检索结果-内蒙古大学图书馆

国际检验医学杂志 2015年第9期36卷 1179-1181页

作者：滕旭林乐勋陈丽玲梁爽徐晖谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学大庆校区检验系黑龙江大庆163000 哈尔滨市疾病预防控制中心黑龙江哈尔滨150056 哈尔滨医科大学医学遗传学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究多种核苷类似物(NAs)序贯治疗产生交叉耐药的患者体内乙型肝炎病毒(HBV)RT区变异位点和变异类型。方法筛选6例临床上对两种或两种以上NAs产生交叉耐药的患者,并从患者血清中获取HBV交叉耐药株DNA,进行全基因克隆和测序,从而分... 详细信息

目的研究多种核苷类似物(NAs)序贯治疗产生交叉耐药的患者体内乙型肝炎病毒(HBV)RT区变异位点和变异类型。方法筛选6例临床上对两种或两种以上NAs产生交叉耐药的患者,并从患者血清中获取HBV交叉耐药株DNA,进行全基因克隆和测序,从而分析其变异特点和规律。结果经测序鉴定,6位患者体内HBV基因型均为C型,产生交叉耐药的相关性变异以rtM204V/I(YMDD)变异为主(50%),部分YMDD变异株伴有rtL180M变异(16.7%)、其他伴随变异包括rtV173L(16.7%),rtL80I(16.7%)。此外,还发现RT区次要变异伴随位点rtL269I(40%)、rtQ333K(56.7%)、rtH337N(56.7%)。结论RT区次要变异伴随位点rtL269I、rtQ333K、rtH337N的出现可能增强了HBV YMDD变异株在体内的复制能力,并对交叉耐药准种所占比例起到了放大的效果,从而导致本研究中6例患者出现对拉米夫定、恩替卡韦、阿德福韦和替比夫定产生多重耐药。

关键词：乙型肝炎病毒交叉耐药病毒变异

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相同多态性位点对结核分枝杆菌北京家族菌株多位点可变数目串联重复序列基因型构成的影响

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国际免疫学杂志 2015年第1期38卷 5-8,39页

作者：董彩博潘新灵孙高翔崔佳奕凌虹李迪哈尔滨医科大学微生物学教研室、黑龙江感染与免疫重点实验室、黑龙江省高效病原生物学重点实验室 150081

目的探讨多态性相同的位点对北京家族结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列（MIRU-VNTR）基因分型的影响，为合理选择分型位点提供科学依据。方法分别选取9个及12个位点，构成4组MIRU—VNTR位点组合，其中，9位点组成的两个组合中，... 详细信息

目的探讨多态性相同的位点对北京家族结核分枝杆菌多位点可变数目串联重复序列（MIRU-VNTR）基因分型的影响，为合理选择分型位点提供科学依据。方法分别选取9个及12个位点，构成4组MIRU—VNTR位点组合，其中，9位点组成的两个组合中，分别有两个不同位点（MIRU40／MIRUl6）多态性一致，其余为相同位点；12位点的两个组合则分别包括另外两个多态性相同的位点（MIRu39／MIRu31）。进行聚类分析，比较含有相同多态性的不同位点组合的分辨能力、成簇能力以及基因型特点。结果9位点两个组合都将菌株分为三群，其中，Ⅲ群菌株仅有1株相同，分别占组合1、2的2．0％和1．6％。12位点组合也将菌株分为三群，第Ⅱ群菌株组成差异非常明显，完全没有相同的菌株。结论多态性相同的位点对北京家族菌株MIRU—VNTR基因分型影响较大。在选择MIRU—VNTR分型位点时，应不仅仅检验位点的分辨能力和对成簇的影响，还应考虑有相同／相近多态性的位点对基因型构成的影响。

关键词：结核分枝杆菌北京家族菌株多位点可变数目串联重复序列多态性

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基于体细胞突变的单克隆抗体制备技术自主多样化库系统的原理与应用

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国际免疫学杂志 2015年第5期38卷 459-464页

作者：潘超宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室 150081

自主多样化库（ADLib）是近年新建立的一种基于体细胞突变的生产抗体的系统，其原理为以鸡的传染性法式囊淋巴细胞瘤细胞（DT40，表达鸡IgM有膜结合与分泌两种形式）为靶细胞，利用-曲古酶抑菌素（TSA）抑制DT40的去乙酰活性酶，促进组... 详细信息

自主多样化库（ADLib）是近年新建立的一种基于体细胞突变的生产抗体的系统，其原理为以鸡的传染性法式囊淋巴细胞瘤细胞（DT40，表达鸡IgM有膜结合与分泌两种形式）为靶细胞，利用-曲古酶抑菌素（TSA）抑制DT40的去乙酰活性酶，促进组蛋白乙酰化，从而造成免疫球蛋白基因高频转换，在细胞的表面展示膜结合IgM文库，最后通过抗原标记磁珠分选法从文库中选择有抗原特异性鸡源性抗体的细胞，培养细胞获得分泌性单克隆抗体IgM。进而，通过将人IgG的重链Fc段DNA序列插入DT40细胞IgM重链区相应位置，建立了合成人Fc段鸡Fab段的嵌合人IgG（重链Fc段决定免疫球蛋白类型）的ADLib系统。ADLib系统可应用于生产诊断与治疗性抗体药物的单克隆抗体（mAb）。

关键词：自主多样化库系统曲古酶抑菌素单克隆抗体人嵌合抗体

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结核分枝杆菌北京基因型菌株流行的可能机制

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中国微生态学杂志 2015年第4期27卷 495-496,F0003页

作者：孙高翔李迪哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室黑龙江哈尔滨150086

北京基因型菌株是结核分枝杆菌的一个进化支,通过分子流行病学、实验和临床研究调查,基于其传播和引起疾病能力的增强及遗传同质性,可能比其他结核分枝杆菌菌株更有选择性优势。不同的细胞实验和动物模型证明,相比其他基因型菌株,北京... 详细信息

北京基因型菌株是结核分枝杆菌的一个进化支,通过分子流行病学、实验和临床研究调查,基于其传播和引起疾病能力的增强及遗传同质性,可能比其他结核分枝杆菌菌株更有选择性优势。不同的细胞实验和动物模型证明,相比其他基因型菌株,北京基因型菌株毒力更强,引起更严重的组织病理学改变,加速疾病的进程同时增加死亡率,抑制宿主免疫反应。文献报道显示,北京基因型菌株具有独特的基因型,其超毒力可以通过与宿主免疫系统的相互作用来说明。本文综述近年北京基因型菌株流行及菌株毒力方面的研究成果。

关键词：北京基因型基因多样性毒力

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自身抗体及其作用与机制研究进展

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国际免疫学杂志 2015年第6期38卷 581-585页

作者：黄鸿鑫宋武琦张凤民哈尔滨医科大学微生物教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150086

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底... 详细信息

自身抗体是可以识别位于细胞内、细胞表面或细胞外的自身抗原的免疫球蛋白，其产生是自身免疫病重要的特征之一。现已发现，自身抗体除具有致病作用，参与自身免疫病的发生发展外，部分自身抗体的可变区具有酶的催化活性，可通过催化底物水解，发挥调节作用，还有一部分自身抗体具有治疗潜能。因此，自身抗体作用与相关机制的阐明，对进一步加深对自身抗体的理解具有重要意义。

关键词：自身抗体细胞损伤催化酶细胞调控

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博尔纳病病毒X基因真核表达载体的构建及鉴定

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中国微生态学杂志 2015年第4期27卷 379-381,385页

作者：孙岚刘翠玉纪羽婷李玉军李爱梅魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-m... 详细信息

目的构建博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)X蛋白真核表达载体,为BDV X蛋白的功能研究奠定基础。方法从BDV持续感染的人少突胶质瘤细胞(oligodentrocyte,OL)的总RNA中,通过逆转录和PCR获得BDV X基因的完整序列,将其连接到pc DNA6-myc-His(A)载体上,转化至***感受态细菌后,提取质粒筛选阳性克隆,通过PCR法和DNA测序进行鉴定,并转染至OL细胞,通过Western blot方法验证重组蛋白的表达。结果测序鉴定目的基因序列正确插入至pc DNA6-myc-His(A)载体的酶切位点,PCR扩增的基因片段大小与目的基因相同,Western blot证明转染至OL细胞后可表达BDV X-His融合蛋白。结论成功构建了博尔纳病病毒X基因真核表达载体pc DNA6-myc-His(A)-BDV X。

关键词：博尔纳病病毒基因重组序列测定蛋白免疫印迹

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结核分枝杆菌Rv0073基因在大肠杆菌中的表达及纯化

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国际免疫学杂志 2015年第3期38卷 224-228页

作者：孙高翔潘新灵崔佳奕凌虹李迪哈尔滨医科大学医学微生物学教研室、黑龙江省感染与免疫重点实验室、黑龙江省感染与免疫创新团队、黑龙江省普通高校病原学重点实验室 150081

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌（MTB） Rv0073基因原核表达载体并进行表达和纯化.方法以MTB H37Rv基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段,构建原核表达载体pET26b-Rv0073,经测序确定无误后转化至大肠杆菌（***）感受态细胞BL21中.用聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）方法检测重组蛋白表达,检测异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导不同时间、不同温度条件下重组蛋白表达量.采用His镍磁珠进行外源蛋白小量纯化.结果成功构建重组表达质粒,重组蛋白经IPTG诱导后,2h开始明显表达且表达量无时间依赖性,在不同温度诱导下,重组蛋白的表达量随温度的增高而减少.重组蛋白以包涵体形式存在,经His镍磁珠纯化后获得重组蛋白.结论成功构建并表达Rv0073蛋白,为后续Rv0073的大量纯化及其功能研究奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌 Rv0073 表达纯化

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人7型腺病毒的分离与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2014年第5期48卷 353-357页

作者：杨金峰商蕾董妥齐桂云王迎晨高虹刘振卫于惠崧郭微媛曲章义哈尔滨医科大学卫生微生物学教研室哈尔滨医科大学附属第二医院检验科黑龙江哈尔滨150081

目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩... 详细信息

目的对哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本进行检测、分离鉴定和分型。方法应用直接免疫荧光法对标本进行初步筛检,将筛检得到的腺病毒阳性标本接种到A549细胞进行病毒培养,并用空斑法进行纯化。采用PCR技术扩增腺病毒五邻体、六邻体基因,将扩增的PCR产物进行基因测序,并将测序结果 BLAST比对,初步判断其型别。结果从采集的标本中分离到1株人腺病毒毒株。BLAST比对五邻体、六邻体测序结果,表明该毒株与人7型腺病毒五邻体、六邻体的同源性为100%,初步判定该毒株为人7型腺病毒。结论从哈尔滨医科大学附属第二医院呼吸道感染患者的痰或咽拭子标本中分离到1株人7型腺病毒。

关键词：直接免疫荧光腺病毒病毒培养空斑试验

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线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体的构建及鉴定

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国际免疫学杂志 2015年第2期38卷 120-123页

作者：刘翠玉李玉军孙岚纪羽婷张庆猛魏兰兰张凤民哈尔滨医科大学医学微生物学教研室黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省感染与免疫创新团队黑龙江省普通高校病原学重点实验室150081

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶... 详细信息

目的构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体。方法通过聚合酶链反应（PCR）的方法扩增获得线粒体抗病毒信号蛋白基因的完整序列，进而纯化回收后连接到pMD^TM18-T载体上，将pcDNA6／***载体和带有目的片段的pMD^TM18-T载体同时进行双酶切，酶切产物过夜连接转化至大肠杆菌JMl09，挑取阳性克隆pcDNA6／myc—HisA—MAVS扩增后，提取重组质粒；利用PCR和核酸测序验证线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建的正确性；应用Western blotting的方法检测融合蛋白的表达。结果线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体构建成功，并且该载体能够在OL细胞中表达融合蛋白。结论成功构建线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体，为进一步研究该蛋白的功能和作用机制奠定基础。

关键词：线粒体抗病毒信号蛋白真核表达载体序列分析

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高危型人乳头瘤病毒基因组整合的研究进展

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微生物与感染 2014年第1期9卷 54-60页

作者：叶雪瑞董瑞李立群谷鸿喜商庆龙哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081

高危型人乳头瘤病毒(HPV)基因组整合在宫颈癌等多种肿瘤中被发现。流行病学和实验证据支持高危型HPV基因组整合在宫颈癌等相关肿瘤中起重要作用,其发生可能与宿主染色体不稳定和DNA甲基化相关。近年来发现克隆选择与干扰素通路相关。另... 详细信息

高危型人乳头瘤病毒(HPV)基因组整合在宫颈癌等多种肿瘤中被发现。流行病学和实验证据支持高危型HPV基因组整合在宫颈癌等相关肿瘤中起重要作用,其发生可能与宿主染色体不稳定和DNA甲基化相关。近年来发现克隆选择与干扰素通路相关。另外,整合对宿主细胞基因影响和整合位点检测方法方面的研究也取得了重要进展。本文就高危型HPV基因组整合研究的最新进展作一综述。

关键词：高危型人乳头瘤病毒整合致癌

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