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第十四届中国实验动物科学年会

作者：李立科史良琴刘衡罗启慧黄超刘文涛陈晓林陈正礼四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室四川农业大学实验动物疾病模型研究室

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机... 详细信息

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机分为左旋多巴组(3只)、氯碘羟喹组(3只)以及对照组(2只),连续四周分别经口给予左旋多巴/卡比多巴15 mg/kg、氯碘羟喹15 mg/kg以及生理盐水。每天观察记录并运用PD评定量表进行行为评分。采用血液生化法测定治疗前后PD猕猴血清超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶以及谷胱甘肽硫转移酶的水平。与治疗前自身对照比较结果发现,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)猕猴行为评分下降,对照组无明显差异;左旋多巴组(P<0.05)超氧化物歧化酶活性增加,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽含量增加,氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P<0.05)丙二醛含量减少,低于对照组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05);左旋多巴组(P<0.05)和对照组(P<0.05)谷胱甘肽过氧化物酶活性增加,左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.01)低于对照组;左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽硫转移酶活性增加,左旋多巴组高于对照组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)。结果表明,不同药物治疗后通过提高血液中抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化物的含量,增强了机体全身的抗氧化能力,促进了PD猕猴临床行为的恢复,从而对治疗起到了积极作用。

关键词：帕金森病 MPTP 恒河猴左旋多巴氯碘羟喹行为评价血清抗氧化

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血管内皮生长因子与色素上皮衍生因子在糖尿病猕猴视网膜病变早变早期的表达

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南方医科大学学报 2017年第9期37卷 1217-1221页

作者：陈镜妃罗启慧黄超刘文涛曾文高琪陈苹陈兵陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014

目的检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义。方法通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜... 详细信息

目的检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义。方法通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴。行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况。结果处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P<0.05)及蛋白表达水平(P<0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P<0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P<0.05)。结论猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对糖尿病视网膜病变的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断。

关键词：糖尿病视网膜病变早期猕猴血管内皮生长因子色素上皮衍生因子

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VEGF与PEDF在糖尿病猕猴视网膜病变早期的表达研究

VEGF与PEDF在糖尿病猕猴视网膜病变早期的表达研究

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第十四届中国实验动物科学年会

作者：陈镜妃罗启慧黄超刘文涛曾文高琪陈苹陈兵陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014 四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014

目的：检测糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达,探讨其意义. 方法：通过空腹血糖值、糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴.行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况. 结果：处于DR早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P＜0.05)及蛋白表达水平(P＜0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P＜0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P＜0.05). 结论：猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对DR的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断.

关键词：糖尿病视网膜病变发病机制血管内皮生长因子色素上皮衍生因子

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樱桃谷肉鸭源细小病毒QH-L01株的分离鉴定及VP1基因序列分析

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中国兽医科学 2017年第7期47卷 909-914页

作者：陈兵徐婧黄超刘文涛阳丹丹陈镜妃马文静陈正礼罗启慧四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室四川成都611130 四川农业大学预防兽医研究所四川成都611130

2016年4月,四川邛崃某鸭场送检30只樱桃谷肉鸭,临床表现鸭喙变短、舌头伸出。从送检鸭脏器中分离鉴定出1株鸭源细小病毒,命名为QH-L01株。为进一步了解该病毒毒力及分子生物学特性,对其进行ELD50测定、VP1基因测序,并与其他细小病毒毒... 详细信息

2016年4月,四川邛崃某鸭场送检30只樱桃谷肉鸭,临床表现鸭喙变短、舌头伸出。从送检鸭脏器中分离鉴定出1株鸭源细小病毒,命名为QH-L01株。为进一步了解该病毒毒力及分子生物学特性,对其进行ELD50测定、VP1基因测序,并与其他细小病毒毒株进行比较。ELD50测定结果为10-6.54ELD50/0.2 m L;VP1核苷酸和氨基酸序列分析结果表明,该病毒结构基因全长2 203 bp,编码734个氨基酸,与鹅细小病毒核苷酸同源性为92.8%~99.8%,与番鸭细小病毒同源性为77.4%~87.3%;VP1编码的氨基酸同源性和鹅细小病毒及番鸭细小病毒分别为95.2%~99.5%和85.4%~91.1%。VP1基因进化分析显示,该病毒和鹅细小病毒SYG26-35分离株处于同一进化分支上。动物回归试验结果显示,试验组出现明显的鸭源细小病毒BADS症状,对照组无明显变化,表明该病毒分离鉴定成功。

关键词：樱桃谷肉鸭细小病毒同源性遗传进化分析

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帕金森恒河猴血液P53、Bax、Bcl-2、Caspase-3 mRNA的进程性变化

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农业生物技术学报 2017年第4期25卷 621-627页

作者：刘衡史良琴李立科罗启慧黄超刘文涛曾文陈正礼四川农业大学动物医学院/动物疾病模型实验室四川农业大学预防兽医研究所四川普莱美生物科技有限公司/国家实验猕猴种源基地

帕金森(Parkinson’s disease,PD)是一种以运动功能障碍为主要特征的神经退行性疾病,大量研究表明细胞凋亡参与了PD的发病机制。PD动物模型对于深入研究PD病因及发病机理、进行有效预防和提高治疗效果将起到重要作用。为探讨PD恒河猴(Ma... 详细信息

帕金森(Parkinson’s disease,PD)是一种以运动功能障碍为主要特征的神经退行性疾病,大量研究表明细胞凋亡参与了PD的发病机制。PD动物模型对于深入研究PD病因及发病机理、进行有效预防和提高治疗效果将起到重要作用。为探讨PD恒河猴(Macaca mulatta)外周血中肿瘤抑制基因P53、B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤-2相关X蛋白(BCL-2-associated X protein,Bax)和半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate-specific proteinase-3,Caspase-3)mRNA表达水平与行为学变化之间的关系,本研究选取健康青年恒河猴6只,以0.2 mg/(kg·d)小剂量、多次重复肌内注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methy-4-pheny-l,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)建立了PD恒河猴模型。于每次MPTP给药前后观察记录动物行为学表现30 min。分别于未注射MPTP(第0周),注射MPTP后第4、8、12、16、20和24周采集恒河猴前臂静脉血,采用qRT-PCR检测外周血P53、Bax、Bcl-2和Caspase-3 mRNA表达水平。行为学观察结果显示,第4周时,实验动物表现出温和的运动迟缓,随后症状逐渐加重,运动能力持续下降,到12周时实验动物均表现出活动量显著减少,姿势僵硬和严重的运动障碍。13周后临床症状基本稳定,实验动物表现出运动迟缓,姿势异常,肌强直和静止性震颤等。qRT-PCR结果显示,与0周相比,注射MPTP后第4、8、12周P53和Caspase-3 mRNA表达显著升高(P<0.05),而第16、20、24周差异不显著;与0周相比,Bcl-2/Bax比值在第4、8、12周显著降低(P<0.05),而第16、20、24周差异不显著。012周行为学评分与外周血P53和Caspase-3 mRNA表达水平呈正相关(r=0.975,r=0.956;P<0.05)。结果表明,当外周血P53和Caspase-3 mRNA表达水平显著升高时临床症状也处于逐渐加重的阶段,因此通过检测血液中凋亡调控基因的表达,能反应出PD恒河猴的疾病进程。研究结果可为PD诊断和疾病进程监测提供辅助参考。

关键词：帕金森细胞凋亡 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP) qRT-PCR 肿瘤抑制基因P53

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左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2017年第3期43卷 371-376页

作者：李立科史良琴刘衡罗启慧黄超刘文涛陈晓林陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130 四川农业大学实验动物工程技术中心四川雅安625014

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机分为左旋多巴组(3只)、氯碘羟喹组(3只)和对照组(2只),连续4周分别经口给予左旋多巴+卡比多巴15 mg/kg、氯碘羟喹15 mg/kg和等量的生理盐水,每天观察记录并运用PD评定量表进行行为评分;测定治疗前后PD猕猴血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)以及谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)的水平。结果发现:与同组治疗前相比,左旋多巴组和氯碘羟喹组PD猕猴行为评分下降,差异有统计学意义,而对照组无明显差异;左旋多巴组和氯碘羟喹组的SOD、GPX和GST活性和GSH含量均增加,MDA含量均降低,其中,左旋多巴组上述各指标的差异均有统计学意义(P<0.05),氯碘羟喹组的GST活性和GSH含量差异也具有统计学意义(P<0.05)。与仅注射生理盐水的对照组相比,左旋多巴组的SOD和GST活性显著增加,差异有高度统计学意义(P<0.01),GPX活性和MDA含量降低(P<0.05);氯碘羟喹组的SOD活性和GSH含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),GPX活性显著降低(P<0.01),其他各生化指标间差异无统计学意义。综上表明,不同药物治疗通过提高PD猕猴血液中抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化物的含量,增强机体的抗氧化能力,促进了猕猴临床行为的恢复,从而对治疗起到了积极作用。

关键词：帕金森病恒河猴 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶左旋多巴氯碘羟喹行为评价血清抗氧化

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猴源宋内氏志贺菌的分离鉴定及生物学特性分析

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中国兽医科学 2017年第1期47卷 60-66页

作者：邹瑶张露陈正礼黄超刘文涛罗启慧徐婧夏玉阳丹丹四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室四川成都611130

从四川省某规模化猕猴养殖基地的病死猕猴的脏器及肠道内容物中分离到1株可疑菌,对其纯化培养、革兰染色和生化鉴定后进行了分子水平鉴定,包括ipa H基因和wzy基因测定、16S r RNA基因序列分析,并进行了致病性分析及药敏试验。结果显示,... 详细信息

从四川省某规模化猕猴养殖基地的病死猕猴的脏器及肠道内容物中分离到1株可疑菌,对其纯化培养、革兰染色和生化鉴定后进行了分子水平鉴定,包括ipa H基因和wzy基因测定、16S r RNA基因序列分析,并进行了致病性分析及药敏试验。结果显示,该分离菌符合宋内氏志贺菌生物学及分子学特性,对小鼠具有较强致病性。16S r RNA基因多序列比对,绘制遗传距离及遗传发育树,证明其与2株宋内氏志贺菌(CP010829.1和HE616528.1)遗传距离最小,均为0.001。药敏试验显示,该菌株对头孢类等4类药物敏感,对青霉素类等6类药物耐药。结果表明,该分离株为宋内氏志贺菌且具有较强的致病性和耐药性。

关键词：宋内氏志贺菌猕猴痢疾分离鉴定 16S rRNA 药敏试验

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内质网应激调控重楼皂苷Ⅰ诱导肝癌HepG2细胞凋亡的研究

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中国细胞生物学学报 2017年第11期39卷 1397-1406页

作者：阳丹丹齐琪陈正礼陈兵黄超罗启慧刘文涛四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130 四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室成都611130

该文探讨了内质网应激在重楼皂苷Ⅰ(polyphyllin I,PPI)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡中的作用。采用CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷I处理Hep G2细胞6、12、24 h后细胞的增殖情况;采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况;应用q RT-PCR(Real-... 详细信息

该文探讨了内质网应激在重楼皂苷Ⅰ(polyphyllin I,PPI)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡中的作用。采用CCK-8法检测不同浓度的重楼皂苷I处理Hep G2细胞6、12、24 h后细胞的增殖情况;采用Hoechst 33258染色检测细胞凋亡情况;应用q RT-PCR(Real-time quantitative PCR)检测内质网应激相关基因GRP78、ATF-6、PERK、IRE-1的m RNA水平;采用Western blot方法分析重楼皂苷I对Cleaved-caspase12、Caspase-12、Cleaved-caspase3、Bax、Bcl-2、IRE-1、XBP1、CHOP和P-JNK1蛋白质水平的影响;并用流式细胞术检测20 mmol/L内质网抑制剂4-苯基丁酸(4-phenyl butyric acid,4-PBA)对细胞凋亡率的影响。结果发现,重楼皂苷I以时间–浓度依赖的方式抑制Hep G2细胞的增殖;细胞出现典型的凋亡形态;ATF-6和PERK m RNA水平无明显变化,GRP78和IRE-1 mRNA水平较阴性对照组(0 h)均显著增加(P<0.05);重楼皂苷I通过增加Bax、减少Bcl-2蛋白质水平进而活化Caspase-3来诱导细胞凋亡。进一步研究发现,重楼皂苷I可上调内质网应激通路的IRE-1,下调P-JNK1和XBP1蛋白质水平及活化内质网应激的标志蛋白质Caspase-12,但CHOP蛋白质水平无明显变化。流式细胞术结果显示,4-PBA与2.5μmol/L重楼皂苷I联合作用组的细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。因此,内质网应激参与了重楼皂苷I诱导人肝癌Hep G2细胞的凋亡,且在该过程中对细胞起到保护作用。

关键词：重楼皂苷Ⅰ 细胞凋亡内质网应激 HepG2细胞

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神经营养因子对糖尿病视网膜病变的治疗研究进展

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中华糖尿病杂志 2017年第6期9卷 400-402页

作者：陈镜妃程东静陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）是一种常见的可致失明且发展缓慢的糖尿病并发症,由高糖、血脂异常、代谢调节异常、炎症反应[1]以及缺血等多种因素导致.目前,眼底照相、荧光血管造影、B超扫描超声以及光学相干断层扫描... 详细信息

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy, DR）是一种常见的可致失明且发展缓慢的糖尿病并发症,由高糖、血脂异常、代谢调节异常、炎症反应[1]以及缺血等多种因素导致.目前,眼底照相、荧光血管造影、B超扫描超声以及光学相干断层扫描等多种技术已用于这类疾病的检测、诊断及评价.

关键词：糖尿病视网膜病变神经营养因子光学相干断层扫描治疗糖尿病并发症荧光血管造影血脂异常调节异常

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高剂量电离辐射对恒河猴器官组织病理改变及相关细胞因子表达的影响

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农业生物技术学报 2017年第11期25卷 1831-1837页

作者：高琪罗启慧曾文黄超刘文涛龚立陈正礼四川农业大学动物医学院/实验动物疾病模型研究室四川普莱美生物科技集团有限公司四川农业大学实验动物工程技术中心

放射治疗已成为治疗肿瘤的一种重要方法,但在治疗同时,高剂量的电离辐射会对机体各个组织器官造成损伤。为探讨高剂量电离辐射对恒河猴(Macaca mulatta)心、肝、脾、肺、肾及肠道组织的病理性损伤及相关细胞因子表达的影响,本研究用辐... 详细信息

放射治疗已成为治疗肿瘤的一种重要方法,但在治疗同时,高剂量的电离辐射会对机体各个组织器官造成损伤。为探讨高剂量电离辐射对恒河猴(Macaca mulatta)心、肝、脾、肺、肾及肠道组织的病理性损伤及相关细胞因子表达的影响,本研究用辐射能量9.5 Gy的60Coγ对3只雄性恒河猴照射4 h,于辐射后15 d处死并采集相关器官组织,采用苏木精-伊红染色(hematoxylin-eosin staining,HE)观察心、肝、脾、肺、肾及肠道组织病理损伤情况,同时采用免疫组化和图像分析技术检测各组织内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-10、IL-2和转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)的表达。结果表明,辐射后15 d,跟对照相比,恒河猴心、肝、脾、肺及肾组织发生明显病理变化,而且TNF-α、IL-6、IL-10、IL-2和TGF-β1表达量显著高于对照组(P<0.05),说明电离辐射所致的放射性损伤对相关细胞因子表达有影响,研究结果可为放射性损伤的诊断提供辅助参考。

关键词：电离辐射组织病理变化细胞因子恒河猴

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