目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseII,CaMKII)调控原肌球蛋白1(Tropomyosin1,TPM1)在海洛因致心肌细胞节律异常中的作用。方法提取60只SPF级SD大鼠乳鼠心肌组织,培养原代心肌细胞...
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目的探讨Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca^(2+)/calmodulin-dependent protein kinaseII,CaMKII)调控原肌球蛋白1(Tropomyosin1,TPM1)在海洛因致心肌细胞节律异常中的作用。方法提取60只SPF级SD大鼠乳鼠心肌组织,培养原代心肌细胞,根据干预情况分为对照组(Control组)、海洛因处理组(HE组)、海洛因+KN-93处理组(HE+KN-93组)。Control组常规条件未作任何处理,HE组100μmol/L海洛因作用24 h,HE+KN-93组100μmol/L海洛因+1μmol/L抑制剂KN-93作用24 h。荧光倒置显微镜观察心肌细胞自发搏动频率的改变;Fluo-4 AM检测各组细胞内Ca^(2+)浓度的变化;串联质谱标记相对定量蛋白质组学筛查差异表达蛋白;Western blotting法检测TPM1、CaMKIIδ型及其T287位点[p-CaMKII(T287)]表达水平。结果心肌细胞自发搏动频率结果显示,Control组平均自发搏动频率(126.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,HE+KN-93组自发搏动频率(110.33±1.52)次/min高于HE组(88.00±2.64)次/min,差异均有统计学意义(P<0.05)。Fluo-4 AM检测结果显示,HE组心肌细胞内Ca^(2+)浓度与Control组比较显著增加(P<0.05);HE+KN-93组细胞内Ca^(2+)浓度与HE组比较显著下降(P<0.05)。串联质谱标记相对定量蛋白质组学结果显示,HE组与Control组共筛选出784个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有442个,下调差异表达蛋白质有342个;HE组与HE+KN-93组共筛选出346个差异表达蛋白质,其中上调差异表达蛋白质有169个,下调差异表达蛋白质有177个。Western blotting结果显示,HE组p-CaMKII(T287)、TPM1蛋白相对表达量与Control组比较,均显著增加(P<0.05);HE+KN-93组p-CaMKII(T287)、TPM1蛋白相对表达量与HE组比较均降低(P<0.05);3组CaMKIIδ蛋白相对表达量均无统计学意义(P>0.05)。结论海洛因可造成心肌细胞节律异常改变,其机制可能与CaMKII激活后上调TPM1蛋白有关,这有望为临床上因海洛因导致的心律失常患者提供新的诊疗方向。
目的:观察外源性精胺对糖尿病肾病(DN)肾纤维化的保护作用,并探讨其机制。方法:24只雄性C57小鼠随机分为正常组(Control)、糖尿病组(T1D)和精胺预处理组(T1D+Sp,每组n=8)。一次性注射STZ(60 mg/kg)复制1型糖尿病小鼠模型,精胺预处理组在STZ注射前两周每天腹腔注射精胺(Sp,5 mg/(kg·d)),随后隔天注射精胺,第12周处死小鼠,检测血清肌酐、尿素氮判断肾功能变化,HE、PAS和Masson染色观察肾组织损伤和纤维化水平。Western blot法检测小鼠肾组织中基质金属蛋白酶(MMP-2、MMP-9)、Ⅳ型胶原(Coll-Ⅳ)蛋白的表达。结果:与Control相比,T1D组血糖(5.67±0.22 vs 28.40±0.57 mmol/L)、肌酐(14.33±1.22 vs 30.67±4.73μmol/L)、尿素氮(6.93±4.94 vs 22.00±1.04 mmol/L)明显升高(P<0.05),肾组织基底膜增厚,胶原含量明显增加,MMP-2、MMP-9和Coll-Ⅳ蛋白表达均升高(分别为0.57±0.07 vs 1.06±0.20、47.00±0.04 vs 1.29±0.09和0.42±0.16 vs 0.95±0.18,P<0.05),精胺预处理明显减轻上述变化。结论:外源性精胺预处理通过调节MMPs与胶原的平衡减轻DN小鼠的肾纤维化。
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