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国际免疫学杂志 2019年第6期42卷 614-618页

作者：付恩慧陈晓杭魏兰兰哈尔滨医科大学微生物学教研室伍连德研究所黑龙江省免疫与感染重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

放疗是头颈癌治疗的重要手段之一.头颈癌放疗敏感性受多种因素的影响,且机制各异.人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV))感染,肿瘤微环境中免疫细胞亚群的浸润,肿瘤组织中表皮生长因子受体(endothelial growth factor receptor,EGFR)... 详细信息

放疗是头颈癌治疗的重要手段之一.头颈癌放疗敏感性受多种因素的影响,且机制各异.人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV))感染,肿瘤微环境中免疫细胞亚群的浸润,肿瘤组织中表皮生长因子受体(endothelial growth factor receptor,EGFR)及P53的表达情况等,是影响头颈癌放疗敏感性的重要因素.以下主要对影响头颈癌放疗敏感性的主要因素及相关机制进行综述.

关键词：头颈癌人乳头瘤病毒放疗敏感性免疫细胞

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外源性IFN-β对OL细胞和OL/BDV细胞中内源性Ⅰ型IFN的诱导作用

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国际免疫学杂志 2019年第1期42卷 1-6页

作者：翟爱霞颜冬梅王海萍崔乐乐卜桐考文萍张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室伍连德研究所、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室、黑龙江省普通高校感染与免疫科技创新团队哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第四医院 150001

目的探讨外源性干扰素(interferon,IFN)-β对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte,OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中内源性Ⅰ型IFN表达和干扰素调节因子(interferon regulatory factor,IRF)7细胞定位的影响。方法外源性IFN-β处理OL细胞和OL/BDV细胞0、0.5、2、4、8、24 h,根据细胞是否加入外源性IFN-β,分为外源性IFN-β未刺激组和刺激组。采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测Ⅰ型IFN mRNA表达。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,外源性IFN-β刺激4 h,观察IRF7细胞定位情况。结果外源性IFN-β刺激OL细胞,在2、4、24 h,IFN-αmRNA表达显著增加(P值分别为0.008,0.0001,0.004);在0.5、4、8、24 h,IFN-βmRNA表达显著增加(P值分别为0.0004,0.0002,0.011,0.012),两者均在4 h增加最为显著。外源性IFN-β刺激OL/BDV细胞4 h和24 h,IFN-αmRNA表达显著增加(P值分别为0.0004,0.022),IFN-βmRNA表达仅在刺激4增加(P=0.002)。外源性IFN-β刺激OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白均转移至细胞核内。结论外源性IFN-β可诱导OL细胞和OL/BDV细胞中内源性I型IFN表达,参与解除BDV对I型IFN应答的抑制过程,并促进IRF7的活化入核。

关键词：外源性干扰素-β 人类少突胶质细胞博尔纳病病毒持续感染的人类少突胶质细胞内源性I型干扰素

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临床标本呼吸道病毒感染检测与腺病毒分离鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2019年第2期53卷 116-121页

作者：曲丽欣李烨张哲董妥王迎晨商蕾高虹 O.N.Reva V.I.Zlobin 曲章义哈尔滨医科大学卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 比勒陀利亚大学生物信息学与计算生物学部生物化学系比勒陀利亚南非0002 俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学生物医学技术研究所俄罗斯伊尔库茨克664003

目的了解哈尔滨地区住院患者呼吸道病毒感染状况及流行趋势,为疾病防治和腺病毒流行监测提供参考。方法采用直接免疫荧光法,检测2017年3月~2018年2月哈尔滨地区住院患者痰液标本呼吸道病毒的感染情况。选择1例腺病毒阳性标本利用空斑实... 详细信息

目的了解哈尔滨地区住院患者呼吸道病毒感染状况及流行趋势,为疾病防治和腺病毒流行监测提供参考。方法采用直接免疫荧光法,检测2017年3月~2018年2月哈尔滨地区住院患者痰液标本呼吸道病毒的感染情况。选择1例腺病毒阳性标本利用空斑实验进行分离纯化,利用PCR扩增六邻体L1区、纤突和E1A区并进行PCR产物序列测定和Blast比对分析鉴定型别。结果七种常见呼吸道病毒检测总体阳性率为14.36%。呼吸道合胞病毒阳性率最高为4.18%,腺病毒阳性率为1.82%。不同季节病毒检测阳性率差异有统计学意义(P<0.05)。从腺病毒检测阳性标本中分离到一株人腺病毒毒株,进行PCR产物测序和分析,初步鉴定该毒株为人腺病毒3型。结论哈尔滨地区呼吸道病毒感染的病原体主要以呼吸道合胞病毒为主。呼吸道病毒感染流行季节为冬春季节,应加强哈尔滨地区呼吸道病毒流行情况监测。

关键词：呼吸道病毒直接免疫荧光腺病毒病毒培养

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CVB对OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN信号转导途径的影响

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微生物学杂志 2019年第4期39卷 46-51页

作者：翟爱霞颜冬梅王海萍卜桐崔乐乐考文萍张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室伍连徳研究所黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江省普通高校感染与免疫科技创新团队黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第四医院黑龙江哈尔滨150001

探讨柯萨奇病毒(coxsackievirus, CVB)对人类少突胶质细胞(oligodendrocyte, OL)和博尔纳病病毒(Borna disease virus, BDV)持续感染的OL细胞(OL/BDV)中I型干扰素(interferon, IFN)、microRNA-155(miR-155)表达以及干扰素调节因子(interferon regulatory factor, IRF)7细胞定位的影响。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞0、2、4、6、12和24 h,qPCR检测I型IFN mRNA和miR-155表达水平。OL细胞和OL/BDV细胞分别转染IRF7-EGFP质粒,CVB感染4 h,观察IRF7细胞定位情况。CVB感染OL细胞2、4、12和24 h,IFN-αmRNA和miR-155表达水平显著增加,IFN-βmRNA表达水平在4、12和24 h显著增加;CVB感染OL/BDV细胞IFN-α和IFN-βmRNA表达水平除0 h均显著增加,但miR-155表达仅在12和24 h显著增加。CVB感染OL细胞和OL/BDV细胞4 h,IRF7绿色荧光蛋白由细胞浆转移至细胞核内。综上所述,CVB可诱导OL细胞和OL/BDV细胞I型IFN、miR-155的表达,促进IRF7入核,从而激活I型IFN信号转导途径。

关键词：柯萨奇病毒 OL细胞 OL/BDV细胞 I型IFN信号转导途径 microRNA-155

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人类内源性逆转录病毒在自身免疫病发生发展中作用的研究进展

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国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 427-431页

作者：郑晓秋石力予钱钧哈尔滨医科大学微生物学教研室伍连德研究所黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省高校医学病原学重点实验室150081

人类内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses,HERV)是过去的逆转录病毒感染在人类基因组中的残留物,并已涉及人类生物学的不同方面.相关基因元件形成504个不同的家族,占人类基因组的8%.HERV编码活性逆转录病毒蛋白,其可能在体... 详细信息

人类内源性逆转录病毒(human endogenous retroviruses,HERV)是过去的逆转录病毒感染在人类基因组中的残留物,并已涉及人类生物学的不同方面.相关基因元件形成504个不同的家族,占人类基因组的8%.HERV编码活性逆转录病毒蛋白,其可能在体内发挥重要的生理功能,也可能参与肿瘤、自身免疫病、神经和感染性疾病的发生发展.自身免疫病是一组与自体反应性B细胞和T细胞应答有关的异常免疫反应.已确定的自身免疫病有80多种,这些疾病中最常见的疾病包括系统性红斑狼疮、多发性硬化症、Ⅰ型糖尿病、类风湿性关节炎等,现就HERVs与自身免疫病发病的相关性研究进行综述.

关键词：人类内源性逆转录病毒自身免疫病系统性红斑狼疮类风湿性关节炎多发性硬化

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B组柯萨奇病毒诱导的细胞焦亡在心肌损伤中的作用

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国际免疫学杂志 2018年第3期41卷 256-259页

作者：史家宁黄怡可秦颖付军王燕史立军钟照华杨幼林赵文然哈尔滨医科大学附属第一医院内科 150001 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

目的利用caspase-1抑制剂抑制焦亡，评价细胞焦亡在B组柯萨奇病毒（Coxsackievirus B，CVB）所致心肌损伤中的作用，确定CVB能否通过诱导细胞焦亡导致心肌炎症。方法Balb/c乳鼠分为四组：对照组、CVB3感染组（腹腔注射CVB3）、1次抑制... 详细信息

目的利用caspase-1抑制剂抑制焦亡，评价细胞焦亡在B组柯萨奇病毒（Coxsackievirus B，CVB）所致心肌损伤中的作用，确定CVB能否通过诱导细胞焦亡导致心肌炎症。方法Balb/c乳鼠分为四组：对照组、CVB3感染组（腹腔注射CVB3）、1次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后注射1次caspase-1抑制剂）和3次抑制剂组（CVB3感染乳鼠后在1、3、5天分3次注射caspase-1抑制剂），Western blot检测各组乳鼠心肌组织中的caspase-1表达，HE染色观察各组乳鼠心肌组织病理变化。HeLa细胞分为8组，前4组用CVB3感染不同时间，后4组CVB3感染的同时分别加入不同剂量caspase-1抑制剂，检测CVB3病毒蛋白表达量。结果CVB3感染组的乳鼠心肌组织中激活的caspase-1含量增加，与CVB3组相比，注射caspase-1抑制剂的小鼠心肌组织中激活的caspase-1含量明显减少。正常对照组乳鼠心肌细胞组织状态正常，CVB3感染组乳鼠心肌组织大面积变性、坏死，CVB3＋caspase-1抑制剂组乳鼠心肌组织发生病理变化但程度较轻。HeLa细胞中caspase-1与CVB3蛋白含量随caspase-1抑制剂剂量增大而降低。结论抑制细胞焦亡可有效减轻CVB3所致心肌损伤，CVB诱导的焦亡参与心肌致病过程。

关键词： B组柯萨奇病毒细胞焦亡抑制剂心肌损伤

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咽部微生态失调与常见呼吸道疾病

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国际免疫学杂志 2018年第1期41卷 68-72页

作者：赵月陈文佳凌虹尹新华哈尔滨医科大学附属第一医院心内科 150001 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

咽部微生态的动态平衡是决定呼吸道健康的重要因素之一。越来越多的证据表明，咽部微生物群在多种呼吸道疾病的发生、发展中发挥着重要的作用，与慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、哮喘、呼吸道感染... 详细信息

咽部微生态的动态平衡是决定呼吸道健康的重要因素之一。越来越多的证据表明，咽部微生物群在多种呼吸道疾病的发生、发展中发挥着重要的作用，与慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）、哮喘、呼吸道感染性疾病、肺囊性纤维化（cystic pulmonary fibrosis，CF）以及结核病（tuberculosis，TB）等疾病的临床表现、急性加重、严重程度、治疗以及预后相关。因而研究人体咽部微生态失调与常见呼吸道疾病相关性具有重要意义。

关键词：咽部微生物群呼吸道疾病微生态失调

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HIV-1包膜糖蛋白免疫策略对抗体产生的影响

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中国科技论文在线精品论文 2018年第5期11卷 523-529页

作者：王甲业韩晶莹陈文江凌虹哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室哈尔滨 150081 哈尔滨医科大学附属第二医院口腔科哈尔滨 150001

目的:研究来源于一个I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)慢性感染的广谱中和者包膜糖蛋白(Env)的免疫原性及免疫策略对体液免疫反应的影响.方法:gp120单体(gp120M)、gp120三聚体(gp120T)和gp140三聚体(gp1... 详细信息

目的:研究来源于一个I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)慢性感染的广谱中和者包膜糖蛋白(Env)的免疫原性及免疫策略对体液免疫反应的影响.方法:gp120单体(gp120M)、gp120三聚体(gp120T)和gp140三聚体(gp140T)表达质粒DNA和蛋白不同免疫策略免疫BALB/c小鼠.末次免疫后第14天,测定免疫小鼠血清中特异性结合抗体、中和抗体滴度.结果:gp120和gp140 DNA和/或包膜糖蛋白免疫小鼠后,血清抗体对异源(HIV-1毒株SF162、JRCSF、Bal和ⅢB)及同源(06044 gp120M、gp120T和gp140T)HIV-1包膜糖蛋白抗原显示出广谱结合能力;部分小鼠血清显示了中和SF162包膜假病毒的能力;DNA初免-蛋白加强策略诱导结合抗体和中和抗体能力均明显优于单纯蛋白免疫(P<0.05).结论:HIV-1广谱中和者包膜糖蛋白单体和三聚体均显示了良好的免疫原性;DNA初免-蛋白加强策略诱导结合抗体和中和抗体能力显著优于单纯蛋白免疫.

关键词：医学微生物学 HIV-1 包膜糖蛋白广谱中和抗体三聚体免疫原性

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原代HIV-1 B'亚型包膜gp120三聚体蛋白抗原性及免疫原性研究

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中国科技论文在线精品论文 2018年第11期11卷 1123-1130页

作者：王甲业韩晶莹袁丽陈文江庄敏凌虹哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室哈尔滨 150081 哈尔滨医科大学附属第二医院口腔科哈尔滨 150001

目的:研究I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B'亚型广谱中和者(CNHLJBF06044)体内病毒包膜gp120三聚体蛋白(gp120T)的抗原性和免疫原性.方法:通过假病毒中和试验分析06044包膜假病毒与B'亚型感... 详细信息

目的:研究I型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)B'亚型广谱中和者(CNHLJBF06044)体内病毒包膜gp120三聚体蛋白(gp120T)的抗原性和免疫原性.方法:通过假病毒中和试验分析06044包膜假病毒与B'亚型感染者血浆的中和活性;通过酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)试验分析06044 gp120T与已知广谱中和抗体(broadly neutralizing antibodies,BNAbs)的结合活性;06044 gp120T免疫BALB/c小鼠,通过ELISA和中和试验分析其免疫血清抗原特异性结合抗体及中和抗体水平.结果:1)含有06044包膜假病毒可被56％(14/25)的HIV-1 B'亚型感染者血浆中和,半数抑制量(50％inhibitory dose,ID50)值的几何平均滴度(geometric mean titer,GMT)为1:1084;2)06044 gp120T表面中和抗体表位暴露良好,可与多个BNAbs结合;3)06044 gp120T免疫小鼠后,产生交叉反应性结合抗体和中和抗体.结论:HIV-106044 gp120T具有良好的抗原性,在小鼠试验中具有良好的免疫原性.

关键词：医学微生物学 I型人类免疫缺陷病毒(HIV-1) gp120 三聚体抗原性免疫原性

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人腺病毒六邻体高变区蛋白的亚克隆表达及纯化

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国际免疫学杂志 2019年第3期42卷 229-234页

作者：李烨曲丽欣董妥王迎晨张哲杜溪乔路冰高虹商蕾李宇 O.N.Reva V.I.Zlobin 曲章义哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学中俄医学研究中心环境相关疾病研究所自然疫源性疾病研究室 150081 比勒陀利亚大学生物信息学与计算生物学部生物化学系南非比勒陀利亚0002 俄罗斯伊尔库茨克国立医科大学生物医学技术研究所俄罗斯伊尔库茨克664003

目的克隆表达人腺病六邻体高变区片段,了解其结构和功能,为研发腺病毒基因工程重组疫苗奠定基础。方法根据生物信息学软件预测的腺病毒六邻体的高变区域,选择目标基因,设计其对应的引物,并以团队保存的人腺病毒六邻体核酸序列为模板,聚... 详细信息

目的克隆表达人腺病六邻体高变区片段,了解其结构和功能,为研发腺病毒基因工程重组疫苗奠定基础。方法根据生物信息学软件预测的腺病毒六邻体的高变区域,选择目标基因,设计其对应的引物,并以团队保存的人腺病毒六邻体核酸序列为模板,聚合酶链反应扩增目标基因,定向插入载体pQE32中构建工程质粒。通过酶切和基因测序鉴定阳性工程质粒,并诱导其在大肠杆菌M15中高效表达带有组氨酸标记的靶蛋白,应用镍树脂亲和层析的方法分离纯化靶蛋白。结果构建了含有人腺病毒六邻体高变区片段的重组质粒,同时探索出其在大肠杆菌M15中高效表达的条件,纯化目标蛋白,其分子量约为188000,与应用生物信息学分析预测的结果相同。结论成功地克隆、表达和纯化了人腺病毒六邻体高变区片段。

关键词：人腺病毒六邻体高变区片段蛋白质表达蛋白质纯化

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