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下丘脑CB1R及内源性大麻素水解酶参与2型糖尿病雄性猕猴HPA轴功能调节

中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会

作者：陈姗姗罗启慧黄超史良琴邓娟刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川农业大学动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室

研究目的下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamo-pituitary-adrenal,HPA)轴作为机体能量代谢的调节中枢,在2型糖尿病发生过程中起重要作用。下丘脑内分布有大量大麻素受体,大麻素系统可广泛调节中枢神经系统神经元的功能[1,2]。目前关于大麻... 详细信息

研究目的下丘脑-垂体-肾上腺(hypothalamo-pituitary-adrenal,HPA)轴作为机体能量代谢的调节中枢,在2型糖尿病发生过程中起重要作用。下丘脑内分布有大量大麻素受体,大麻素系统可广泛调节中枢神经系统神经元的功能[1,2]。目前关于大麻素系统对HPA轴的作用研究较少,因此大麻素系统对HPA轴的作用在2型糖尿病发病机制中的研究具有重要价值。材料方法本文选择经高脂饮食诱导24月成功建立的2型糖尿病及糖尿病前期川西亚种雄性

关键词：型糖尿病下丘脑糖尿病前期 HPA 内源性大麻素水解酶

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左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

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中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会

作者：李立科史良琴刘衡罗启慧黄超刘文涛陈晓林陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川农业大学动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室

本文通过研究左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson's disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供理论依据,并探讨左旋多巴和氯碘羟喹对PD猕猴脑内多巴胺水平下降及铁离子沉积的可能影响机制。... 详细信息

本文通过研究左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson's disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供理论依据,并探讨左旋多巴和氯碘羟喹对PD猕猴脑内多巴胺水平下降及铁离子沉积的可能影响机制。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机分为左旋多巴组(3只)、氯碘羟喹组(3只)以及对照组(2只),连续四周分别经口给予左旋多巴/卡比多巴15 mg/kg、氯碘羟喹15 mg/kg以及生理盐水。每天观察记录并运用PD评定量表进行行为评分。采用血液生化法测定治疗前后PD猕猴血清超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶以及谷胱甘肽硫转移酶的水平。与治疗前自身对照比较结果发现,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)猕猴行为评分下降,对照组无明显差异;左旋多巴组(P<0.05)超氧化物歧化酶活性增加,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P·<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽含量增加,氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P<0.05)丙二醛含量减少,低于对照组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05);左旋多巴组(P<0.05)和对照组(P<0.05)谷胱甘肽过氧化物酶活性增加,左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.01)低于对照组;左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽硫转移酶活性增加,左旋多巴组高于对照组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)。本实验结果表明,PD猕猴服用左旋多巴和氯碘羟喹后,通过提高血液中抗氧化酶活力,降低脂质过氧化物含量,重新维持了机体氧化还原平衡的状态,从而减轻了PD猕猴临床症状,这为临床PD药物治疗判定提供了参考依据。

关键词：左旋多巴氯碘羟喹帕金森病抗氧化

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大豆异黄酮干预肥胖大鼠睾酮合成与分泌相关因子的研究

大豆异黄酮干预肥胖大鼠睾酮合成与分泌相关因子的研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会

作者：陈晓林李立科罗启慧黄超刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川农业大学动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室

研究目的观察大豆异黄酮(SIF)干预高脂饮食肥胖大鼠后其睾丸形态结构、睾酮含量及睾酮合成与分泌关键因子的变化,为完善SIF调控雄性生殖系统生物学功能提供科学的临床实验依据。材料方法筛选20只肥胖大鼠级5只同等条件下的正常大鼠进行... 详细信息

研究目的观察大豆异黄酮(SIF)干预高脂饮食肥胖大鼠后其睾丸形态结构、睾酮含量及睾酮合成与分泌关键因子的变化,为完善SIF调控雄性生殖系统生物学功能提供科学的临床实验依据。材料方法筛选20只肥胖大鼠级5只同等条件下的正常大鼠进行SIF干预实验,为期4周,按SIF剂量梯度把20只肥胖大鼠随机分为肥胖对照组(Ⅰ:0.5%羧甲基纤维素钠,n=5)、SIF低剂量组(Ⅱ:

关键词：睾酮合成关键因子肥胖大鼠大豆异黄酮 HSD 大鼠睾丸羧甲基纤维素钠相关因子

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丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及免疫研究

丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及免疫研究

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中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会

作者：邓娟罗启慧陈姗姗黄超史良琴刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川农业大学动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室

本研究以HCV核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B为目的基因,构建核酸疫苗,以期为HCV疫苗的应用研究提供参考。主要研究结果如下:1.丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建采用RT-PCR扩增HCV 2a型JFH1株核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B等基因与pV... 详细信息

本研究以HCV核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B为目的基因,构建核酸疫苗,以期为HCV疫苗的应用研究提供参考。主要研究结果如下:1.丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建采用RT-PCR扩增HCV 2a型JFH1株核心蛋白Core、非结构蛋白NS3及NS4B等基因与pVAX1连接,经酶切与测序鉴定后,构建能表达Core、NS3和NS4B等蛋白的重组质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B及融合蛋白的重组质粒pVAX1-Core-NS3-NS4B。对上述4种重组质粒进行PCR和酶切鉴定后,分别以脂质体转染法转染HepG2细胞,采用RT-PCR检测Core、NS3、NS4B及融合蛋白的mRNA在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建HCV的4种重组质粒,且能在HepG2细胞中得到表达。2.丙型肝炎病毒核酸疫苗的免疫研究将重组质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B及pVAX1-NS3-Core-NS4B以肌肉注射方式分组免疫(BALB/c小鼠100μg/只),分别在首次免疫、加强免疫和末次免疫后第2周分别进行眼球采血,收集全血及血清冻存。采用流式细胞术检测外周血中T淋巴细胞亚群变化;采用间接酶联免疫吸附实验法(ELISA)检测小鼠血清中IgG抗体水平及IL-2、IL-4、IFN-γ等细胞因子的分泌水平;采用荧光定量PCR检测血清阻断病毒感染情况。流式细胞术检测结果显示,3次免疫后外周血中T淋巴细胞类型中CD3+、CD4+/CD8+、CD4+细胞数量,pVAX1-NS3-Core-NS4B组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);pVAX1-NS4B组和pVAX1-Core组高于对照组,显著性差异(P<0.05)。ELISA检测结果显示,3次免疫后小鼠血清中总IgG水平,pVAX1-NS3组、pVAX1-NS4B组均高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IL4水平,pVAX1-Core组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IL2水平,pVAX1-NS3组高于对照组,有极显著差异(P<0.01);血清中IFN-γ水平,pVAX1-NS3-Core-NS4B、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B和pVAX1-Core四个组均高于对照组,有极显著差异(P<0.01)。荧光定量结果显示,与对照组相比,pVAX1-NS3组病毒载量降低,有极显著性差异(P<0.01),pVAX1-NS4B组和pVAX1-Core组病毒载量降低,差异呈显著性(P<0.05)。结论:真核表达质粒pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B和pVAX1-NS3-Core-NS4B的成功构建为进一步研究丙型肝炎核酸疫苗奠定了基础。在3次免疫过程中,pVAX1-Core、pVAX1-NS3、pVAX1-NS4B均能诱导体液免疫和持续的细胞免疫应,且在一定程度上阻断病毒侵染,pVAX1-NS3-Core-NS4B主要体现在诱导持续的细胞免疫应答,这将为丙肝核酸疫苗的免疫研究与应用提供依据。

关键词：丙型肝炎核酸疫苗构建

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大豆异黄酮干预肥胖大鼠睾酮合成与分泌相关因子的研究

大豆异黄酮干预肥胖大鼠睾酮合成与分泌相关因子的研究

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中国畜牧兽医学会动物解剖及组织胚胎学分会第十九次学术研讨会

观察大豆异黄酮(SIF)干预高脂饮食肥胖大鼠后其睾丸形态结构、睾酮含量及睾酮合成与分泌关键因子的变化,为完善SIF调控雄性生殖系统生物学功能提供科学的临床实验依据。筛选20只肥胖大鼠级5只同等条件下的正常大鼠进行SIF干预实验,为期4... 详细信息

观察大豆异黄酮(SIF)干预高脂饮食肥胖大鼠后其睾丸形态结构、睾酮含量及睾酮合成与分泌关键因子的变化,为完善SIF调控雄性生殖系统生物学功能提供科学的临床实验依据。筛选20只肥胖大鼠级5只同等条件下的正常大鼠进行SIF干预实验,为期4周,按SIF剂量梯度把20只肥胖大鼠随机分为肥胖对照组(Ⅰ:0.5%羧甲基纤维素钠,n=5)、SIF低剂量组(Ⅱ:50 mg/kg·BW,n=5)、SIF中剂量组(Ⅲ:150 mg/kg·BW,n=5)、SIF高剂量组(Ⅳ:450 mg/kg·BW,n=5)和基础对照组(Ⅴ:0.5%羧甲基纤维素钠2ml/kg·BW,n=5)。HE观察大鼠睾丸形态结构;SABC免疫组化和RT-PCR法检测睾酮生物合成与分泌关键因子StAR、P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、ANXA5的蛋白及mRNA表达水平。HE染色结果发现肥胖大鼠睾丸形态结构发生改变,生精小管壁脱落变薄,细胞层数显著减少,精原细胞数量显著减少(P<0.05),排列稀疏,生精小管萎缩。SIF各实验组肥胖大鼠睾丸形态结构完整,与肥胖对照组比较均有明显的恢复,生精细胞数量增多,小管和小管内细胞排列紧密,尤以中、高剂量组恢复较好。免疫组化SABC结果:P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、ANXA5、StAR主要在睾丸间质细胞胞质和精原细胞胞质中表达,SIF能明显改善肥胖所致的睾酮合成关键因子表达量下降。除ANXA5外各因子、各组间的表达趋势一致:高脂对照组表达量最少,基础组和中剂量组表达最多,在低、中剂量组表达量随SIF剂量升高而增加,高剂量组阳性表达水平低于中剂量组,各组间差异显著(P<0.05)。ANXA5在睾丸内的表达与上述各关键因子不同,基础组大鼠表达量最高,高脂对照组最少,SIF各剂量组ANXA5表达量均比高脂对照组多,并呈现显著的剂量依赖性,各剂量组间差异显著(P<0.05)。补充不同剂量SIF后能剂量依赖性减脂减重。SIF可上调参与睾酮合成的各关键因子P450scc、P450c17、3β-HSD、17β-HSD、ANXA5、StAR的表达,从而维持睾丸形态结构的完整性,促进睾酮生物合成。但在SIF暴露剂量超过500mg/Kg·BW时其促恢复作用差于中剂量组,因此应关注剂量效应。

关键词：大豆异黄酮大鼠睾酮分泌相关因子

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丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及免疫研究

丙型肝炎病毒核酸疫苗的构建及免疫研究

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中国畜牧兽医学会兽医病理学分会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会、中国实验动物学会实验病理学专业委员会2016年学术研讨会

研究目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)易变异,慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,危害患者的健康和生命,已成为严重的社会和公共卫生问题。目前尚无有效的HCV相关疫苗上市。长期以来... 详细信息

研究目的丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)易变异,慢性感染可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化,部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌,危害患者的健康和生命,已成为严重的社会和公共卫生问题。目前尚无有效的HCV相关疫苗上市。长期以来,由于HCV的RNA聚合酶和包膜蛋白的中和抗原位点高度变异,使以体液免疫为主的丙肝疫苗研究进展缓慢。据研究表明,细胞免疫反应可能不仅能清除HCV病毒,还能预防机体再次感染。因

关键词：免疫研究显著差异 VAX 细胞免疫重组质粒 HCV 小鼠血清非结构蛋白核心蛋白体液免疫

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荧光定量RT-PCR方法在EV71感染猕猴血液病毒含量监测中的应用

荧光定量RT-PCR方法在EV71感染猕猴血液病毒含量监测中的应用

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十二次全国学术研讨会

作者：徐婧邹瑶张露陈正礼黄超刘文涛罗启慧景波四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川农业大学动物医学院/动物疫病与人类健康中心四川省重点实验室

通过建立肠道病毒71型（EV71）的荧光定量RT-PCR检测方法,为构建EV71猕猴模型提供检测技术。以克隆EV71病毒VP1基因构建重组质粒为标准品,计算其拷贝数,经倍比稀释构建标准曲线,并进行特异性、灵敏性和重复性检测。同时经气管注射EV71... 详细信息

通过建立肠道病毒71型（EV71）的荧光定量RT-PCR检测方法,为构建EV71猕猴模型提供检测技术。以克隆EV71病毒VP1基因构建重组质粒为标准品,计算其拷贝数,经倍比稀释构建标准曲线,并进行特异性、灵敏性和重复性检测。同时经气管注射EV71病毒建造手足口猕猴模型,采用注射剂量分别为1×10CCID、4.29×10CCID、1.86×10CCID感染新生猕猴和断奶期猕猴,并用建立的实时荧光定量RT-PCR方法监测感染后0～14天血液样品中病毒含量的动态变化。结果表明,建立的方法最低可检测到10～2 copies的病毒RNA,比普通RT-PCR方法灵敏度高100倍,标准曲线的线性范围在10`3～10～8 copies/μL之间,PCR扩增率达到99.37%,对其他肠道病毒检测结果均为阴性,具有特异性强、灵敏性高、稳定性好的特点;血液样品测定分析结果显示,病毒的增殖拷贝数与感染剂量和猕猴的年龄具有相关性。表明该荧光定量PCR技术可用于EV71猕猴模型病毒载量的定量检测。

关键词：肠道病毒71型(EV71) 实时荧光定量RT-PCR 病毒载量

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线粒体凋亡相关因子在大鼠自发性乳腺肿瘤中的表达

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中国实验动物学报 2015年第4期23卷 375-381页

作者：张睿崔雨婷陈正礼罗启慧祝春梅孙凤娇陈梦鹿四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川雅安625014 成都大学新药评价研究所成都610051 四川普莱美生物科技集团有限公司四川雅安625014

目的探讨SD大鼠自发性乳腺肿瘤中线粒体凋亡通路相关因子的表达情况及作用机制。方法将130只(♀∶♂=1∶1)Sprague-Dawley(SD)大鼠于SPF屏障环境中饲养,收集大鼠自发性乳腺肿瘤组织,通过病理学检查对肿瘤进行定性并分类,分为3组:正常乳... 详细信息

目的探讨SD大鼠自发性乳腺肿瘤中线粒体凋亡通路相关因子的表达情况及作用机制。方法将130只(♀∶♂=1∶1)Sprague-Dawley(SD)大鼠于SPF屏障环境中饲养,收集大鼠自发性乳腺肿瘤组织,通过病理学检查对肿瘤进行定性并分类,分为3组:正常乳腺组织(I组),良性乳腺肿瘤组织(II组)和恶性乳腺肿瘤组织(III组)。分别使用RT-PCR法和免疫组织化学法检测各样品中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP的mRNA和蛋白的表达。结果 130只大鼠中有14只检出自发性乳腺肿瘤,肿瘤发生率为10.77%;其中7只发生乳腺纤维腺瘤,7只发生乳腺癌,良、恶性肿瘤发生率均为5.38%。免疫组化结果如下,与I组相比,II组中AIF、APAF-1、caspase-3蛋白表达显著降低(P<0.01),Cyt C、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01),Ⅲ组中AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3蛋白表达均显著减弱(P<0.01),仅XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01);与II组相比,III组中AIF、Cyt C、caspase-3蛋白表达显著减弱(P<0.01),APAF-1、XIAP蛋白表达显著增强(P<0.01)。RT-PCR结果中,除APAF-1的mRNA与蛋白表达显著相关(P<0.05),其余因子与免疫组化的结果极显著相关(P<0.01)。结论乳腺肿瘤是SD大鼠常见的肿瘤,线粒体凋亡通路相关因子AIF、Cyt C、APAF-1、caspase-3、XIAP在乳腺肿瘤中的异常表达与肿瘤的发生发展密切相关。

关键词：自发乳腺肿瘤 SD大鼠 RT-PCR 免疫组化肿瘤发生

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