检索结果-内蒙古大学图书馆

乙型肝炎病毒拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系建立及鉴定

国际免疫学杂志 2019年第4期42卷 347-352页

作者：徐维祯谷鸿喜郝美丽马延秀李皓乐汪颖楠哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学细胞生物学教研室 150081 杭州师范大学医学院病原和免疫学教研室 311121 加州大学圣地亚哥分校圣地亚哥92092

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联... 详细信息

目的建立乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)拉米夫定YVDD耐药株及YMDD野生株稳定表达细胞系。方法利用携带有HBV拉米夫定YVDD耐药株或YMDD野生株的全基因真核表达重组质粒分别稳定转染HepG2细胞,G418筛选后建立稳定表达细胞株;酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测HBV抗原表达情况;FT-PCR检测HBV DNA载量;FH-PCR-MC验证细胞株拉米夫定耐药变异类型;测序分析细胞株内HBV的基因变异情况。结果成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系;第1、10、30代细胞株HBsAg和HBeAg表达稳定;第30代细胞内及上清中HBV DNA载量高于10^4copies/mL;耐药株变异类型为YVDD;测序显示,细胞基因组携带的HBV耐药株基因存在A1762T/G1764A/rtM204V/rtL180M/rtV173L的多位点联合变异。结论成功建立HBV拉米夫定YVDD耐药株和YMDD野生株稳定表达细胞系,即HepG2-HBV/CV和HepG2-HBV/CM细胞,为筛选抗HBV拉米夫定耐药株的有效药物提供了理想的细胞模型。

关键词：乙型肝炎病毒 YMDD YVDD 稳定表达细胞系

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肠道菌群与类风湿关节炎关系的研究进展

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国际免疫学杂志 2019年第5期42卷 536-539页

作者：王婕琳石阳倩张凤民房勇哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室 150081 哈尔滨医科大学中俄感染与免疫研究所 150081 哈尔滨医科大学伍连德研究所 150081

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生和外周关节对称性、侵蚀性关节炎为主要特征的慢性炎症性自身免疫病.已有研究证实RA患者中肠道菌群结构和数量都发生了相应变化.其中益生菌的研究备受关注,益生菌可以调节免疫系统功... 详细信息

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是以滑膜增生和外周关节对称性、侵蚀性关节炎为主要特征的慢性炎症性自身免疫病.已有研究证实RA患者中肠道菌群结构和数量都发生了相应变化.其中益生菌的研究备受关注,益生菌可以调节免疫系统功能,调整菌群结构达到预防或者治疗RA的效果.现通过分析RA患者肠道菌群结构和数量变化来概述肠道菌群在RA发病机制中的作用以及应用益生菌的治疗策略.

关键词：益生菌类风湿关节炎免疫治疗

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嗜热菌Anoxybacillus ***5菌株产β-葡萄糖苷酶培养基优化及产酶条件研究

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哈尔滨医科大学学报 2020年第6期54卷 575-579,593页

作者：周亚南胡玉婕应长青李旭颖哈尔滨医科大学公共卫生学院卫生微生物学教研室黑龙江哈尔滨150081 平顶山市疾病预防控制中心检验科河南平顶山467000 哈尔滨市疾病预防控制中心传染病预防控制所黑龙江哈尔滨150010

目的对产β-葡萄糖苷酶的嗜热菌Anoxybacillus ***5菌株进行产酶培养基优化及产酶条件研究,为下一步菌株的诱变育种提供基础。方法应用常规方法液体培养菌株,用七叶苷平板初筛和DNS(3,5-二硝基水杨酸)法复筛选择产β-葡萄糖苷酶能力较... 详细信息

目的对产β-葡萄糖苷酶的嗜热菌Anoxybacillus ***5菌株进行产酶培养基优化及产酶条件研究,为下一步菌株的诱变育种提供基础。方法应用常规方法液体培养菌株,用七叶苷平板初筛和DNS(3,5-二硝基水杨酸)法复筛选择产β-葡萄糖苷酶能力较高的菌株;单因素筛选培养基最佳的碳源、氮源、Ca^(2+)浓度、Mg^(2+)浓度,对单因素筛选得到的最佳碳源、最佳氮源、Ca^(2+)和Mg2+的三个较佳浓度进行四因素三水平多因素的正交实验优化产酶培养基,并筛选出培养条件的最佳培养温度、培养基pH值。结果嗜热菌Anoxybacillus sp.均有产β-葡萄糖苷酶能力,其中DL5产β-葡萄糖苷酶活力最高;培养基单因素筛选显示最佳碳源是乳糖,最佳氮源是蛋白胨+酵母膏,最佳Ca^(2+)浓度是0.060%,最佳Mg^(2+)浓度是0.005%,差异均有统计学意义(P<0.05);多因素培养基优化结果显示:碳源0.2%、氮源0.2%、Mg2+浓度0.005%、Ca^(2+)浓度0.040%为最佳的培养基成分组合。产酶条件筛选结果显示,DL5菌株产β-葡萄糖苷酶的最佳培养温度是55℃,培养基最佳pH值是7.0,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论培养基及培养条件的优化能提高嗜热菌Anoxybacillus ***5产β-葡萄糖苷酶的能力,Ca^(2+)离子、Mg^(2+)离子对菌株产β-葡萄糖苷酶有促进作用。

关键词：嗜热菌 β-葡萄糖苷酶培养基优化产酶条件

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病原生物学实验教学改革实践

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基础医学教育 2019年第7期21卷 536-537页

作者：钱钧朱梅李爱梅哈尔滨医科大学基础医学院微生物学教研室哈尔滨150081 黑龙江省医院南岗院区重症医学科

病原生物学实验是医学微生物学理论与实践相结合的纽带,但传统的实验教学内容多为验证性实验,没有很好地调动学生学习的主动性,实验教学改革势在必行。文章初步探索在基础本硕连读学生中开展系统性实验中增加临床案例讨论分析及学生自... 详细信息

病原生物学实验是医学微生物学理论与实践相结合的纽带,但传统的实验教学内容多为验证性实验,没有很好地调动学生学习的主动性,实验教学改革势在必行。文章初步探索在基础本硕连读学生中开展系统性实验中增加临床案例讨论分析及学生自主设计性实验内容,提高了学生的学习兴趣及科学思维能力,锻炼了学生的实践能力,取得较好效果。

关键词：病原生物学教学改革实验教学

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HIV-1 06044包膜糖蛋白gp140三聚体免疫原性分析

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国际免疫学杂志 2019年第1期42卷 7-11页

作者：许颖出王甲业李妍卢亚楠袁丽庄敏凌虹哈尔滨医科大学微生物学教研室、黑龙江感染与免疫重点实验室、黑龙江普通高校病原生物学重点实验室 150081

目的研究来源于一个Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type-1,HIV-1)慢性感染的广谱中和者包膜蛋白的免疫原性。方法用HIV-1 06044包膜三聚体gp140T蛋白分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔。采用酶联免疫吸附试验(enzyme... 详细信息

目的研究来源于一个Ⅰ型人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type-1,HIV-1)慢性感染的广谱中和者包膜蛋白的免疫原性。方法用HIV-1 06044包膜三聚体gp140T蛋白分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔。采用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测免疫兔血清特异性结合抗体滴度,用TZM-bl假病毒中和实验检测兔血清特异性中和抗体滴度及免疫小鼠脾细胞分泌细胞因子。结果家兔免疫血清呈较好的结合广度,与SF162 gp140、JRCSF gp120、Bal gp120广泛结合,末次免疫后终点滴度分别为83176.38±1.35、186208.71±2.57。兔血清在第三次免疫后即有较高滴度的特异性中和抗体,第3、4、5、6次免疫后两周,对SF162假病毒的中和抗体滴度为分别177、183、265和252。在末次免疫后14天的小鼠脾细胞中,白细胞介素(interleukin,IL)-2、IL-4、IL-6、IL-13,干扰素(interferon,IFN)-γ在免疫组中显著高表达(P值分别为0.0015、0.0009、0.0117、0.0001、0.0051)。结论06044 gp140T三聚体包膜蛋白有较好的免疫原性,并能较早地诱导较高水平的特异性中和抗体。

关键词：人类免疫缺陷病毒Ⅰ型 gp140 三聚体特异性抗体

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应用CRISPR/Cas9靶向细胞内整合的HPV、基因治疗宫颈癌

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国际遗传学杂志 2020年第2期 69-70-71-72-73-74-75页

作者：陈思佳穆宇松张林月钟照华哈尔滨医科大学微生物学教研室及伍连德研究所

目的通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的E6、E7致癌基因,探索预防和治疗宫颈癌的新方法。方法以SiHa细胞系为研究对象,设计靶向其内整合的HPV16E6和E7基因的小引导RNA(small guide RNA,sgRNA)... 详细信息

目的通过突变整合于宿主细胞中的人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)16型的E6、E7致癌基因,探索预防和治疗宫颈癌的新方法。方法以SiHa细胞系为研究对象,设计靶向其内整合的HPV16E6和E7基因的小引导RNA(small guide RNA,sgRNA),将其克隆入CRISPR/Cas9质粒,并应用其将E6、E7基因敲除,随后应用错位酶切法和克隆测序检测突变效果,并用细胞迁移与侵袭实验检测细胞的侵袭力。结果设计的sgRNA被克隆入CRISPR/Cas9质粒,经测序克隆正确。该质粒转染SiHa细胞后,可以引发靶点DNA的突变,致使E6和E7基因密码子改变,无法正确表达。E6、E7突变后SiHa细胞侵袭及增殖能力下降(t检验,pCas9组与psgE6-1-1-Cas9组相比,P＝0.0006; pCas9组与psgE7-1-2-Cas9组相比,P＝0.0007),促进肿瘤抑制因子P53的表达恢复,细胞的恶性度降低。

关键词： CRISPR/Cas9 HPVE6 HPVE7 宫颈癌治疗

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儿童支气管哮喘患者呼出气中一氧化氮浓度变化与激素治疗效果及免疫学效应评价

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国际免疫学杂志 2019年第6期42卷 566-570页

作者：宋瑜欣于晓华纪羽婷陈宏于佳胡继红孙桂云哈尔滨市儿童医院变态反应科 150010 哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 黑龙江省中医药大学附属第一医院儿科哈尔滨150040

目的通过分析支气管哮喘儿童呼出气中一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)浓度变化,评价激素治疗效果及免疫学效应.方法选择支气管哮喘儿童患者192例,其中男122例,女70例.根据临床症状,分别给予中低剂量糖皮质激素吸入治疗... 详细信息

目的通过分析支气管哮喘儿童呼出气中一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,FeNO)浓度变化,评价激素治疗效果及免疫学效应.方法选择支气管哮喘儿童患者192例,其中男122例,女70例.根据临床症状,分别给予中低剂量糖皮质激素吸入治疗,分为治疗15天组、30天组和60天组,检查在激素治疗前后患儿FeNO浓度的变化、肺功能水平及外周血嗜酸性粒细胞(eosinophil,EO)的改变.结果与治疗前相比,激素治疗15天组和30天组患儿FeNO浓度明显减少[(30.37±19.8)ppb比(39.94±23.60)ppb,(22.3±15.18)ppb比(28.17±24.06)ppb,P值均<0.05],其中激素治疗30天组患儿肺功能明显改善,患者最大呼气峰流速(peak expiratory flow,PEF)增加[(101.38±16.75)L/S比(98.01±16.01)L/S,P<0.05];此外,激素治疗15天组患儿外周血嗜酸性粒细胞百分比(EO%)显著减少[(5.94±3.43)%比(7.33±5.46)%,P<0.05].结论支气管哮喘患儿FeNO的浓度检测可以反映患儿外周血嗜酸性粒细胞数量变化和炎症程度,FeNO的浓度检测联合肺功能测定是一种简便易行的监测激素用药效果的方法.

关键词：支气管哮喘激素呼出气一氧化氮嗜酸性粒细胞

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HPV DNA/RNA状态与头颈癌的研究进展

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国际遗传学杂志 2018年第1期41卷 61-65页

作者：楼辉煌魏兰兰哈尔滨医科大学微生物学教研室

头颈癌(head and neck cancer,HNC)是世界上第6大常见肿瘤,近年来发病率逐年递增。头颈癌致病因素——烟草、酒精和病毒感染受到了人们的广泛关注,其中人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)引起的头颈癌发病率逐年增加,这使HPV阳性... 详细信息

头颈癌(head and neck cancer,HNC)是世界上第6大常见肿瘤,近年来发病率逐年递增。头颈癌致病因素——烟草、酒精和病毒感染受到了人们的广泛关注,其中人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)引起的头颈癌发病率逐年增加,这使HPV阳性头颈癌成为研究的热点。本文综述了HPV DNA/RNA在头颈癌中的存在状态,以及HPV DNA/RNA状态对头颈癌生物学特征的影响。

关键词：头颈癌人乳头瘤病毒 HPV DNA/RNA状态生物学特征淋巴结转移

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PINK1/parkin通路调控线粒体自噬机制的研究进展

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微生物与感染 2018年第2期13卷 102-106页

作者：郎秀娟王燕哈尔滨医科大学微生物学教研室哈尔滨150081

线粒体自噬指细胞通过自噬机制选择性除去损伤或多余的线粒体。真核生物通过线粒体自噬调控线粒体质量,维持供能细胞器的功能。大量研究表明,帕金森病相关基因PINK1和parkin可通过线粒体自噬参与并维持线粒体功能。PINK1与parkin能协同... 详细信息

线粒体自噬指细胞通过自噬机制选择性除去损伤或多余的线粒体。真核生物通过线粒体自噬调控线粒体质量,维持供能细胞器的功能。大量研究表明,帕金森病相关基因PINK1和parkin可通过线粒体自噬参与并维持线粒体功能。PINK1与parkin能协同特异性识别损伤的线粒体,PINK1作为线粒体质量调控的探测器被活化,此过程中泛素化酶和去泛素化酶对维持parkin活性及线粒体自噬的效率有重要作用。本文主要总结PINK1/parkin通路在线粒体自噬中的功能与作用。

关键词： PINK1 Parkin 线粒体自噬

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人乳头瘤病毒16型E7蛋白的表达、纯化及抗血清制备

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国际免疫学杂志 2018年第5期41卷 514-518页

作者：颜学勤王莹莹嵩钰佳王鑫陈思佳魏兰兰钟照华商庆龙哈尔滨医科大学微生物学教研室 150081

目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPv16E7蛋白,制备小鼠抗HPV16E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16E7基因,构建人pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十... 详细信息

目的建立人乳头瘤病毒(human papillomavims,HPV)16型E7蛋白的原核表达系统,表达HPv16E7蛋白,制备小鼠抗HPV16E7血清。方法采用PCR方法扩增HPV16E7基因,构建人pET21b质粒,重组表达载体经鉴定后转化大肠埃希菌BL21(DE3)。诱导表达后经十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate,SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)和westemblot鉴定表达产物。提取包涵体进行变性复性处理后纯化,纯化后的可溶性蛋白免疫Balb/C小鼠,检测小鼠体内γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)水平、CD4/CD8比值和抗血清滴度变化。结果PcR扩增片段为0.3Kb,酶切和序列测定证实重组质粒构建正确。SDS—PAGE在11KD处出现蛋白条带。蛋白表达以包涵体为主。免疫后小鼠抗体效价升高,CD4/CD8比值无升高,IFN-γ无反应。结论成功制备可溶性HPV16E7蛋白和小鼠抗HPvl6E7高效价抗血清。

关键词：人乳头瘤病毒16型 E7蛋白抗血清

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