检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学杂志 2007年第12期87卷 851-854页

作者：赵松张伟辉付英梅崔华子迟月明哈尔滨医科大学第一临床医学院普外科 150001 哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学病理学教研室

目的观察黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂对大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应的影响。方法建立大鼠腹主动脉移植模型,移植后大鼠随机分为对照组、霉酚酸酯(MMF)组、黄芪多糖(APS)组和黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂(APS-CPS)组,同时设立假手术组。... 详细信息

目的观察黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂对大鼠腹主动脉移植慢性排斥反应的影响。方法建立大鼠腹主动脉移植模型,移植后大鼠随机分为对照组、霉酚酸酯(MMF)组、黄芪多糖(APS)组和黄芪多糖-冬虫夏草多糖合剂(APS-CPS)组,同时设立假手术组。各组动物在饲养35 d后,观察移植动脉的病理变化,分别用免疫组织化学和胶原纤维染色,观察移植动脉 TGF-β_1的表达、胶原蛋白合成;应用流式细胞术榆测脾脏中 CD4^+、CD8^+阳性 T 淋巴细胞。结果对照组血管内膜明显增厚,平滑肌细胞明显增生,胶原纤维增生明显;TGF-β_1蛋白于内膜平滑肌细胞、单核细胞、动脉内皮细胞等均呈阳性表达。APS-CPS 组血管壁三层结构清晰,内膜未见明显增牛,胶原原纤维稀疏;TGF-β_1表达较对照组明显减弱(P<0.01),且移植前后 CD4^+、CD8^+阳性 T 淋巴细胞百分率、CD4^+/CD8^+比值均无明显变化(P>0.05)。结论 APS-CPS 抑制大鼠动脉移植慢性排斥反应,能下调 TGF-β_1表达,抑制内膜平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成,维持 CD4^+/CD8^+比值的正常。

关键词：黄芪多糖冬虫夏草多糖转化生长因子β1 动脉移植慢性排斥反应

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一个细胞融合实验体系的建立及初步应用

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中国地方病学杂志 2007年第6期26卷 695-698页

作者：程德春钟国才刘彦虹李宇星张凤民凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学附属第二医院美国NIH疫苗研究中心

目的建立一个细胞融合实验体系,观察凝血酶(thrombin,Th)对Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus typeⅠ,HIV-1)包膜糖蛋白(envelope glycoproteins,Env)介导的细胞融合的影响。方法采用携带HIV-1 JRFL株env基因的表达质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与携带HIV-1 tat基因的表达质粒pcTat共转染293T细胞,检测到细胞膜表面Env表达后。将pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat分别按1:2、2:3、1:1、2:1、5:1、10:1共转染293T细胞,然后再与Magic 5A细胞进行融合实验,计数融合细胞数目并确定最适宜的融合条件,建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。在所建立融合体系基础上利用Th处理Env表达细胞,观察对融合作用的影响。结果pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,可建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。Th能够增强细胞融合,且融合细胞数随着Th浓度增高而逐渐增加。Th处理10 min与处理30 min比较,融合增强作用更加显著。结论质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,与Magic5A细胞进行融合实验可得到稳定的细胞-细胞融合实验体系,Th对HIV-1包膜介导的细胞融合有促进作用。

关键词： Ⅰ型人免疫缺陷病毒 HIV-1 包膜糖蛋白细胞融合凝血酶实验体系

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HPV6b L1重组蛋白在大肠埃希菌中的表达与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第1期41卷 11-12,15页

作者：韩聪王燕商庆龙魏兰兰刘希君谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的研究人乳头瘤病毒6b型主要衣壳蛋白L1(HPV6b L1)在原核系统中的表达及鉴定。方法酶切pBluescript M13-HPV6b重组质粒,构建原核表达质粒pBAD-HPV6b L1,并转入大肠埃希菌Top10菌株,经L-Arabinose诱导,表达融合蛋白6×His-L1,用SDS... 详细信息

目的研究人乳头瘤病毒6b型主要衣壳蛋白L1(HPV6b L1)在原核系统中的表达及鉴定。方法酶切pBluescript M13-HPV6b重组质粒,构建原核表达质粒pBAD-HPV6b L1,并转入大肠埃希菌Top10菌株,经L-Arabinose诱导,表达融合蛋白6×His-L1,用SDS-PAGE和蛋白印迹方法进行检测。结果HPV6b L1蛋白在Top10菌中高效表达,其相对分子量60kD,并保有HPV6b L1特异性。结论HPV6b L1蛋白在原核表达系统中获高效表达,为该蛋白质的功能及HPV的基因工程疫苗的研究提供了物质基础。

关键词：人乳头瘤病毒6b型 L1蛋白尖锐湿疣

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pET21b-HPV16E4重组质粒的构建及鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第2期41卷 112-114页

作者：李承刚商庆龙谷鸿喜王燕邵迪哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建HPV16 E4重组表达质粒,以获得HPV16 E4活性蛋白,为进一步研究打基础。方法从宫颈癌组织中提取DNA,用PCR方法扩增HPV16E4 DNA片段,定向克隆到原核表达载体pET21b质粒中,利用菌液PCR方法筛选重组阳性菌株。提取重组质粒,利用酶切... 详细信息

目的构建HPV16 E4重组表达质粒,以获得HPV16 E4活性蛋白,为进一步研究打基础。方法从宫颈癌组织中提取DNA,用PCR方法扩增HPV16E4 DNA片段,定向克隆到原核表达载体pET21b质粒中,利用菌液PCR方法筛选重组阳性菌株。提取重组质粒,利用酶切图谱分析方法和核酸序列测定验证重组质粒pET21b-HPV16E4构建的正确性。结果用PCR方法从宫颈癌组织中扩增出HPV16 E4片段,大小为0.3kb。从PCR筛选的重组菌株中提取重组质粒pET21b-HPV16E4,经单酶切得到5.7kb的片断,HindⅢ和BamHⅠ双酶切得到5.4kb和0.3kb两个片段,并且测序结果与已知序列相符,证实了重组质粒构建的正确性。结论pET21b-HPV16E4重组质粒构建成功。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E4基因 PCR 基因重组

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乙型肝炎病毒X基因的克隆与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第3期41卷 221-223页

作者：苏辉李玉军佟松翟爱霞李小光张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,以进一步研究其基因产物的功能及致病机制。方法以肝炎患者血清DNA为模板,用PCR方法扩增乙型肝炎病毒X基因,构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,经酶切电泳验证重组质粒的正确... 详细信息

目的构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,以进一步研究其基因产物的功能及致病机制。方法以肝炎患者血清DNA为模板,用PCR方法扩增乙型肝炎病毒X基因,构建乙型肝炎病毒X基因原核表达质粒pQE30-HBx,经酶切电泳验证重组质粒的正确性,并对X基因进行测序鉴定。结果PCR结果显示,扩增片断大小约465 bp,与预期相同。重组质粒经酶切电泳判断有目的片段插入,方向正确,经测序证实插入片段是乙型肝炎病毒X基因,编码框无误。结论成功构建乙型肝炎病毒X基因重组质粒pQE30-HBx。

关键词：乙型肝炎病毒 X基因原核表达系统

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HIV-1 ADA株gp140真核表达载体的构建与鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2007年第4期41卷 303-305页

作者：李玉雪王甲业李庆海李妍凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选... 详细信息

目的构建Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)ADA株包膜蛋白(gp140)真核表达载体。方法分别设计包膜蛋白和突变点两端的两对引物,采用重叠延伸剪接法,构建HIV-1ADA株包膜蛋白gp140突变体。获得的PCR产物与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌后筛选阳性克隆进行测序,鉴定正确后经EcoRⅠ和NheⅠ双酶切,与pcDNA6/myc-HisA载体连接,构建包膜蛋白gp140的真核表达载体(pcDNA6-ADAgp140),转化大肠杆菌后筛选阳性克隆,经PCR及酶切进行鉴定。结果获得HIV-1ADAgp140的PCR产物,构建了其真核表达载体pcDNA6-ADAgp140,经转化和筛选获得了重组菌,经PCR、酶切及基因测序结果显示序列正确,为预期目的片段。结论成功构建了ADAgp140包膜蛋白的真核表达载体。此结果为深入研究HIV包膜蛋白生物学特性及进行HIV疫苗研究提供了良好的物质基础。

关键词： Ⅰ型人类免疫缺陷病毒 gp140 重叠延伸剪接法

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Balb/c乳鼠心肌细胞的分离和体外培养方法的优化

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哈尔滨医科大学学报 2007年第4期41卷 324-326页

作者：张中海包琳史巧云李晓波钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳... 详细信息

目的探讨Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养方法,优化出Balb/c乳鼠心肌细胞分离和培养的方法。方法取乳鼠心脏,采用胰酶和胶原酶Ⅱ消化方法分离乳鼠心肌细胞,比较消化次数和消化时间对原代乳鼠心肌细胞培养的影响。结果原代培养的Balb/c乳鼠心肌细胞生长迅速、自行搏动,细胞形态完整,细胞内肌丝、线粒体清晰。分离细胞时消化次数最好控制在不多于6次,每次消化时间不超过20min。2h差速贴壁可以提高心肌细胞纯度,经肌动蛋白鉴定,心肌细胞达94.6%。结论本研究优化了分离和原代培养Blab/c乳鼠心肌细胞的方法。

关键词：心肌细胞 Balb/c乳鼠原代细胞培养

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人乳头瘤病毒16型L1蛋白表达及其单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

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中国地方病学杂志 2007年第1期26卷 98-100页

作者：王燕商庆龙谷鸿喜韩聪邵迪李茉李承刚哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室150081

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌... 详细信息

目的表达并纯化重组人乳头瘤病毒16型（HPV16）L1蛋白，建立分泌抗HPV16 L1单克隆抗体（mAb）的杂交瘤细胞株。方法以基因工程表达HPV16L1蛋白。用Ni—NTA技术进行纯化后免疫BALB／c小鼠，取脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合，经含次黄嘌呤、氨基蝶呤、胸腺嘧啶（HAT）的选择培养基及有限稀释法进行克隆化，用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞，对获得的杂交瘤细胞株染色体进行计数．同时测定细胞培养上清mAb的效价。结果筛选出2株可分泌抗HPV16 L1 mAb的杂交瘤细胞，命名为AE3和AG7，染色体数分别为130条和98条。2株杂交瘤细胞AE3和AG7培养上清的效价分别为1：5120和1：80。结论成功建立了2株可分泌抗HPV 16 L1 mAb的杂交瘤细胞，为进一步研制HPV感染检测试剂盒提供实验基础。

关键词：宫颈肿瘤乳头状瘤病毒,人 L1蛋白抗体,单克隆

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松针油体外抗腺病毒作用研究

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中草药 2007年第7期38卷 1059-1062页

作者：魏凤香商蕾曲章义陈晶高虹王鹏张鸿彦哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081

腺病毒是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一。腺病毒感染人类可引起许多疾病,如急性上、下呼吸道感染,暴发性眼结膜炎,急性出血性膀胱炎,风湿性关节炎,免疫缺损疾病,脑炎,脑膜炎以及婴幼儿胃肠炎等,而其中呼吸道疾病的发病率是... 详细信息

腺病毒是引起人类呼吸道和消化道感染的重要病原之一。腺病毒感染人类可引起许多疾病,如急性上、下呼吸道感染,暴发性眼结膜炎,急性出血性膀胱炎,风湿性关节炎,免疫缺损疾病,脑炎,脑膜炎以及婴幼儿胃肠炎等,而其中呼吸道疾病的发病率是最高的。腺病毒以其型别多、致病范围广而越来越受到关注。在5岁以下儿童的急性呼吸道疾病中,大约5%是由腺病毒引起的,在3岁以下儿童还易引起急性肺炎,腺病毒不仅可以引起致命的肺炎,而且还能留下远期肺部损害。[第一段]

关键词：抗腺病毒作用急性呼吸道疾病急性出血性膀胱炎下呼吸道感染体外松针油风湿性关节炎婴幼儿胃肠炎

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体外癫痫神经元细胞膜显微结构的研究

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南方医科大学学报 2007年第4期27卷 501-504页

作者：沈红王景贺刘利林志国车彦军张帆张凤民白云龙杨富明哈尔滨医科大学一院神经外科四病房黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学精密工程研究所黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学一院麻醉科黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学病原微生物学教研室黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学药理学教研室黑龙江哈尔滨150001

目的利用原子力显微镜观察体外癫痫神经元细胞膜显微结构。方法将培养14d的神经元放入“无镁”细胞外液处理3h后,再重新放回含镁的正常细胞外液培养,利用膜片钳记录神经元的自发性电活动。将“无镁”细胞外液处理3h的神经元定为实验组,... 详细信息

目的利用原子力显微镜观察体外癫痫神经元细胞膜显微结构。方法将培养14d的神经元放入“无镁”细胞外液处理3h后,再重新放回含镁的正常细胞外液培养,利用膜片钳记录神经元的自发性电活动。将“无镁”细胞外液处理3h的神经元定为实验组,将未经“无镁”外液处理的神经元定为对照组。分别在80μm×80μm,2μm×2μm和500nm×500nm扫描范围,对两组神经元细胞膜表面进行扫描,同时测量两组神经元表面相关结构的直径和深度。结果膜片钳提示“无镁”细胞外液处理3h和恢复正常外液14d时,神经元存在自发的癫痫样放电。在扫描范围为80μm×80μm时,两组神经元细胞膜表面光滑;在2μm×2μm时,两组神经元细胞膜表面出现一些小凹;在500nm×500nm时,实验组神经元表面小凹的直径和深度分别为(114.86±9.33)nm和(5.71±0.69)nm,对照组为(116.4±9.13)nm和(5.69±0.71)nm,两组相比无显著性差异(P>0.05)。结论原子力显微镜是进行细胞膜显微结构观察的良好工具;“无镁”外液处理神经元3h,神经元细胞膜显微结构未发生改变。

关键词：原子力显微镜癫痫神经元

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