

作者：何晓燕陈俊霞褚颖豪张政彭惠民重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-... 详细信息

目的:探讨肺癌A549细胞中let-7a对其靶基因NIRF表达的调控作用.方法:运用生物信息学方法对let-7a进行靶基因预测并分析其靶基因NIRF;构建含有NIRF 3′UTR全长的荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR;将pRL-TK或pRL-TK-NIRF 3′UTR与pGL3-control,及let-7a mimics或control mimics共转染A549细胞,双荧光素酶报告系统检测试剂盒测定转染后A549细胞中荧光素酶的表达;A549细胞分别转染let-7a mimics和control mimics,Western Blot检测NIRF蛋白的表达.结果:NIRF3′UTR含有一个let-7a结合位点,而且该结合位点在多个物种高度保守;经测序证实荧光素酶报告质粒pRL-TK-NIRF 3′UTR构建成功;共转染let-7amimics,pRL-TK-NIRF3′UTR与pGL3-control的A549细胞组,荧光素酶活性明显降低(P<0.01),为对照组(共转染pRL-TK与pGL3-control的A549细胞组)的50%;Western Blot检测显示,与未转染的A549细胞相比,转染let-7a mimics的A549细胞中NIRF蛋白的表达显著降低(P<0.01),而转染control mimics的A549细胞中NIRF表达无明显变化(P>0.05).结论:肺癌A549细胞中,let-7a可以结合到NIRF 3′UTR,负性调控NIRF的表达.

关键词：微RNA let-7a 肺癌 NIRF 基因表达

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芹菜素对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移的影响

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生物技术 2009年第3期19卷 33-37页

作者：赖洁娟蒲淑萍汤为学重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理生理学教研室重庆400016

目的:研究芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其作用机制。方法:芹菜素处理MDA-MB-231细胞,MTT法及流式法检测细胞增殖、粘附和周期变化;Millicell小室检测新生血管形成、侵袭转移能力的改变;免疫细胞化学检测B... 详细信息

目的:研究芹菜素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及侵袭转移能力的影响,探讨其作用机制。方法:芹菜素处理MDA-MB-231细胞,MTT法及流式法检测细胞增殖、粘附和周期变化;Millicell小室检测新生血管形成、侵袭转移能力的改变;免疫细胞化学检测Bcl-2、Bax、cyclinB1、VEGF、MMP-9、E-cd蛋白的表达差异。结果:芹菜素明显抑制MDA-MB-231细胞增殖,诱导细胞凋,G2/M期细胞比例由4.79%增至36.12%(P<0.05);细胞的黏附、新生血管形成能力均显著降低;侵袭转移穿膜细胞数明显低于对照组,分别由88.67、106.33降至45.67、68(P<0.05);Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP-9蛋白表达明显降低;Bax,E-cd的表达则增加。结论:芹菜素有效抑制MDA-MB-231细胞增殖,阻滞细胞于G2/M期,诱导细胞凋亡;抑制细胞粘附、新生血管形成、侵袭与转移的能力,其机制与抑制Bcl-2、cyclinB1、VEGF、MMP9表达,促进Bax、E-cd表达有关。

关键词：芹菜素细胞增殖侵袭转移乳腺癌

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HIF-1α表达对人乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

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西南师范大学学报（自然科学版） 2009年第1期34卷 141-145页

作者：廖晓敏孙双凌汤为学赖洁娟蒲淑萍重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016 重庆医药高等专科学校重庆400030 重庆医科大学病理生理学教研室重庆400016

为研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoC12模拟化学缺氧培养细胞,RT-PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中mRNA... 详细信息

为研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在人乳腺癌细胞中的表达及其与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性,采用在培养基中加入CoC12模拟化学缺氧培养细胞,RT-PCR和Western-blot、免疫细胞化学检测HIF-1α在人乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231中mRNA水平和蛋白质水平在缺氧前后的表达差异,及Millicell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测缺氧前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果发现:缺氧后,两株细胞的HIF-1αmRNA水平和蛋白质水平均较缺氧前增高(p<0.01),MDA-MB-231和MCF-7之间有显著差异(p<0.01);MDA-MB-231的侵袭转移能力明显增加(p<0.01),MCF-7的侵袭转移能力略有增加(p<0.05).表明缺氧上调HIF-1α转录及蛋白表达,进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移能力.

关键词： HIF-1α 人乳腺癌细胞侵袭转移

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