检索结果-内蒙古大学图书馆

中国公共卫生 2001年第9期17卷 775-776页

作者：郭淑元郭彩玲庄敏谷鸿喜张凤民赵德超哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学第二附属医院

目的　用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法　对柯萨奇B病毒 ( 1～ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果　经... 详细信息

目的　用定位检测细胞或组织中柯萨奇B病RNA的原位RT PCR方法 (直接法 )。方法　对柯萨奇B病毒 ( 1～ 6型 )感染HeLa细胞 ,经核酸酶 (DNase和RNase)处理后的病毒感染HeLa细胞以及非感染的HeLa细胞进行RT PCR和原位RT RCR检测。结果　经原位RT PCR扩增后 ,病毒感染的HeLa细胞呈蓝黑阳性信号 ;并且这种阳性信号经RNaseA作用而消失 ,却不受DNase作用的影响 ;而非感染的HeLa细胞则不着色 ,其显示的结果与RT PCR的结果一致。结论　原位RT PCR法可特异地检测柯萨奇B病毒感染HeLa细胞中的病毒RNA ,是一种特异和敏感的定位检测方法 ,可应用于研究该病毒的持续性感染及其与克山病等相关疾病的关系。

关键词：柯萨奇B病毒原位RT-PCR HeLa细胞

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香芪口服液增强非特异免疫和体液免疫作用的实验研究

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中草药 2001年第10期32卷 908-910页

作者：曲章义郭彩玲凌秋李迪谷鸿喜郑树浙江大学肿瘤学研究所浙江杭州310009 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　研究中药制剂香芪口服液对机体非特异免疫作用和体液免疫作用的影响。方法　用碳粒廓清法测定单核巨噬细胞的吞噬功能 ,从而研究对非特异性免疫功能的影响 ;用溶血空斑形成细胞测定法研究对体液免疫功能的影响。结果　香芪口服液... 详细信息

目的　研究中药制剂香芪口服液对机体非特异免疫作用和体液免疫作用的影响。方法　用碳粒廓清法测定单核巨噬细胞的吞噬功能 ,从而研究对非特异性免疫功能的影响 ;用溶血空斑形成细胞测定法研究对体液免疫功能的影响。结果　香芪口服液可有效地纠正免疫功能低下 ,显著提高巨噬细胞的吞噬功能以及使抗体生成细胞数增多 ,使两者恢复至正常水平。

关键词：香芪口服液香菇多糖免疫功能低下实验非特异免疫体液免疫

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人乳头瘤病毒16型预防性疫苗的研究进展

引用

国外医学（微生物学分册） 2001年第5期24卷 10-12,34页

作者：魏兰兰谷鸿喜韩立群哈尔滨医科大学微生物学教研室

人乳头瘤病毒16型(HPV16)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了预防性疫苗的研究进展。目前通过分子生物学方法在体外表达HPV16病毒样颗粒(VLPs)成为预防性疫苗研究的热点。研究表明VLPs可诱导机体产生抗病... 详细信息

人乳头瘤病毒16型(HPV16)与宫颈癌的发生关系密切,由于该病毒尚不能在体外有效培养,而限制了预防性疫苗的研究进展。目前通过分子生物学方法在体外表达HPV16病毒样颗粒(VLPs)成为预防性疫苗研究的热点。研究表明VLPs可诱导机体产生抗病毒攻击的细胞免疫和体液免疫应答,从而为预防性基因工程亚单位疫苗的研究提供了重要科学依据。

关键词：人乳头瘤病毒16型预防性疫苗核酸载体疫苗部颈癌

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HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究

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微生物学杂志 2001年第4期21卷 15-16页

作者：商庆龙谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

用IPTG诱导目的工程菌 pQE31 HPV16L1/M 15 (pREP4) ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblot分析 ;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后 ,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS ... 详细信息

用IPTG诱导目的工程菌 pQE31 HPV16L1/M 15 (pREP4) ,对表达产物进行SDS PAGE和Westernblot分析 ;用表达的L1蛋白免疫BALB/C小鼠得到抗血清后 ,利用真核源性的VLP粗提物验证小鼠抗血清的特异性。利用IMAC金属亲和层析柱纯化L1蛋白。SDS PAGE结果显示表达产物在约 5 7ku处有蛋白条带 ;Westernblot结果证实此条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体反应 ;纯化后的L1蛋白也同样保留免疫特异性 ;小鼠抗血清可与HPV16L1VLP(病毒样颗粒 )发生特异性反应 ,证实重组表达的L1蛋白具有免疫原性。本实验表明HPV16L1蛋白在工程菌M15 (pREP4)中高效表达。

关键词：人乳头瘤病毒16型 L1蛋白表达免疫原性 HPH16 纯化

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人乳头瘤病毒16型结构蛋白在昆虫细胞中的表达

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中华实验和临床病毒学杂志 2001年第4期15卷 309-313页

作者：魏兰兰韩立群任皎田厚文骆卫锋陆振华谷鸿喜阮力中国预防医学科学院病毒学研究所遗传免疫研究室北京100052 哈尔滨医科大学微生物教研室

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白 ,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础。方法　将目的基因克隆至杆状病毒转移载体 ,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9... 详细信息

目的　在昆虫细胞中表达人乳头瘤病毒 16型 (HPV16 )结构蛋白 ,为HPV16型预防性基因工程亚单位疫苗的研究以及诊断试剂的研制奠定基础。方法　将目的基因克隆至杆状病毒转移载体 ,该重组质粒DNA与线性化的杆状病毒DNA共转染昆虫细胞Sf 9,通过同源重组获得重组杆状病毒 ,用SDS PAGE凝胶电泳和Westernblot法检测重组子在昆虫细胞中表达的目的蛋白。结果　获得了稳定高效表达HPV16结构蛋白的重组杆状病毒 ,L1和L2蛋白的相对分子质量分别为 5 70 0 0和970 0 0 ,L1蛋白的表达产量约占昆虫细胞总体蛋白的 2 5 %～ 30 %。结论　人乳头瘤病毒

关键词：人乳头状瘤病毒病毒蛋白质类病毒体疫苗

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风疹病毒毒株的分离鉴定及其E1基因部分序列分析

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微生物学杂志 2001年第4期21卷 26-27页

作者：王燕姜昕谷鸿喜郭彩玲哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

利用逆转录巢式PCR技术检测 6 1例风疹高发人群的血液标本 ,经细胞培养技术从RVRNA阳性标本中分离风疹病毒株 ,应用细胞病变、血凝试验、电镜观察及PCR扩增等实验证实其为风疹病毒 ,命名为HRB株。同时还对该分离株的E1基因部分片段进行... 详细信息

利用逆转录巢式PCR技术检测 6 1例风疹高发人群的血液标本 ,经细胞培养技术从RVRNA阳性标本中分离风疹病毒株 ,应用细胞病变、血凝试验、电镜观察及PCR扩增等实验证实其为风疹病毒 ,命名为HRB株。同时还对该分离株的E1基因部分片段进行序列分析并与其它型别基因进行比较 ,结果显示 ,此分离株与中国疫苗株(BRDⅡ )及另外 2株香港分离株均不在同一分支 ,而是位于由 2 0世纪 6

关键词：风疹病毒分离鉴定 E1基因序列分析

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16型人乳头瘤病毒衣壳蛋白在真核细胞中的表达

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微生物学杂志 2001年第4期21卷 17-18页

作者：魏兰兰谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

为了构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒 ,并使其在昆虫细胞中获得高效表达。首先构建 2株重组杆状病毒转移质粒 ,分别携带人乳头瘤病毒晚期基因L1及L1和L2 ,再用线性化的杆状病毒DNA与该重组杆状病毒转移质粒共转染sf9昆虫细胞进行同源重... 详细信息

为了构建HPV16型晚期蛋白重组杆状病毒 ,并使其在昆虫细胞中获得高效表达。首先构建 2株重组杆状病毒转移质粒 ,分别携带人乳头瘤病毒晚期基因L1及L1和L2 ,再用线性化的杆状病毒DNA与该重组杆状病毒转移质粒共转染sf9昆虫细胞进行同源重组 ,获得 2株重组杆状病毒。经鉴定该重组病毒中有目的基因存在且可表达所编码的L1或L2 晚期蛋白。结果表明HPV16型晚期蛋白在昆虫细胞中获得成功表达。

关键词：人乳头瘤病毒16型病毒样颗粒重组杆状病毒衣壳蛋白真核细胞表达

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HPV16 L1蛋白在原核表达系统中的表达与纯化

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哈尔滨医科大学学报 2001年第4期35卷 235-237页

作者：包广宇林道虹庄敏隋丽华王静李迪谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第三医院黑龙江哈尔滨150040

目的　建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法　构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果　HPV16L1蛋白在原核... 详细信息

目的　建立HPV16L1蛋白原核表达系统的纯化方法 ,纯化目的蛋白。方法　构建pGEX4T HPV16L1表达质粒。在大肠杆菌BL2 1表达系统中表达 ,经过包涵体提取 ,8mol/L尿素溶解 ,分级透析除去尿素 ,亲和层析进行提纯。结果　HPV16L1蛋白在原核表达系统以不溶性包涵体形式存在 ,通过本方法可以获得纯化的蛋白。结论　建立了一套纯化HPV16L1蛋白的方法。

关键词：人乳头瘤病毒16型原核表达系统晚期蛋白纯化 HPV16L1蛋白宫颈癌

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pQE31-HPV16 L1重组质粒的构建及鉴定

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哈尔滨医科大学学报 2001年第1期35卷 7-9页

作者：商庆龙隋丽华李迪王晶钟照华谷鸿喜哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学附属第三医院妇科黑龙江哈尔滨150040

目的　构建重组原核表达质粒以获得HPV16L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV16基因工程疫苗打下基础。方法　以克隆质粒pCR2 .1-HPV16L1为模板 ,用PCR方法扩增HPV16L1DNA片段 ,利用pQE31质粒载体构建pQE31 HPV16L1重组质粒 ,用酶切电泳验证重... 详细信息

目的　构建重组原核表达质粒以获得HPV16L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV16基因工程疫苗打下基础。方法　以克隆质粒pCR2 .1-HPV16L1为模板 ,用PCR方法扩增HPV16L1DNA片段 ,利用pQE31质粒载体构建pQE31 HPV16L1重组质粒 ,用酶切电泳验证重组结果的正确性 ,测序检查质粒重组后序列情况。结果　PCR结果显示扩增片断大小约 1.5Kb ,与预期相同。重组质粒酶切后显示其大小约 5 .0Kb。大小及酶切图谱与预期相同。经测序发现插入片段两端序列无改变。结论　pQE31 HPV16L1质粒构建成功。

关键词：人乳头瘤病毒16型原核表达系统 pQE31-HPV16L1

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LAK细胞及活化胚胎胸腺细胞对脑胶质瘤细胞的体外作用

引用

哈尔滨医科大学学报 2001年第4期35卷 245-248页

作者：王启弘杨富明周志红郭彩玲林道红高光强关秀茹哈尔滨医科大学附属第一医院黑龙江哈尔滨150001 哈尔滨医科大学附属第二医院黑龙江哈尔滨150086 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江哈尔滨150086

目的　探讨体外培养后人胚胎胸腺细胞 (ETC)表面抗原的转变及进行移植的时机 ,比较不同源LAK细胞、活化ETC联合与TJ90 5细胞的体外作用效果。方法　对不同处理的人胚胎胸腺悬液培养前后观察 ,测定细胞表面抗原 ;进行LAK细胞、活化ETC体... 详细信息

目的　探讨体外培养后人胚胎胸腺细胞 (ETC)表面抗原的转变及进行移植的时机 ,比较不同源LAK细胞、活化ETC联合与TJ90 5细胞的体外作用效果。方法　对不同处理的人胚胎胸腺悬液培养前后观察 ,测定细胞表面抗原 ;进行LAK细胞、活化ETC体外杀瘤活性比较。结果　应用特殊培养液培养 ,可以使人胚胎胸腺上皮细胞生存2 8天 ,分离后悬液比混悬液细胞表面抗原早期达稳定 (CD4/CD8=2 .2 6 ) ;胸腺LAK细胞对TJ90 5细胞的杀伤作用与脾LAK细胞无显著性差异。结论　活化ETC在体外对肿瘤细胞无抑制作用 ,不同源LAK细胞和活化ETC联合对TJ90

关键词：淋巴因子活化杀伤细胞胚胎胸腺细胞体外培养表面抗原脑胶质瘤 ETC LAK细胞

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