检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医科学 2008年第10期38卷 825-829页

作者：陈华美曹三杰文心田肖国生四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室

根据胸膜肺炎放线杆菌（APP）外膜蛋白OmlA序列设计种特异性引物，根据血清型1、2、6、7荚膜多糖（CPS）序列分别设计型特异性引物，通过优化PCR扩增条件，分别扩增出OralA（952bp）、CPS1（630bp）、CPS2（504bp）、CPS6（720bp）、CPS... 详细信息

根据胸膜肺炎放线杆菌（APP）外膜蛋白OmlA序列设计种特异性引物，根据血清型1、2、6、7荚膜多糖（CPS）序列分别设计型特异性引物，通过优化PCR扩增条件，分别扩增出OralA（952bp）、CPS1（630bp）、CPS2（504bp）、CPS6（720bp）、CPS7（389bp）特异性片段，建立了既可对APP进行定性检测又可对APP1、2、6、7进行定型检测的多重PCR。特异性试验表明，此多重PCR能从APP1～4、6～10标准株中扩增出与引物相应的特异性片段；对猪副嗜血杆菌、猪肺炎霉形体、多杀性巴氏杆菌、肠炎沙门菌、猪链球菌、大肠杆菌和猪丹毒杆菌进行扩增，均未扩增出片段。敏感性试验表明，此多重PCR能够检测到DNA的量为10pg。45头疑似病猪病料的细菌分离鉴定结果与此多重PCR的鉴定结果一致。上述结果表明，建立的多重PCR适合于APP1、2、6、7的鉴别诊断及流行病学调查。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白基因荚膜多糖基因多重PCR 检测

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两种标记方法对cDNA芯片杂交信号的初步分析

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中国兽医科学 2016年第3期46卷 338-343页

作者：杨国淋赵松黄小波马锐张仙滑翔赵玉佳曹三杰文翼平伍锐文心田四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川成都611130

为研究两种不同的标记方法对杂交效率的影响,将含NDV的F和HN基因、IBV的M和N基因、ILTV的TK和gB基因的重组质粒作为靶基因,分别采用Cy3直接引物标记法和间接掺入标记法进行PCR扩增。然后将荧光标记的样品与芯片进行杂交,收集扫描后的输... 详细信息

为研究两种不同的标记方法对杂交效率的影响,将含NDV的F和HN基因、IBV的M和N基因、ILTV的TK和gB基因的重组质粒作为靶基因,分别采用Cy3直接引物标记法和间接掺入标记法进行PCR扩增。然后将荧光标记的样品与芯片进行杂交,收集扫描后的输出图像和荧光强度信号值,分析两种标记方法对芯片杂交效率的影响。结果显示,Cy3引物标记方法所获得NDV、IBV、ILTV芯片扫描数据结果,图像直观判断均优于间接掺入标记方法。表明Cy3直接引物标记法是一种能够提高杂交的信号值,降低背景信号值,提高杂交效率的方法,有利于检测型基因芯片的应用。

关键词：标记方法杂交信号基因芯片

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冠状病毒的氨基肽酶N受体的研究进展

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中国人兽共患病学报 2016年第1期32卷 89-94页

作者：陈杰黄小波张雨迪卿盈李亚青文心田曹三杰文翼平伍锐四川农业大学动物医学院猪病研究中心/动物传染病与基因芯片室成都611130

氨基肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是一种锌离子依赖性膜结合II型的金属跨膜糖蛋白,其广泛存在于人和哺乳动物的多种组织细胞中。APN是多种冠状病毒的黏附性受体,参与冠状病毒的粘附与侵袭,与病毒感染密切相关。本文对多种冠状病毒(HCoV-... 详细信息

氨基肽酶N(Aminopeptidase N,APN)是一种锌离子依赖性膜结合II型的金属跨膜糖蛋白,其广泛存在于人和哺乳动物的多种组织细胞中。APN是多种冠状病毒的黏附性受体,参与冠状病毒的粘附与侵袭,与病毒感染密切相关。本文对多种冠状病毒(HCoV-229E、FCoV、CCoV、TGEV、PEDV)的APN受体的结构、功能、抑制剂等研究进展进行了总结,重点介绍了其作为人和猪冠状病毒功能受体的进展。本文为深入研究和应用冠状病毒APN受体提供参考。

关键词：氨基肽酶N 冠状病毒受体

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结合不对称PCR技术构建鸡NDV-IBV-ILTV联合检测基因芯片

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农业生物技术学报 2016年第1期24卷 142-150页

作者：杨国淋赵松尹人杰黄小波马锐张仙曹三杰文翼平伍锐文心田四川农业大学动物医学院/动物传染病与基因芯片实验室崇州市农村发展局

基因芯片(gene chip)是依据核酸杂交原理发展的一种生物新技术,在生命科学研究领域具有重要的应用价值。本研究将不对称PCR和基因芯片两种技术相结合,构建了同步检测鸡(Gallus gallus)传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis ... 详细信息

基因芯片(gene chip)是依据核酸杂交原理发展的一种生物新技术,在生命科学研究领域具有重要的应用价值。本研究将不对称PCR和基因芯片两种技术相结合,构建了同步检测鸡(Gallus gallus)传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)、新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)、传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)的共检基因芯片。分别选取ILTV的胸苷激酶(thymidine kinase,TK)和糖蛋白B(glycoproteins B,g B)基因、NDV的融合蛋白(fusion,F)和血凝素-神经氨酸酶蛋白(haemagglutinin-neuraminidase,HN)基因以及IBV的膜蛋白(membrane,M)和核衣壳(nucleocapsid,N)基因设计引物,从重组质粒菌中扩增制备探针基因,用乙醇沉淀法纯化后点制于氨基修饰的载玻片上,制备基因芯片;靶基因用cy3标记引物,进行不对称PCR扩增,扩增的荧光标记单链产物与芯片杂交。不对称PCR结果显示,当限制性引物与非限制性引物浓度比例在1∶10时ILTV-TK、NDV-HN和IBV-N的单链产物增加最多,当浓度比在1∶20时,ILTV-g B、NDV-F和IBV-M的单链产物增加最多;相应的标记样品与3种病毒检测芯片杂交后,均出现较强的杂交信号,而阴性对照检测不到荧光信号,灵敏性实验表明,当DNA浓度为1.8×104拷贝时杂交仍为阳性。本研究构建的诊断基因芯片对12份临床样品进行初步应用检测,与PCR检测技术检出率基本一致。本实验所建立的联合检测基因芯片能够快速、准确、高通量的诊断NDV-IBV-ILTV,可以应用于集约化养殖业中对多种鸡疫病病毒的检测。

关键词：鸡新城疫病毒(NDV) 传染性喉气管炎病毒(ILTV) 传染性支气管炎病毒(IBV) 不对称PCR 芯片构建

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基因芯片技术在鸡病毒性疾病诊断中的应用

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中国兽医杂志 2015年第10期51卷 57-60页

作者：杨国淋文心田曹三杰黄小波马锐常晓霞张仙四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川成都611130

禽流感、新城疫均为一类传染病,传染性强,发病率高;鸡传染性囊病、鸡传染性支气管炎等也是影响我国家禽养殖业健康发展最为常见的疾病。目前世界各国都十分重视对这些疾病的防治,努力研究一种准确、快速、特异性高的方法进行疾病的诊断... 详细信息

禽流感、新城疫均为一类传染病,传染性强,发病率高;鸡传染性囊病、鸡传染性支气管炎等也是影响我国家禽养殖业健康发展最为常见的疾病。目前世界各国都十分重视对这些疾病的防治,努力研究一种准确、快速、特异性高的方法进行疾病的诊断。基因芯片技术是随着人类基因组计划的研究应运而生,又称DNA微阵列。

关键词：基因芯片技术鸡传染性囊病原位合成病毒性疾病人类基因组计划家禽养殖业禽流感病毒 DNA 基因表达分析杂交信号

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减毒沙门氏菌递呈的TGEVS／N融合基因疫苗的口服免疫原性

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中国人兽共患病学报 2013年第6期29卷 594-600页

作者：黄小波张鑫淼曹三杰文心田李春松梁恩涛崔婷婷四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室/动物疫病与人类健康四川省重点实验室雅安625014

目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1&#... 详细信息

目的研究携带猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S/N融合基因的重组减毒沙门氏菌的口服免疫原性。方法将真核质粒pVAX-S/N电转化鼠伤寒减毒沙门氏菌SL7207,筛选获得疫苗菌株SL7207(pVAX-S/N)。将菌株SL7207(pVAX-S/N)及对照组SL7207(pVAX-S)以1×109 CFU/只灌胃免疫小鼠,测定免疫小鼠诱导的抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的血清IgG及肠道粘膜IgA抗体动态水平,同时测定42d免疫小鼠的干扰素水平。结果菌株SL7207(pVAX-S/N)构建成功,首免后2～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌SL7207)的血清IgG,第4～6周可诱导产生抗TGEV(和抗沙门氏菌均SL7207)的肠道粘膜IgA,SL7207(pVAX-S/N)诱导的IgG和IgA抗体最高滴度均略高于SL7207(pVAX-S),但差异不明显(P>0.05)。SL7207(pVAX-S/N)免疫42d小鼠诱导的干扰素浓度为659.45pg/mL,低于SL7207(pVAXD-S)组。结论 S/N融合基因疫苗SL7207(pVAX-S/N)具有良好的口服免疫原性,但与SL7207(pVAX-S)无明显差异。

关键词：减毒沙门氏菌猪传染性胃肠炎病毒融合双基因构建免疫原性

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三株胸膜肺炎放线杆菌基因缺失株免疫原性的研究

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中国兽医科学 2014年第8期44卷 862-870页

作者：张洋溢谢文浩曹三杰黄小波文心田冉曦张飞四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川雅安625014 四川农业大学人兽共患病与猪病防治研究中心四川成都611130

为深入研究猪传染性胸膜肺炎基因工程弱毒活疫苗的生物学特性和免疫原性,分别以本实验室构建的血清7型胸膜肺炎放线杆菌(APP)基因缺失株apxⅡC-/Kan+、apxⅡC-/ⅠN+和血清5型APP的基因缺失株SW1ΔⅠC为研究对象,对其进行研究。溶血活性... 详细信息

为深入研究猪传染性胸膜肺炎基因工程弱毒活疫苗的生物学特性和免疫原性,分别以本实验室构建的血清7型胸膜肺炎放线杆菌(APP)基因缺失株apxⅡC-/Kan+、apxⅡC-/ⅠN+和血清5型APP的基因缺失株SW1ΔⅠC为研究对象,对其进行研究。溶血活性试验证实,突变株完全失去了溶血活性。细胞毒性试验证实,缺失株SW1ΔⅠC的细胞毒性完全丧失,缺失株apxⅡC-/Kan+和apxⅡC-/ⅠN+有轻微的细胞毒性。遗传稳定性试验证实,3株缺失株在体内传5代均不会发生回复突变。毒力试验结果显示,基因缺失株apxⅡC-/Kan+、apxⅡC-/ⅠN+和SW1ΔⅠC对小鼠的半数致死量分别为亲本株的5倍、7倍和15倍。3株缺失株分别免疫小鼠后,以10LD50血清1型、5型和7型APP的剂量攻毒,小鼠的保护率可达100%。试验结果表明,3株缺失株的毒力明显降低,并能提供有效的保护力。本研究为进一步以突变株为基因工程弱毒活疫苗的研究奠定了一定基础。

关键词：胸膜肺炎放线杆菌基因缺失株免疫原性

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检测四种鸡呼吸道疫病病毒可视化芯片技术的优化及初步应用

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农业生物技术学报 2018年第3期26卷 530-539页

作者：杨国淋马锐赵玉佳滑翔刘志鹏黄小波曹三杰文翼平伍锐文心田四川农业大学动物医学院/动物传染病与基因芯片实验室川北医学院实验动物中心成都市大熊猫繁育研究基地

可视化芯片技术是在传统芯片技术的基础上发展起来的一项新的疾病诊断和基因分析技术,对于临床疾病检测和诊断具有重要意义。本研究针对禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的核蛋白(nucleprotein,NP)基因设计一对特异性引物,以H9亚... 详细信息

可视化芯片技术是在传统芯片技术的基础上发展起来的一项新的疾病诊断和基因分析技术,对于临床疾病检测和诊断具有重要意义。本研究针对禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的核蛋白(nucleprotein,NP)基因设计一对特异性引物,以H9亚型禽流感病毒分离株c DNA为模板,经PCR扩增、连接、转化和核酸序列鉴定后,得到含有AIV-NP基因的重组质粒。同时复苏本实验室保存的3株分别含有新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)的融合(fusion,F)蛋白基因、鸡传染性喉气管炎病毒(Infectious laryngotracheitis virus,ILTV)胸苷激酶(haemaggluttinin-neuraminidase,TK)基因和鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)核衣壳(nucleocapsid,N)蛋白基因的重组菌。以上述4种病原的靶基因核酸序列片段的正义链为模板,设计寡核苷酸探针,喷样到尼龙膜上制备成芯片,利用不对称PCR技术扩增生物素标记的靶基因,与芯片进行杂交后,检测结果直接用肉眼就可以判定。本研究对芯片制备流程和检测过程中主要条件进行优化。结果表明当寡核苷酸探针喷样浓度为25μmol/L、芯片杂交反应的时间为1 h、杂交温度为50℃、Streptavidin HRP Conjugate(1.0 mg/m L)稀释2 000倍、二氨基联苯胺(diaminobenzidine,DAB)显色时间为5 min时,芯片检测技术的结果最佳。用该方法与PCR/RT-PCR技术同时对临床采集的96份疑似病料进行检测,两种方法的检测结果一致。本研究构建的检测4种禽呼吸道疾病病毒可视化基因芯片技术具有高通量、快速、准确等优点,为鸡病的临床诊断提供了新的技术。

关键词：鸡呼吸道疫病病毒可视化基因芯片应用研究

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减毒沙门氏菌载体及其在疫苗研究中的应用进展

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中国人兽共患病学报 2008年第5期24卷 478-480页

作者：黄小波曹三杰文心田杨恒四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室四川省动物疫病与人类健康重点实验室雅安625014

沙门氏菌是一种非常重要的人兽共患细菌病，主要引起人和动物的肠炎、败血症等。减毒沙门氏菌是通过物理、化学或基因工程等方法，使沙门氏菌某些特定的基因发生不可逆的突变。使其毒力大大降低，感染宿主细胞后可在体内生长繁殖。沙门... 详细信息

沙门氏菌是一种非常重要的人兽共患细菌病，主要引起人和动物的肠炎、败血症等。减毒沙门氏菌是通过物理、化学或基因工程等方法，使沙门氏菌某些特定的基因发生不可逆的突变。使其毒力大大降低，感染宿主细胞后可在体内生长繁殖。沙门氏菌是一种侵袭性胞内菌，可用其作为疫苗载体携带原核表达质粒和真核表达质粒，重组减毒沙门氏菌疫苗制备简单，免疫方便，有较强的免疫原性，能诱导持久的免疫反应，尤其可诱导较强的黏膜免疫反应。减毒沙门氏菌载体由于其特殊的优点而被广泛应用于疫苗研究并取得了很大进展。

关键词：沙门氏菌载体减毒沙门氏菌疫苗载体黏膜免疫反应真核表达质粒原核表达质粒基因工程免疫原性

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三株递呈猪流行性腹泻病毒S基因的减毒鼠伤寒沙门菌的生物学特性研究

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畜牧兽医学报 2015年第2期46卷 279-287页

作者：梁恩涛陈杰黄小波文心田曹三杰吴学婧朱书权四川农业大学动物医学院动物传染病与基因芯片实验室雅安625014 四川农业大学人兽共患病研究室与猪病防治研究中心成都611130

为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N... 详细信息

为了探究减毒沙门菌递呈不同长度猪流行性腹泻病毒(PEDV)S基因的可行性,本研究对3株携带不同长度S基因片段的减毒鼠伤寒沙门菌进行了生物学特性评估。主要进行了对所构建的重组减毒沙门菌菌株SL7207(pVAX-S499-650)(长456bp,编码S蛋白N末端499—650位氨基酸)、SL7207(pVAX-S499-789)(长873bp,编码S蛋白N末端499—789位氨基酸)和前期构建的菌株SL7207(pVAXD-S1-789)(长2 367bp,编码S蛋白N末端1—789位氨基酸)的生物学特性研究,包括生长曲线测定、携带质粒的体内/外稳定性、回肠组织内的转录、在小鼠体内动态增殖规律、小鼠口服的安全性等。结果表明:SL7207(pVAX-S499-650)、SL7207(pVAX-S499-789)、SL7207(pVAXDS1-789)3种口服菌株均具有较高的稳定性;携带的目的基因可在肠道组织内转录;菌株在小鼠肝、脾中增殖约5周后逐渐被机体清除;小鼠口服具有良好的安全性。本研究结果表明减毒鼠伤寒沙门菌SL7207可递呈不同长度的S基因抗原片段,为后续开展3种菌株的实际口服免疫效果比较研究奠定了基础。

关键词：猪流行性腹泻病毒 S基因减毒鼠伤寒沙门菌口服生物学特性

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