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外源性野生型p53基因在两个肺腺癌细胞系中表达及对p16和p21基因的调控

中华医学遗传学杂志 2003年第5期20卷 409-412页

作者：金焰阎承慧吴焱刘艳张贵寅李璞傅松滨哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室 150086

目的　探讨 p 53基因在肺癌细胞周期中的作用机制 ,以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法　用以腺病毒为载体的野生型 p53基因 p Ad CMV-p53 (Ad-p53 )感染高转移肺腺癌 95D细胞系和高浸润肺腺癌 L -18系 ,对感染前后各细胞系的细胞生长曲... 详细信息

目的　探讨 p 53基因在肺癌细胞周期中的作用机制 ,以及裸鼠体内基因治疗的作用。方法　用以腺病毒为载体的野生型 p53基因 p Ad CMV-p53 (Ad-p53 )感染高转移肺腺癌 95D细胞系和高浸润肺腺癌 L -18系 ,对感染前后各细胞系的细胞生长曲线、p 53、p16和 p2 1基因的表达以及调亡进行分析。此外 ,用 Ad-p53对两细胞系进行了裸鼠体内感染实验。结果　体外实验中 ,导入 p 53基因细胞系的生长均得到抑制 ,并且最终都出现凋亡 ,感染后的细胞中 p53和 p 2 1基因的 m RNA表达量明显增高 ,p16基因的m RNA表达量则无明显变化。p53基因治疗后的裸鼠 ,其中 95D细胞系的肿瘤全部消失 ;L-18细胞系的腹腔注射组肿瘤全部消失 ,而皮下注射组无明显变化。结论　 p53基因是一个有效的肿瘤抑制基因 ,其诱导细胞凋亡的途径与 p16基因不同。腺病毒介导的野生型

关键词：肺腺癌基因表达基因转染肿瘤抑制基因 p53 pl6 p21

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RAB5A蛋白G81R位点突变对其功能的影响

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Acta Genetica Sinica 2003年第10期30卷 967-972页

作者：宋春娇吕冰洁史忠诚于旸李钰李璞哈尔滨医科大学遗传学和细胞生物学教研室哈尔滨150086

为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响 ,将RAB5AG81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3 1 V5 His TOPO真核表达载体 ,并转染到Anip973细胞。用Westernblot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平 ,通过血清饥饿法使Anip... 详细信息

为探讨G81R位点突变对RAB5A蛋白功能的影响 ,将RAB5AG81R突变体和正常RAB5A反义RNA分别插入pcDNA3 1 V5 His TOPO真核表达载体 ,并转染到Anip973细胞。用Westernblot方法检测稳定转染后细胞RAB5A蛋白的表达水平 ,通过血清饥饿法使Anip973和转染后的细胞同步化 ,停滞于G0 ～G1 期 ,再恢复血清培养使细胞从G0 ～G1 期释放 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分比。结果显示RAB5AG81R突变体的反义RNA可完全封闭Anip973细胞中RAB5A的表达 ,正常RAB5A反义RNA部分封闭RAB5A表达。并且 ,Anip973细胞周期的长短与RAB5A的表达程度成反比。RAB5AG81R反义RNA能够有效地阻断Anip973细胞中RAB5A蛋白的表达。

关键词：反义RNA RAB5A 突变

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RAB5A反义RNA对人肺腺癌细胞系侵袭转移影响的体外研究

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解剖学报 2005年第2期36卷 159-162页

作者：高凌寒刘芳莉史忠诚宋岩傅松滨李璞李钰哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨150086

目的　已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用。　方法　将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中... 详细信息

目的　已知RAB5A基因过表达与人非小细胞肺癌恶性表型形成相关,本研究在此基础上进一步探讨该基因过表达在人肺腺癌恶性演进中的作用。　方法　将RAB5A反义表达载体稳定转染入高浸润人肺腺癌细胞系L18和高转移人肺腺癌细胞系95D中,采用重组基底膜侵袭、与基底膜成分黏附能力测定、趋化运动能力测定、明胶酶分泌与活性检测等体外实验方法观察转染前后细胞生物学特性的改变。　结果　RAB5A反义RNA稳定转染后L18细胞趋化运动和侵袭基底膜能力显著降低(P<0.05),明胶酶活性检测发现转染后细胞MMP 2的分泌能力明显减弱;稳定转染后95D细胞趋化运动和侵袭基膜能力显著降低(P<0.05)。　结论　体外实验显示, RAB5A基因过表达对肿瘤细胞的趋化运动能力和侵袭重组基底膜能力起重要作用,进一步提示RAB5A基因过表达在人肺腺癌的侵袭转移过程中发挥一定作用。

关键词：侵袭转移反义RNA 重组基底膜明胶酶

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血清饥饿法用于细胞周期同步化的方法学研究

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中国地方病学杂志 2003年第4期22卷 362-364页

作者：宋春娇吕冰洁张小玲史忠诚傅松滨李璞李钰哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素。方法　用无血清和低血清浓度培养基饥饿 Anip973和 AGZY83 -a两种人肺腺癌细胞系 ,分别在培养 48h、72 h和 5d时收集各组细胞 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数... 详细信息

目的　探讨血清饥饿法进行细胞周期同步化实验的影响因素。方法　用无血清和低血清浓度培养基饥饿 Anip973和 AGZY83 -a两种人肺腺癌细胞系 ,分别在培养 48h、72 h和 5d时收集各组细胞 ,用流式细胞分析仪分析细胞周期各时相细胞百分数。结果　 Anip973细胞系在含 0 .2 % FBS的 RPMI 1640培养基中培养 5d得到理想结果 ,G0 -G1期细胞百分比高达 84.19%。 AGZY83 -a在含 0 .2 % FBS的 RPMI 1640培养基中培养 48h也获得较满意的结果 ,G0 -G1期细胞百分比达 61.3 0 %。结论　细胞类型、血清浓度和饥饿时间是血清饥饿法进行细胞周期同步化实验成功与否的影响因素。可应用血清饥饿法使不同细胞系同步于 G0

关键词：血清饥饿法细胞周期方法学流式细胞分析仪

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喉癌颈淋巴结抗肿瘤免疫状态的研究

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中华耳鼻咽喉科杂志 2004年第4期39卷 223-226页

作者：张杰武徐晋赵雪松贾深汕哈尔滨医科大学附属肿瘤医院头颈外科 150040 哈尔滨医科大学基础医学院医学遗传学与细胞生物学教研室

目的　通过对肿瘤引流淋巴结中增生性滤泡反应和树突状细胞 (dendriticcell,DC)浸润密度进行定量分析 ,探讨其在喉癌患者抗肿瘤免疫反应中的作用。方法　重新制备 4 7例行选择性颈淋巴结清扫术的喉癌患者的 15 7枚颈淋巴结石蜡切片 ,用... 详细信息

目的　通过对肿瘤引流淋巴结中增生性滤泡反应和树突状细胞 (dendriticcell,DC)浸润密度进行定量分析 ,探讨其在喉癌患者抗肿瘤免疫反应中的作用。方法　重新制备 4 7例行选择性颈淋巴结清扫术的喉癌患者的 15 7枚颈淋巴结石蜡切片 ,用抗S 10 0、CD4 5RO和CD2 0单克隆抗体免疫组化抗生物素生物素过氧化物酶复合物 (avidin biotinperoxidase,ABC)法显示DC和增生性滤泡的分布并检测其密度。根据增生性滤泡反应的特点进行分型研究。结果　增生型滤泡反应的程度与类型和DC浸润密度有明显的相关性。术后生存 5年以上的患者淋巴结中滤泡计数和DC浸润密度明显多于生存期少于 5年者 (P <0 0 0 1)。无淋巴结转移组患者淋巴结中的滤泡计数和DC浸润密度较有转移组亦有明显增加 (P <0 0 0 1)。具有T细胞增生型滤泡反应的患者比T细胞非增生型患者有较高的 5年生存率 (P <0 0 1)和较低的淋巴结转移率 (P <0 0 5 )。结论　颈淋巴结中增生性滤泡反应和树突状细胞的浸润反映了机体免疫系统的抗肿瘤潜能。树突状细胞的浸润密度和增生性滤泡反应的程度及分型反映了该患者的抗肿瘤免疫状态 ,可以共同作为预后判定的重要指标。

关键词：喉癌颈淋巴结转移免疫学预后树突状细胞增生性滤泡反应

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5＇非编码区嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型毒力的影响

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中国地方病学杂志 2010年第4期29卷 362-366页

作者：钟照华包琳李倩张燕芳范徐妃李晓波张凤民赵文然哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 内蒙古民族大学临床医学院微生物和免疫学教研室

目的观察5＇非编码区（5＇UTR）嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型（CVB1）毒力和致病性的影响.方法定点诱变将CVB1基因组5＇UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应... 详细信息

目的观察5＇非编码区（5＇UTR）嘧啶富集区变异对B组柯萨奇病毒1型（CVB1）毒力和致病性的影响.方法定点诱变将CVB1基因组5＇UTR第563～573碱基嘧啶富集区5个嘧啶置换为嘌呤,获得突变株CVB1/m563-573.空斑纯化病毒后,利用细胞病变效应（CPE）试验、空斑形成试验、一步生长曲线和半数致死量（LD50）等方法比较CVB1/m563-573与其原型株CVB1/wt的毒力.结果测序结果显示,CVB1/m563-573的5＇UTR嘧啶富集区发生C565A、U567C、U568A、U570A、U572G突变,与预期一致.CPE试验表明,CVB1/m563-573的感染性较CVB1/wt稍弱（A 490分别为0.710±0.074、0.812±0.092）,但差异无统计学意义（t=-2.204,P〉0.05）.空斑形成试验显示,46、58 h时间点CVB1/m563-573形成空斑的数量为（6.40±1.52）×103、（11.60±2.19）×103 pfu（空斑形成单位）/L,直径为（2.00±0.35）、（2.47±0.41）mm,CVB1/wt的空斑数量为（8.40±2.51）×103、（11.80±1.92）×103 pfu/L,直径为（1.80±0.27）、（2.85±0.44）mm,二者比较差异无统计学意义（t值分别为8.000、0.985、10.000、9.000,P均〉0.05）.一步生长曲线法显示,经过3、5、7 h的扩增,CVB1/m563-573所得的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的常用对数（lg）分别为2.10±0.09、4.28±0.03、7.44±0 CVB1/wt的活病毒颗粒数（×103 pfu/L）的lg值分别为2.80±0.02、4.77±0.02、8.55±***1/m563-573株在3个时间点均较CVB1/wt复制显著慢（t值分别为-13.151、-24.319、-47.714,P均〈0.01）.CVB1/m563-573和CVB1/wt的LD50分别为3.10×109、1.26×107 pfu/L,CVB1/m563-573致病力较CVB1/wt明显减弱.结论减少5＇UTR嘧啶富集区的嘧啶碱基数量可致CVB1的感染和毒力减弱,该位点突变可能是研发CVB减毒活疫苗的策略之一.

关键词：肠道病毒属嘧啶富集区诱变定点毒力

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肺癌细胞系差异表达cDNA片断OPB7-1的定位与表达研究

肺癌细胞系差异表达cDNA片断OPB7-1的定位与表达研究

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中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：于旸吕冰洁刘继来陈峰张贵寅李璞李钰哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室

肿瘤是当今危及人类健康的主要疾病之一,攻克肿瘤也就成为广大临床与基础工作者的主要任务。肺癌又是对人们威胁较大的肿瘤,为探讨肺癌发生、发展及转移的分子机理,人们积极寻找与肺癌发病特异相关的基因。我研究组采用mRNA差异展示的... 详细信息

肿瘤是当今危及人类健康的主要疾病之一,攻克肿瘤也就成为广大临床与基础工作者的主要任务。肺癌又是对人们威胁较大的肿瘤,为探讨肺癌发生、发展及转移的分子机理,人们积极寻找与肺癌发病特异相关的基因。我研究组采用mRNA差异展示的方法分析了人肺腺癌低转移性细胞系AGZY83-a和由其衍生而来的人肺腺癌高转移性细胞系Anip973中差异表达基因,获得了一些差异表达基因及cDNA片段。我们对其中的一个差异片断OPB7-1进行基因定位和表达谱的研究。

关键词：肺癌细胞系人肺腺癌差异表达 OPB7-1

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在肺腺癌细胞系AGZY83-α中的作用靶点

在肺腺癌细胞系AGZY83-α中的作用靶点

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中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：刘继来宋春娇马健会张贵寅李璞李钰哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室

细胞周期相关基因列阵是一种固-液相杂交技术,其预制的尼龙膜上点有96个已知的细胞周期相关基因的cDNA片段。主要工作原理和流程是:细胞周期同步化,然后提取细胞的总RNA,并用逆转录法对探针进行同位素标记,再用标记的探针与预制的尼龙... 详细信息

细胞周期相关基因列阵是一种固-液相杂交技术,其预制的尼龙膜上点有96个已知的细胞周期相关基因的cDNA片段。主要工作原理和流程是:细胞周期同步化,然后提取细胞的总RNA,并用逆转录法对探针进行同位素标记,再用标记的探针与预制的尼龙膜杂交,得到放射自显影的图象。其结果用共享软件ScanAlyze和GEArrayAnalyzer分析。所以这项技术具有简便、可靠和灵敏度高的优点。

关键词：肺腺癌细胞系作用靶点 AGZY83

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TGF-β/Smads信号转导途径与肿瘤发生发展的研究进展

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国际遗传学杂志 2003年第3期26卷 163-166页

作者：申景岭张小玲哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

TGF-β信号途径在发育和生长过程中的重要作用 ,与肿瘤发生的发展有密切关系。在 TGF-β信号转导通路中任何一个环节的变化 ,都会导致信号转导通路的异常。 Sm ad蛋白异常表达使 TGF-β诱导凋亡的能力提高。 TGF-β在 G1 期中发挥它调... 详细信息

TGF-β信号途径在发育和生长过程中的重要作用 ,与肿瘤发生的发展有密切关系。在 TGF-β信号转导通路中任何一个环节的变化 ,都会导致信号转导通路的异常。 Sm ad蛋白异常表达使 TGF-β诱导凋亡的能力提高。 TGF-β在 G1 期中发挥它调节细胞周期的作用。 TGF-β和肿瘤的转移有密切关系。 TGF-β/Sm ads途径能够诱导生长抑制和凋亡反应 ,这一途径细胞间的组分失活将会导致肿瘤的发生。在肿瘤发生的始动阶段肿瘤细胞中 TGF-β受体的瞬时下调或 Sm ad蛋白的功能失活 ,导致细胞对 TGF-β诱导的生长抑制和凋亡信号失调。结果细胞生长失去控制 ,诱发细胞突变 ,促进肿瘤的恶化。后期 TGF-β/Sm ads信号恢复 ,TGF-β信号增强促进肿瘤细胞的浸润和转移。研究 TGF-β信号转导与肿瘤发生发展的相关性 ,对肿瘤转移的防治 ,肿瘤治疗的预后有重要意义

关键词： TGF-β smads 肿瘤转移

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中国15个群体中SDF1多态性研究

中国15个群体中SDF1多态性研究

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中国遗传学会第七次代表大会暨学术讨论会

作者：张春玉张良玉薛雅丽李璞傅松滨哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室哈尔滨医科大学遗传学与细胞生物学教研室

随着人类基因组研究工作的不断深入,人们开始研究基因背景对一些重要传染性疾病的影响,其中发现由于不同个体的基因背景差异会造成对病原体感染抗性及感染后病程长短的不同。在艾滋病发生过程中,一些趋化因子及其受体起着重要的作用。... 详细信息

随着人类基因组研究工作的不断深入,人们开始研究基因背景对一些重要传染性疾病的影响,其中发现由于不同个体的基因背景差异会造成对病原体感染抗性及感染后病程长短的不同。在艾滋病发生过程中,一些趋化因子及其受体起着重要的作用。近年来研究表明,CCR5△32、CCR2-64I和SDF1-3’A等位基因对HIV-1感染及艾滋病的病程有显著的抑制作用,并且突变基因频率在各种族、民族间存在较大差异。本实验旨在研究与HIV-1感染相关的SDF1-3’A等位基因突变在中国15个群体(包括3个汉族群体及12个少数民族群体)中的分布特征及相关的遗传背景,为评估中国不同人群对HIV-1感染的遗传易感性及我国艾滋病的预防和治疗工作提供初步依据。

关键词：中国人群 HIV 等位基因多态性

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