检索结果-内蒙古大学图书馆

哈尔滨医科大学学报 2008年第6期42卷 563-567页

作者：肇晓光马洪星张宇雯董兴丽刘兴汉哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第五临医学院检验科黑龙江大庆163311 大庆油田总医院检验科黑龙江大庆163001

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠... 详细信息

目的利用大肠杆菌表达系统表达具有抗菌活性的SMAP-29衍生物,一步亲和层析法进行纯化。方法化学合成经改造的抗菌肽SMAP-29衍生物,纸片扩散法检测抗菌活性后,人工并用合成抗菌肽SMAP-29衍生物基因序列,克隆到表达载体pTYB11上,转化大肠埃希菌BL-21(DE3),酶切和测序鉴定后,用异硫代β-D-半乳糖昔(isopropylβ-D-thiogalactoside IPTG)诱导表达融合蛋白。经几丁质亲和层析柱纯化。结果化学合成的抗菌肽SMAP-29衍生物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌具有一定的抑菌作用,SMAP-29衍生物的编码基因按正确方向和序列插入表达载体,融合蛋白的表达量达到大肠杆菌蛋白总量的40%,几丁质亲和层析后获得了可溶性SMAP-29衍生物。结论成功构建了以融合蛋白形式表达的抗菌肽SMAP-29衍生物大肠杆菌基因工程菌,克服了抗菌肽对宿主菌的毒性,实现了用大肠杆菌高效表达和一步亲和层析纯化,为进一步检测活性及临床应用奠定了基础。

关键词：抗菌肽 SMAP-29衍生物改造原核表达纯化

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抗人羧酸酯酶-Ⅱ单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2007年第2期23卷 148-151页

作者：武正华唐晓波王志刚纪宏宇于磊刘慧文朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学附属二院药学部哈尔滨医科大学基础医学院组织与胚胎学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。... 详细信息

目的制备鼠抗人羧酸酯酶-Ⅱ(humancarboxyles-terases-Ⅱ,hCE-Ⅱ)单克隆抗体(mAb)并对其特性进行鉴定。方法以含hCE-Ⅱ的人肝脏微粒体蛋白混合抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备鼠抗hCE-Ⅱ的mAb,并用Protein-G亲和层析法纯化mAb。用间接ELISA法测定mAb的效价,以Westernblot鉴定mAb的特异性、免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。用免疫沉淀和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assistedlaserdesorption/ionizationtime-of-flightmassspectrometry,MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹谱(peptidemassfingerprint,PMF),再通过Mascot在人类蛋白质数据库中分析比对鉴定mAb对应的抗原。结果获得1株可持续、稳定分泌抗hCE-Ⅱ的mAb的杂交瘤细胞系。杂交瘤细胞分泌的mAbIg的亚类(型)为IgG1(κ),腹水mAb的效价达1×10-7。Westernblot分析显示,在Mr为62000处有1条清晰的带。免疫组化染色显示,该mAb可与肝细胞的浆蛋白结合(hCE-Ⅱ存在于肝细胞浆内微粒体),而不与血管平滑肌细胞内的蛋白结合。该mAb免疫沉淀物的Mr为62000,与hCE-Ⅱ的Mr相符。对免疫沉淀的蛋白质进行质谱鉴定证实,该mAb对应的抗原为hCE-Ⅱ。结论制备出的鼠抗hCE-Ⅱ的mAb效价高、特异性良好,为进一步研究hCE-Ⅱ的功能及其在肝癌等癌症的诊断和治疗中的作用提供了工具。

关键词：人羧酸酯酶-Ⅱ 单克隆抗体基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱

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兔抗人细胞色素P450 1A2多克隆抗体的制备及鉴定

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中国免疫学杂志 2007年第5期23卷 448-451页

作者：刘海英杨微李郁梅郭蕾吴春玲徐东花唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药教研室哈尔滨150086 哈尔滨医科大学大庆校区大庆163319 黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的：制备兔抗人细胞色素P4501A2（CYP1A2）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列，根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列，合成CYP1A2多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素（Keyhole limpet hem... 详细信息

目的：制备兔抗人细胞色素P4501A2（CYP1A2）抗体及其特性鉴定。方法：利用生物信息学方法分析CYP1A2蛋白的序列，根据亲水性、抗原性、柔韧性及表面性等指标选择多肽序列，合成CYP1A2多肽，与载体蛋白钥孔戚血蓝素（Keyhole limpet hemocyanin，KLH）偶联，免疫日本大耳白兔制备抗CYP1A2抗体。辛酸-硫酸铵法纯化抗体，间接ELISA法测定抗体的效价及相对亲和力常数，Western blot鉴定其特异性，免疫组化进行定位。结果：获得针对小分子CYP1A2的抗体。该抗体效价为1∶16000；相对亲和力常数在10^5-10^6/M，具有实用价值；可与CYP1A2合成肽及天然CYP1A2出现特异性反应；可识别正常人肝脏组织CYP1A2；Western blot的结果显示，该抗体识别的相应抗原的相对分子质量为58000。结论：合成的多肽-KLH复合物具有免疫原性，可用于制备相应的抗体。制备的兔抗CYP1A2合成肽抗体可应用于酶联免疫吸附试验、免疫印迹、免疫组化实验。

关键词： CYP1A2 合成肽多克隆抗体

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中国实用妇科与产科杂志 2007年第6期23卷 427-429页

作者：张广美隋丽华郑建华赵育帧刘兴汉哈尔滨医科大学附属第一临床医学院妇产科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第三临床医学院黑龙江哈尔滨150040 尔滨医科大学基础医学院黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后... 详细信息

目的研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制。方法2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率。免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。结果21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关。

关键词：宫颈癌肿瘤抑素 21肽肿瘤细胞增殖核抗原血管内皮细胞生长因子微血管密度

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缝隙连接蛋白43在急性局灶性脑缺血大鼠心室肌中的表达

缝隙连接蛋白43在急性局灶性脑缺血大鼠心室肌中的表达

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第九届全国心血管药理学术会议

作者：潘国聘王玲孙丽华张高小张勇吕延杰杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的检测缝隙连接蛋白43(cx43)在大鼠急性局灶性脑缺血模型心室肌中的表达及分布,以探讨其与脑缺血后心律失常的关系。方法用线栓法建立大鼠右侧局灶性脑缺血模型,检测心电,在电子显微镜下观察心肌细胞的亚显微结构, 采用 western-blot... 详细信息

目的检测缝隙连接蛋白43(cx43)在大鼠急性局灶性脑缺血模型心室肌中的表达及分布,以探讨其与脑缺血后心律失常的关系。方法用线栓法建立大鼠右侧局灶性脑缺血模型,检测心电,在电子显微镜下观察心肌细胞的亚显微结构, 采用 western-blot 和免疫组织化学的方法,检测心室肌中 cx43表达和分布的改变。结果大约71%的脑缺血模型大鼠出现心律失常。电镜结果显示脑缺血后,心肌

关键词：急性局灶性脑缺血缝隙连接蛋白心室肌

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小鼠全脑缺血模型心电图改变及其药物干预

小鼠全脑缺血模型心电图改变及其药物干预

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第九届全国心血管药理学术会议

作者：安磊李超王玲杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地

目的：制作小鼠全脑缺血致心律失常模型并用相关药物干预,初步探讨心律失常发生机制。方法：本实验通过结扎小鼠双侧颈总动脉,造全脑缺血脑心综合征模型,连续做心电图监测;分别用普萘洛尔、卡托普利等类药物进行干预, 观察症状改善情况... 详细信息

目的：制作小鼠全脑缺血致心律失常模型并用相关药物干预,初步探讨心律失常发生机制。方法：本实验通过结扎小鼠双侧颈总动脉,造全脑缺血脑心综合征模型,连续做心电图监测;分别用普萘洛尔、卡托普利等类药物进行干预, 观察症状改善情况。结果：小鼠全脑缺血模型与假手术组比较有明显的脑心综合征症状。普萘洛尔组与模型小鼠相比,心律失常发生率、心律失常出现时间、心

关键词：全脑缺血模型心律失常心电图改变

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脑缺血致心律失常离子通道机制的研究

脑缺血致心律失常离子通道机制的研究

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第九届全国心血管药理学术会议

目的：研究脑缺血后心肌细胞离子通道的改变。方法：80只 Wistar 雄性大鼠,分为两组：正常对照组,脑缺血24小时组。应用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型。两小时内连续监测心电图变化。每组随机选取6只,通过酶解法分离心室肌细胞,记录... 详细信息

目的：研究脑缺血后心肌细胞离子通道的改变。方法：80只 Wistar 雄性大鼠,分为两组：正常对照组,脑缺血24小时组。应用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型。两小时内连续监测心电图变化。每组随机选取6只,通过酶解法分离心室肌细胞,记录钾电流(I,I),钙电流(I)以及动作电位时程（APD）。每组随机选取4只,电镜检测心肌组织病理变化。结果：71%大鼠有心电图改变;脑

关键词：心律失常大脑中动脉栓塞离子通道

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脑心综合征大鼠心肌细胞内Ca2+对KCl除极的反应性增强

脑心综合征大鼠心肌细胞内Ca2+对KCl除极的反应性增强

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第九届全国心血管药理学术会议

目的研究脑心综合征（cerebro-cardiac syndrome,CCS）心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca]i)对 KCI 除极的反应性,通过心肌[Ca]i 的变化来探讨脑心综合征心律失常的发生机制。方法 Wistar 大鼠随机分为正常组、假手术组、脑心综合征2h 组、... 详细信息

目的研究脑心综合征（cerebro-cardiac syndrome,CCS）心肌细胞内游离钙离子浓度([Ca]i)对 KCI 除极的反应性,通过心肌[Ca]i 的变化来探讨脑心综合征心律失常的发生机制。方法 Wistar 大鼠随机分为正常组、假手术组、脑心综合征2h 组、脑心综合征24h 组,模型的制作采用线栓法栓塞右侧大脑中动脉建立。采用酶法分离心肌细胞,Fluo—3/AM 负载后采用激光共聚焦扫描显微镜观

关键词：大鼠心肌细胞综合征 KCl

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中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

中药对正常及病理状态下Ikr/HERG钾通道的调控作用

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第六届全国中药新药研究与开发信息交流会

作者：杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理教研室，省部共建生物医药工程国家重点实验室培育基地，黑龙江哈尔滨 150081

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条... 详细信息

为进一步证实HERG通道在心血管疾病中的功能和地位，笔者应用分子克隆及分子生物学技术，建立稳定表达HERG通道蛋白的细胞系，结合膜片钳方法，对HERD通道的电生理和电药理学特性进行了全面研究，并研究了在缺血及高糖和低糖代谢紊乱条件下HERG通道的改变，同时确定药物对其调控作用。

关键词：中药 HERG钾通道心血管疾病分子克隆膜片钳调控作用

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三磷酸肌醇信号途径参与血小板激活因子诱导豚鼠心室肌细胞钙浓度增高

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中国药理学与毒理学杂志 2006年第1期20卷 48-52页

作者：初文峰孙宏丽乔国芬朴闲美董德利杨宝峰哈尔滨医科大学药学院药理学教研室黑龙江省生物医药重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学药学院药理学教研室

目的观察血小板激活因子(PAF)是否影响心室肌细胞钙离子浓度([Ca^(2+)]i)以及通过哪条信号转导通路起作用。方法采用酶法分离豚鼠心室肌细胞,用PAF刺激细胞;用Fluo-3/AM和共聚焦显微镜观察细胞[Ca^(2+)]i;用2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)... 详细信息

目的观察血小板激活因子(PAF)是否影响心室肌细胞钙离子浓度([Ca^(2+)]i)以及通过哪条信号转导通路起作用。方法采用酶法分离豚鼠心室肌细胞,用PAF刺激细胞;用Fluo-3/AM和共聚焦显微镜观察细胞[Ca^(2+)]i;用2-氨乙基硼酸二苯酯(2-APB)和雷诺定(ryanodine)分别阻断IP3和雷诺定信号通路。全细胞膜片钳技术观察心室肌细胞L型钙电流(ICa-L)。结果无论在有钙还是无钙台氏液,PAF(1pmol·L-1~10nmol·L-1)都能增加心肌细胞[Ca^(2+)]i,其作用能够被2-APB2μmo·lL-1阻断,而不能被雷诺定200μmol·L-1阻断。PAF1nmol·L-1对ICa-L没有明显影响,对照组和实验组电流密度分别为-(11.0±1.9)和-(10.5±1.3)pA·pF-1。结论PAF能增加豚鼠心室肌细胞[Ca^(2+)]i,IP3信号通路可能参与了这一过程。

关键词：血小板激活因子信号传导心肌钙,细胞内 2-氨乙基硼酸二苯酯肌醇1,4,5-三磷酸膜片钳技术,全细胞

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