检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物化学与分子生物学报 2016年第4期32卷 404-409页

作者：高旭马宁王大勇张赫张艳芬徐亚贺军徐书会霍亚丽杜智敏哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二临床医学院实验诊断教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二医院临床药学药物研究所哈尔滨150081

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶... 详细信息

CRISPR/Cas9技术是近年发展起来的快速基因编辑技术。通过该技术已对多种生物的基因组进行了编辑。由此产生的基因编辑动物的建系与鉴定是随之而来较为繁琐的工作。单导向RNA(single-guide RNA,sgRNA)靶序列的设计和确定不仅影响后续靶向基因组的效率,还可作为优化鉴定、筛选方法的参考。本研究在选取sgRNA靶序列时,不仅依据软件的评分,还分析了sgRNA靶序列是否含有酶切位点,以便对后续纯合子/杂合子进行鉴定。结果显示,以特异引物扩增的野生型小鼠Chrm3基因片段可被限制性内切酶BanⅡ切为两个片段;而纯合子小鼠"丢失"该酶切位点,其PCR产物不能被切开;杂合子小鼠PCR产物被不完全切开,凝胶电泳结果可见三条带。本研究结果提示该策略可有效简化基因编辑动物建系鉴定工作,提高鉴定效率及改善阳性动物辨识效果。

关键词： CRISPR/Cas9 毒蕈碱型乙酰胆碱受体M3亚型遗传改变小鼠纯合子

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急性早幼粒细胞白血病发病期与缓解期MTHFR mRNA表达差异研究

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哈尔滨医科大学学报 2016年第5期50卷 440-442页

作者：汤海蒂叶向梅杨宝义哈尔滨医科大学附属第一医院实验诊断学教研室哈尔滨医科大学附属第一医院血液肿瘤中心实验室黑龙江省中医药大学附属第一医院脑外科黑龙江哈尔滨150001

目的研究MTHFR基因在急性早幼粒细胞白血病急性期及缓解期表达差异。方法选取急性早幼粒细胞白血病患者269例,其中急性期183例,缓解期86例,采集骨髓血2 mL,通过实时定量RTPCR技术检测MTHFR mRNA表达水平。结果急性早幼粒细胞白血病急性... 详细信息

目的研究MTHFR基因在急性早幼粒细胞白血病急性期及缓解期表达差异。方法选取急性早幼粒细胞白血病患者269例,其中急性期183例,缓解期86例,采集骨髓血2 mL,通过实时定量RTPCR技术检测MTHFR mRNA表达水平。结果急性早幼粒细胞白血病急性期MTHFR表达水平显著高于缓解期(P<0.05)。结论 MTHFR基因高表达可能是急性髓系白血病M3型的发病原因之一。

关键词：急性早幼粒细胞白血病四氢叶酸还原酶基因表达甲基化

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胞浆PINK1生物学功能的研究进展

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生命的化学 2016年第1期36卷 111-116页

作者：武金玉张艳芬徐亚高旭马宁哈尔滨医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第二医院实验诊断教研室哈尔滨150081 北方转化医学研究合作中心哈尔滨150081 黑龙江省医学科学院基础医学研究所哈尔滨150081

PINK1(PTEN-induced putative kinase 1)是由581个氨基酸残基组成,具有高度保守结构域的丝氨酸/苏氨酸双激酶。研究证实,PINK1的N端线粒体靶向序列引导其定位于线粒体,在帕金森病及肿瘤中发挥线粒体融合分裂、能量代谢及线粒体自噬的调... 详细信息

PINK1(PTEN-induced putative kinase 1)是由581个氨基酸残基组成,具有高度保守结构域的丝氨酸/苏氨酸双激酶。研究证实,PINK1的N端线粒体靶向序列引导其定位于线粒体,在帕金森病及肿瘤中发挥线粒体融合分裂、能量代谢及线粒体自噬的调控作用。近年来,多项研究表明其可定位于胞浆,并参与一些胞浆内蛋白的磷酸化调节。本文对PINK1的胞浆定位与生物学功能进行综述,以期丰富人们对该分子成熟、定位及功能的认识。

关键词：胞浆PINK1 线粒体自噬蛋白质定位蛋白质翻译后加工修饰

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脂噬对脂类代谢和慢性肝脏疾病影响的研究进展

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国际免疫学杂志 2015年第5期38卷 484-487页

作者：周峰关秀茹哈尔滨医科大学附属第一医院实验诊断教研室 150001

最新研究发现了一种新的选择性自噬——脂噬，其可以选择性识别脂质并将其降解，在调节肝细胞脂肪代谢、维持细胞内脂质稳态等过程中发挥重要作用。自噬参与肝细胞的多种功能，不仅可以动员脂滴，调控脂肪的分解代谢，还参与极低密度脂... 详细信息

最新研究发现了一种新的选择性自噬——脂噬，其可以选择性识别脂质并将其降解，在调节肝细胞脂肪代谢、维持细胞内脂质稳态等过程中发挥重要作用。自噬参与肝细胞的多种功能，不仅可以动员脂滴，调控脂肪的分解代谢，还参与极低密度脂蛋白（VLDL）的分泌和装载。但高脂饮食、饮酒和肝炎病毒会破坏自噬功能，使肝细胞发生脂肪样变、纤维化或凋亡，进一步发展成脂肪肝、酒精肝，甚至肝癌。因而研究脂噬对脂质代谢的调节作用，脂噬对病毒性肝炎和脂肪肝等慢性肝脏疾病的影响很有意义。

关键词：脂噬脂质代谢脂肪肝肝炎病毒

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羟基乙酰化姜黄素诱导的声动力治疗对巨噬细胞凋亡与坏死的影响

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中国应用生理学杂志 2015年第2期31卷 102-106页

作者：杨力明梁会娟彭成海程佳丽王欢翁丽清李志韬田野哈尔滨医科大学基础医学院病生教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨工业大学物理凝聚态实验室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第四医院急诊内科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第一医院心内科黑龙江哈尔滨150001

目的:探讨羟基乙酰化姜黄素(HAC)介导的声动力治疗对人急性单核细胞白血病细胞核(THP-1)源巨噬细胞凋亡的影响。方法:体外诱导THP-1源巨噬细胞,通过单纯药物和单纯超声对细胞存活率的影响优化出声动力治疗的最适条件。将细胞分为4组(1&#... 详细信息

目的:探讨羟基乙酰化姜黄素(HAC)介导的声动力治疗对人急性单核细胞白血病细胞核(THP-1)源巨噬细胞凋亡的影响。方法:体外诱导THP-1源巨噬细胞,通过单纯药物和单纯超声对细胞存活率的影响优化出声动力治疗的最适条件。将细胞分为4组(1×105cells/ml):对照组、单纯超声组、单纯HAC组和声动力治疗组。应用声动力体外治疗巨噬细胞,药物HAC终浓度为5μg/ml,超声强度为0.5 W/cm2,超声时间为5 min。不同治疗方法后用无血清培养液培养6 h,用CCK-8法测定细胞存活率的变化,用Annexin V/PI法测定细胞凋亡、坏死变化。结果:CCK-8法测得声动力治疗后,细胞存活率明显下降(P<0.01),Annexin V/PI法测得声动力治疗后,细胞凋亡率和坏死率均升高,凋亡/坏死比升高(P<0.01)。结论:羟基乙酰化姜黄素介导的声动力治疗对THP-1巨噬细胞的凋亡有明显的诱导效应。

关键词：羟基乙酰化姜黄素声动力治疗巨噬细胞凋亡

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联合应用小干扰RNA抑制HBVcccDNA的体外实验研究

联合应用小干扰RNA抑制HBVcccDNA的体外实验研究

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第六届中国临床微生物学大会暨微生物学与免疫学论坛

作者：赵金英陈淑兰哈尔滨医科大学一附属医院实验诊断教研室

目的观察联合应用小干扰RNA对HepG2.2.15细胞中HBV抗原表达和复制的抑制作用。方法构建并转染重组质粒到HepG2.2.15细胞中。分别于48、72、96小时收集上清,收获细胞。用ELISA方法检测HBeAg和HBsAg;HBV DNA和cccDNA水平用实时定量PCR测定... 详细信息

目的观察联合应用小干扰RNA对HepG2.2.15细胞中HBV抗原表达和复制的抑制作用。方法构建并转染重组质粒到HepG2.2.15细胞中。分别于48、72、96小时收集上清,收获细胞。用ELISA方法检测HBeAg和HBsAg;HBV DNA和cccDNA水平用实时定量PCR测定;用逆转录PCR检测HBV mRNA水平。结果实验中应用的HBV特异性小干扰RNA均具有明显的抗HBV抗原表达和病毒复制作用;联合应用小于扰RNA较单独应用具有更强的抗HBV作用;联合应用小干扰RNA对cccDNA的扩增具有明显的抑制作用。结论HepG2.2.15细胞中联合应用小干扰RNA对HBV复制的抑制作用比单独应用siRNA更有效;联合应用小干扰RNA对cccDNA的扩增具有明显的抑制作用。

关键词： HBV RNA干扰联合应用小干扰RNA和拉米夫定 HepG2.2.15细胞

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MiR-490对B组3型柯萨奇病毒复制的抑制作用

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病毒学报 2014年第6期30卷 619-623页

作者：王琳琳钟照华王蔷鲁平李梅徐海燕哈尔滨医科大学附属第一医院实验诊断教研室哈尔滨市150001 哈尔滨医科大学微生物教研室哈尔滨市150081

为了研究miR-490对柯萨奇病毒B组3型（Coxsackievirus B type 3,CVB3）的作用,本文采用体外实验将miR-490转染入HeLa细胞,用带有海肾荧光素酶（Renilla luciferase,RLuc）基因的CVB3重组体（RLuc-CVB3）感染HeLa细胞,感染后0~40h,每隔8h收获一次细胞,测定荧光素酶活性,观察miR-490对RLuc-CVB3复制的作用。同时在另一实验组我们用带有绿色荧光（Enhanced green fluorescence protein,EGFP）表达的CVB3重组体（EGFP-CVB3）攻击表达miR-490的HeLa细胞和用反义miR-490（AMO-miR-490）沉默miR-490表达的HeLa细胞,观察miR-490对EGFP-CVB3复制和表达的影响。结果我们发现miR-490抑制RLuc-CVB3复制,miR-490在RLuc-CVB3感染后32h抑制效果最显著（P〈0.05）。同时发现在感染EGFP-CVB3后32h,miR-490对EGFPCVB3的复制和表达也有显著的抑制作用,但抑制作用可以被反义miR-490完全抵消。因此我们得出结论,miR-490能够显著抑制CVB3的复制和表达。

关键词：柯萨奇病毒 miR-490 抑制病毒复制

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哈尔滨市男男同性恋HIV-1感染者gag区基因分析

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2015年第1期9卷 14-17页

作者：孙冬莹邵冰张春蕾李春兰杜娟宋波林元龙李庆海岳超金刚刘树林王滨有王福祥哈尔滨医科大学公共卫生学院流行病教研室哈尔滨市150086 吉林医药学院公共卫生学院流行病教研室哈尔滨市胸科医院检验科哈尔滨医科大学附属第四医院感染科吉林医药学院药学院基础化学实验室哈尔滨医科大学基因组中心哈尔滨市150086

目的了解哈尔滨市男男同性恋者(MSM)感染HIV-1流行株的亚型分布状况及基因变异情况。方法采集MSM人群中HIV感染者血液标本,提取病毒RNA并应用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对HIV病毒gag区基因进行扩增,并对扩增产物测序。Mega 5.1软件... 详细信息

目的了解哈尔滨市男男同性恋者(MSM)感染HIV-1流行株的亚型分布状况及基因变异情况。方法采集MSM人群中HIV感染者血液标本,提取病毒RNA并应用巢式聚合酶链反应(nested-PCR)对HIV病毒gag区基因进行扩增,并对扩增产物测序。Mega 5.1软件进行系统进化树分析及基因离散距离的计算,Bio Edit 7.0.0软件将相应的基因序列翻译成氨基酸并分析其变异情况。结果成功获得61条gag基因序列,亚型分析结果显示,CRF01_AE 49例(80.32%),CRF07-BC 5例(8.19%),B亚型7例(11.47%)。其中B亚型基因离散距离最大(0.078±0.005),CRF01_AE最小(0.051±0.004)。CRF01_AE在MSM人群中形成两个独立的进化簇。各亚型的MHR序列变异对比结果显示,B亚型的中MHR序列中第7位缬氨酸(V)突变为异亮氨酸(I)的比例最大。结论哈尔滨市MSM人群中主要存在CRF01-AE、CRF07-BC和B三种亚型,以CRF01-AE为主要流行亚型;其中B亚型基因变异程度最大。对MSM人群HIV-1流行及变异情况的监测有助于对MSM人群开展及时有效的治疗。

关键词：男男同性恋 gag基因 HIV-1亚型

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联合应用小干扰RNA抑制HBVcccDNA的体外实验研究

联合应用小干扰RNA抑制HBVcccDNA的体外实验研究

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纪念中国微生物学会临床微生物学专业委员会成立五周年-第五届中国临床微生物学大会暨台湾海峡两岸微生物学与免疫学论坛

作者：刘文博刘倩哈尔滨医科大学一附属医院实验诊断教研室

目的观察联合应用小干扰RNA对HepG2.2.15细胞中HBV抗原表达和复制的抑制作用。方法构建并转染重组质粒到HepG2.2.15细胞中。分别于48、72、96小时收集上清,收获细胞。用ELISA方法检测HBeAg和HBsAg;HBV DNA和cccDNA水平用实时定量PCR测定;用逆转录PCR检测HBV mRNA水平。结果实验中应用的HBV特异性小干扰RNA均具有明显的抗HBV抗原表达和病毒复制作用;联合应用小干扰RNA较单独应用具有更强的抗HBV作用;联合应用小干扰RNA对cccDNA的扩增具有明显的抑制作用。结论HepG2.2.15细胞中联合应用小干扰RNA对HBV复制的抑制作用比单独应用siRNA更有效;联合应用小干扰RNA对cccDNA的扩增具有明显的抑制作用。

关键词： HBV RNA干扰联合应用小干扰RNA和拉米夫定 HepG2.2.15细胞

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2类多巴胺受体对心肌缺血后处理保护作用的影响及机制

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中国应用生理学杂志 2014年第4期30卷 301-305页

作者：李鸿珠高君郝晓敏张丽敏陈俊亭哈尔滨医科大学基础医学院病理生理学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨市第一医院骨三科黑龙江哈尔滨150010 哈尔滨医科大学基础医学院机能实验中心黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第四医学院麻醉科黑龙江哈尔滨150001

目的:观察2类多巴胺受体(DR2)在心肌缺血后处理保护中的作用,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺血后处理模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血后处理组(PC)、缺血后处理+DR2激动剂组(PC+Bro)、缺... 详细信息

目的:观察2类多巴胺受体(DR2)在心肌缺血后处理保护中的作用,并探讨其机制。方法:复制原代培养乳鼠心肌细胞缺血后处理模型,细胞随机分为正常组(Control)、缺血/再灌注组(I/R)、缺血后处理组(PC)、缺血后处理+DR2激动剂组(PC+Bro)、缺血后处理+DR2抑制剂组(PC+Hal)、缺血后处理+DR2抑制剂+激动剂组(PC+Hal+Bro)。比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;透射电镜观察细胞超微结构改变;流式细胞仪检测细胞凋亡变化;Western blot方法检测DR2蛋白表达、p-p38和p-JNK的活性。结果:与正常组相比,I/R能够增加DR2蛋白的表达,升高LDH活性和MDA含量,降低SOD活性,加重细胞损伤和细胞凋亡,上调p-p38和p-JNK的活性;与I/R组比较,PC进一步增加DR2蛋白的表达,降低LDH活性和MDA含量,增加SOD活性,减轻细胞损伤和细胞凋亡,下调p-p38和p-JNK的活性,Bro增强了PC的心肌保护作用,Hal则可取消Bro的这种作用。结论:DR2激活通过下调p-p38和p-JNK的活性参与缺血后处理对心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。

关键词： 2类多巴胺受体缺血后处理乳鼠心肌细胞细胞凋亡

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