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流感病毒RNA聚合酶PA亚基重组质粒pQE32-PA-2转化效率的实验研究

齐齐哈尔医学院学报 2003年第2期24卷 121-123页

作者：郭英曲章义哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086

目的　将甲型流感病毒RNA聚合酶PA亚基的基因工程重组质粒pQE3 2 -PA - 2转化入受体菌 ,并优化转化条件 ,以建立其高效、快速的转化体系。方法　以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌 ,研究了氯化钙溶液浓度 ( 0、2 5、5 0、75、10 0、15 0mmol/... 详细信息

目的　将甲型流感病毒RNA聚合酶PA亚基的基因工程重组质粒pQE3 2 -PA - 2转化入受体菌 ,并优化转化条件 ,以建立其高效、快速的转化体系。方法　以大肠杆菌DH5α菌株为受体菌 ,研究了氯化钙溶液浓度 ( 0、2 5、5 0、75、10 0、15 0mmol/L) ,热休克温度 ( 0、3 0、3 7、42、5 0℃ ) ,转化时间 ( 7、15、3 0、45、60、75、90、10 5、12 0min)及转化后的温浴时间 ( 0、0 .5、1、1.5、2hr)对基因工程重组质粒pQE3 2 -PA - 2转化效率的影响。结果　氯化钙溶液浓度及热休克温度对转化效率的影响极为显著 ,转化时间在一定范围内对转化效率有明显的影响 ,而转化后的温浴时间对转化效率的影响不明显。结论　在本实验条件下 ,以 75mmol/L氯化钙制备感受态细胞 ,转化 3 0分钟 ,经 42℃热休克作用 90秒后直接涂平板选择转化子 ,可获得高效。

关键词：流感病毒重组质粒基因工程亚基 RNA 聚合酶 PA PBl PB2

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HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究

HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究

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作者：商庆龙谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室

用IPTG诱导目的工程菌pQE31-HPV16L1／M15(pREP4),对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;用表达的L1蛋白免疫BALB／C小鼠得到抗血清后,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用 IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS-P... 详细信息

用IPTG诱导目的工程菌pQE31-HPV16L1／M15(pREP4),对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot分析;用表达的L1蛋白免疫BALB／C小鼠得到抗血清后,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用 IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS-PAGE结果显示表达产物在57ku处有蛋白条带;Western blot结果证实此条带可与HPV16 L1蛋白的单克隆抗体反应;纯化后的L1蛋白也同样保留免疫特异性;小鼠抗血清可与HPV16L1 VLP(病毒样颗粒)发生特异性反应,证实重组表达的L1蛋白具有免疫原性。本实验表明HPV16 L1蛋白在工程菌 M15(pREP4)中高效表达,为研制HPV16预防性基因工程疫苗和感染的诊断试剂提供了物质基础和技术方法。

关键词：人乳头瘤病毒16型 L1蛋白表达免疫原性

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16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达

16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达

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作者：魏兰兰谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室

为了构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒,并使其在昆虫细胞中获得高效表达。首先构建了2株重组杆状病毒转移质粒,分别携带人乳头瘤病毒晚期基因L1及L1和L2,再用线性化的杆状病毒DNA与该重组杆状病毒转移质粒共转染sf9昆虫细胞进行同源重组... 详细信息

为了构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒,并使其在昆虫细胞中获得高效表达。首先构建了2株重组杆状病毒转移质粒,分别携带人乳头瘤病毒晚期基因L1及L1和L2,再用线性化的杆状病毒DNA与该重组杆状病毒转移质粒共转染sf9昆虫细胞进行同源重组,获得2株重组杆状病毒。经鉴定该重组中有目的基因存在且可表达所编码的L1和L2晚期蛋白。结果表明HPV16型晚期蛋白在昆虫细胞中获得成功表达,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研制和诊断试剂的研究开发奠定了基础。

关键词：人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒重组杆状病毒

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冠状病毒及其基因表达

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哈尔滨医科大学学报 2003年第4期37卷 368-370页

作者：曲章义侯咏刘佳杨力明哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

冠状病毒是一类仅感染人和动物的病毒 ,具有非常典型的形态特征。由于SARS(severeacuterespiratorysyndrome)今春的暴发及病原的鉴定 ,使得原本不太受重视的冠状病毒引起世人的极大关注[1 ,2 ] 。本文就冠状病毒的概况和基因表达情况作... 详细信息

冠状病毒是一类仅感染人和动物的病毒 ,具有非常典型的形态特征。由于SARS(severeacuterespiratorysyndrome)今春的暴发及病原的鉴定 ,使得原本不太受重视的冠状病毒引起世人的极大关注[1 ,2 ] 。本文就冠状病毒的概况和基因表达情况作一简述。1　冠状病毒概况冠状病毒最先是 1937年从鸡身上分离出来的 ,以后相继从牛、猫、狗、猪、鼠等动物身上分离到该病毒[1 ] 。 196 5年 ,Tyrrell和Bynoe等用人胚气管培养方法 ,从普通感冒病人鼻洗液中分离出 1株病毒 ,命名为B814病毒。随后 ,Hamre等用人胚肾细胞分离到类似病毒 ,代表株命名为 2 2

关键词：冠状病毒基因表达 SARS 基因组结构功能

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小鼠回肠黏膜固有层淋巴细胞在黏膜免疫应答中的形态学观察

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哈尔滨医科大学学报 2003年第2期37卷 135-136,F003页

作者：李志春谢遵江崔宏波刘颖贺业春哈尔滨医科大学解剖学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨回肠黏膜固有层淋巴细胞在抗原诱导下的黏膜免疫应答中的形态特征。方法　采用光镜和电镜方法 ,观察BALB/c小鼠灌服伤寒杆菌后回肠黏膜固有层淋巴细胞的组织学特征。结果　光镜下黏膜固有层可见形态各异的淋巴细胞。电镜下可... 详细信息

目的　探讨回肠黏膜固有层淋巴细胞在抗原诱导下的黏膜免疫应答中的形态特征。方法　采用光镜和电镜方法 ,观察BALB/c小鼠灌服伤寒杆菌后回肠黏膜固有层淋巴细胞的组织学特征。结果　光镜下黏膜固有层可见形态各异的淋巴细胞。电镜下可见大量胞浆丰富而浅淡的淋巴细胞 ,有些淋巴细胞的突起穿越上皮的基膜 ,并可见大量浆细胞或浆细胞前体细胞 ,内质网丰富 ,可见其扩张形成囊泡和Russell小体。结论　伤寒杆菌可诱导小鼠回肠黏膜固有层淋巴细胞的免疫应答。

关键词：小鼠回肠黏膜固有层淋巴细胞免疫应答

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HPV18 L1基因重组DNA构建及其免疫小鼠体内特异抗体的测定

HPV18 L1基因重组DNA构建及其免疫小鼠体内特异抗体的测定

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作者：贾士东谷鸿喜王文阁钟照华郭淑元凌虹贺福初哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室中国军事医学科学院哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨医科大学微生物学教研室中国军事医学科学院

目的人类乳头瘤病毒18型(HIPV18)感染与宫颈癌的发生高度相关。其晚期基因L1结构蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原。利用HPV Ll基因重组质粒进行DNA疫苗的初步免疫学实验研究。方法从 HPV18-pBR322质粒中扩增HPV18 L1基因,测序证... 详细信息

目的人类乳头瘤病毒18型(HIPV18)感染与宫颈癌的发生高度相关。其晚期基因L1结构蛋白是刺激机体产生中和抗体的主要抗原。利用HPV Ll基因重组质粒进行DNA疫苗的初步免疫学实验研究。方法从 HPV18-pBR322质粒中扩增HPV18 L1基因,测序证明扩增片段的可靠性,构建了两个真核表达重组质粒HPV18 L1- pcDNA3和HPV18L1-peEP4。将提纯的质粒DNA直接免疫小鼠,用HPV18 L1抗原经ELISA检测小鼠血清相应抗体。结果 HPV18L1-pcDNA3和HPV18L1-peEP4质粒DNA均能在小鼠体内表达并诱导产生HPV18特异性抗体。结论 HPV18L1重组质DNA直接注射小鼠可以刺激机体产生抗体。

关键词：人乳头瘤病毒18型晚期基因L1 基因表达

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16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

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作者：魏兰兰哈尔滨医科大学微生物学教研室

16型人乳头瘤病毒(HPVl6)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了疫苗的研究进展。目前通过分子生物学方法在体外表达的HPVl6病毒样颗粒(VLP)成为疫苗研究的热点。研究表明VLP 可诱导机体产生抗病毒攻击的细... 详细信息

16型人乳头瘤病毒(HPVl6)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了疫苗的研究进展。目前通过分子生物学方法在体外表达的HPVl6病毒样颗粒(VLP)成为疫苗研究的热点。研究表明VLP 可诱导机体产生抗病毒攻击的细胞免疫和体液免疫应答,从而为基因工程亚单位疫苗的研制提供了科学依据。

关键词： 16型人乳头瘤病毒疫苗病毒样颗粒免疫应答

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流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

流感病毒RNA聚合酶的分离与纯化

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黑龙江省免疫学会成立十周年学术会议

作者：曲章义赵育莹崔洪波石浜明谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150086

本文用不同介质组合的分步密度梯度超速离心法成功地将3P与RNA及NP分离开来,获得了较纯的3P蛋白,为进一步研究流感病毒RNpol的结构和功能奠定了基础.

关键词：流感病毒聚合酶分离纯化

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HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究

HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究

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黑龙江省免疫学会成立十周年学术会议

作者：商庆龙谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150086

本文用IPTG诱导目的工程菌pQE31-HPV16L1/M15(pREP4),对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性.利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白.SDS-PAG... 详细信息

本文用IPTG诱导目的工程菌pQE31-HPV16L1/M15(pREP4),对表达产物进行SDS-PAGE和Westernblot分析;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性.利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白.SDS-PAGE结果显示表达产物在57ku处有蛋白条带;Westernblot结果证实此条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体反应;纯化后的L1蛋白也同样保留免疫特异性;小鼠抗血清可与HPV16L1VLP(病毒样颗粒)发生特异性反应,证实重组表达的L1蛋白具有免疫原性.本实验表明HPV16L1蛋白在工程菌M15(pREP4)中高效表达,为研制HPV16预防性基因工程疫苗和感染的诊断试剂提供了物质基础和技术方法.

关键词：人乳头瘤病毒 L1蛋白免疫原性大肠杆菌

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16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

16型人乳头瘤病毒疫苗的研究进展

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黑龙江省免疫学会成立十周年学术会议

作者：魏兰兰哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150086

16型人乳头瘤病毒(HPV16)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了疫苗的研究进展.目前通过分子生物学方法在体外表达的HPV16病毒样颗粒(VLP)成为疫苗研究的热点.研究表明VLP可诱导机体产生抗病毒攻击的细胞免... 详细信息

16型人乳头瘤病毒(HPV16)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了疫苗的研究进展.目前通过分子生物学方法在体外表达的HPV16病毒样颗粒(VLP)成为疫苗研究的热点.研究表明VLP可诱导机体产生抗病毒攻击的细胞免疫和体液免疫应答,从而为基因工程亚单位疫苗的研制提供了科学依据.

关键词：人乳头瘤病毒肿瘤疫苗病毒样颗粒免疫应答抗病毒

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