检索结果-内蒙古大学图书馆

微生物学通报 2023年第12期50卷 5404-5412页

作者：邹昕熠杜彦妮陈姝汐周文笛王文秀张馨月刘文涛蔡春雨罗启慧四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究中心四川成都611100 山东滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

【背景】鸭短喙侏儒综合征(beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是由新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus,NDPV)感染导致雏鸭生长发育迟缓、上下喙萎缩的疾病。BADS的暴发给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。【目的】利用大肠... 详细信息

【背景】鸭短喙侏儒综合征(beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是由新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus,NDPV)感染导致雏鸭生长发育迟缓、上下喙萎缩的疾病。BADS的暴发给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。【目的】利用大肠杆菌表达系统制备NDPV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为研制NDPV相关疫苗奠定基础。【方法】对NDPV VP2序列全长进行密码子优化、合成,连接至pColdTF表达载体,获得pColdTF-NDPV-VP2重组质粒,酶切、测序鉴定正确后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对蛋白表达进行可溶性分析;使用凝血酶(thrombin)切除trigger factor(TF)标签,利用镍柱(Ni-NTA)亲和层析方法纯化重组蛋白;利用Western blotting对纯化后的VP2蛋白进行反应原性分析;利用透射电镜、动态光散射观察重组蛋白形态以及能否形成VLPs。【结果】构建了pColdTF-NDPV-VP2重组质粒,在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达,融合蛋白TF-VP2大小约为115 kDa,去除TF标签经镍柱纯化后得到67 kDa的VP2蛋白;Western blotting试验表明VP2蛋白能与NDPV鸭阳性血清发生特异性结合;通过透射电镜可以观察到形状规则、直径约为20−25 nm的病毒样颗粒。【结论】利用大肠杆菌表达系统制备了NDPV VLPs,为下一步研发BADS相关亚单位疫苗及生物相关制品提供了基础。

关键词：新型鸭细小病毒病毒样颗粒大肠杆菌表达系统

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人源JAZF1基因真核表达载体的构建及其对胚胎癌细胞凋亡的影响

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四川农业大学学报 2021年第1期39卷 108-113页

作者：陈倩李超杨诚诚母彬龚欢黄超四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130

【目的】构建人源转录因子锌指并列基因1(JAZF1)真核表达载体,并探究过表达JAZF1对胚胎癌细胞存活的影响。【方法】以胚胎癌细胞NCCIT的cDNA为模板扩增JAZF1基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建重组质粒,转染至NCCIT细胞;通过实时... 详细信息

【目的】构建人源转录因子锌指并列基因1(JAZF1)真核表达载体,并探究过表达JAZF1对胚胎癌细胞存活的影响。【方法】以胚胎癌细胞NCCIT的cDNA为模板扩增JAZF1基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建重组质粒,转染至NCCIT细胞;通过实时荧光定量PCR和DAPI染色法分别检测过表达JAZF1对NCCIT细胞中炎性因子IL1-β、IL8、TGF-β转录水平的影响及对NCCIT细胞存活的影响。【结果】过表达JAZF1基因后,促炎因子IL1-β(P <0.05)、IL8(P <0.01)转录水平明显下降,而抑炎因子TGF-β的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),同时NCCIT细胞出现更明显的细胞凋亡(P<0.01)。【结论】JAZF1可能通过抑制促炎因子IL1-β和IL8的表达来抑制炎症发展,进而抑制畸胎瘤进展。

关键词：锌指并列基因1 胚胎癌炎性因子细胞凋亡

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内质网膜复合亚基3调控内质网应激影响人畸胎瘤细胞的存活

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中国生物化学与分子生物学报 2021年第5期37卷 673-680页

作者：高爽罗启慧李孜雨陈正礼刘文涛黄超四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室成都611130 四川农业大学预防兽医研究所成都611130

内质网膜蛋白复合物(endoplasmic reticulum membrane complex, EMC)在跨膜蛋白质的生物发生和膜整合中发挥重要作用。内质网膜复合亚基3(endoplasmic reticulum membrane complex 3,EMC3)是EMC的重要组成部分,但其在生殖细胞中发挥的... 详细信息

内质网膜蛋白复合物(endoplasmic reticulum membrane complex, EMC)在跨膜蛋白质的生物发生和膜整合中发挥重要作用。内质网膜复合亚基3(endoplasmic reticulum membrane complex 3,EMC3)是EMC的重要组成部分,但其在生殖细胞中发挥的作用未见报道。本研究通过实时荧光定量PCR法检测18周龄小鼠睾丸、肺、脾、下丘脑组织中的EMC3 mRNA表达水平差异。结果显示,小鼠睾丸中EMC3 mRNA表达水平较高。体外培养人畸胎癌细胞NCCIT,通过不同浓度衣霉素诱导细胞产生内质网应激(endoplasmic reticulum stress, ERS),应用实时荧光定量PCR法、蛋白质印迹法检测其中EMC3、葡萄糖调节蛋白78(glucose regulatory protein, GRP78)、CCAAT-增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT-enhancer-binding protein homologous protein, CHOP)的mRNA及其蛋白质表达水平。结果显示,相对于对照组,EMC3、GRP78、CHOP的mRNA与蛋白质水平表达极显著升高(P<0.01),表明衣霉素成功诱导了NCCIT细胞产生内质网应激,EMC3在衣霉素诱导的内质网应激的精原细胞中,mRNA与蛋白质水平表达升高。以NCCIT细胞cDNA为模板,利用PCR法扩增EMC3基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-EMC3重组质粒,经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-EMC3重组质粒构建成功。将重组质粒和空载体分别转染至NCCIT细胞中进行表达,应用实时荧光定量PCR法与CCK8法检测细胞中GRP78、CHOP的mRNA转录水平以及细胞活力。结果显示,EMC3转染组的GRP78、CHOP的mRNA水平表达显著升高(P<0.05),细胞活性极显著降低(P<0.01),表明EMC3可以在NCCIT细胞中调控内质网应激并抑制细胞存活的发生。综上表明,过表达EMC3能够在精原细胞中调控内质网应激抑制细胞存活,EMC3可能在精原细胞的内质网应激中发挥重要作用。

关键词：内质网膜复合亚基3 内质网应激过表达细胞存活

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人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2019年第5期45卷 619-625页

作者：龚小霞李超曹曦月杨诚诚黄超四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室

构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6,FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并... 详细信息

构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6,FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒;将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功;FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降,并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示,pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功,体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程,进而诱导U251细胞的凋亡,这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。

关键词：人叉头转录因子O亚型6 胶质瘤过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α

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大豆异黄酮对油酸致大鼠肝损伤的干预作用

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中国细胞生物学学报 2020年第5期42卷 829-838页

作者：高爽谭金龙罗启慧黄超刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室成都611130 四川农业大学预防兽医研究所成都611130

为了探究大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)对油酸致大鼠肝损伤的影响,该研究对6周龄SD(sprague dawley)大鼠尾静脉注射油酸构建肝损伤模型,应用血液生化检查法、苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法探究油酸引起... 详细信息

为了探究大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)对油酸致大鼠肝损伤的影响,该研究对6周龄SD(sprague dawley)大鼠尾静脉注射油酸构建肝损伤模型,应用血液生化检查法、苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法、实时荧光定量PCR法探究油酸引起的肝损伤以及大豆异黄酮的干预作用,对大鼠进行血液中ALT、AST含量检测、肝组织形态学观察和肝组织中TNF-α(tumor necrosis factor-α)、IL-6 (interleukin-6)蛋白阳性分布检测及其mRNA的转录水平检测。研究结果显示,与基础对照组相比,溶媒对照组的血液中ALT、AST含量显著升高,肝细胞显示出较严重的弥漫性水肿、空泡变性,以及少量坏死,SIF干预后,高、中、低剂量组的血液中ALT、AST含量显著降低,肝细胞病理情况显著改善。免疫组织化学结果显示,与基础对照组相比,溶媒对照组肝细胞显示出TNF-α、IL-6的高表达,SIF干预后,高、中、低剂量组TNF-α、IL-6的表达显著降低。实时荧光定量PCR结果显示,目的基因TNF-α和IL-6的mRNA转录水平与免疫组织化学结果中其蛋白表达基本一致。以上结果表明,不同剂量大豆异黄酮在持续灌胃一段时间后,减轻了油酸诱导的肝组织TNF-α、IL-6表达,改善了油酸性肝损伤,进一步探究大豆异黄酮对油酸性肝损伤的确切作用机制有利于SIF的临床开发与应用。

关键词：肝损伤大豆异黄酮肿瘤坏死因子-α 白细胞介素-6

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大豆异黄酮对健康大鼠肝脏CB1R、FAAH、DGAT1表达的影响

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2018年第5期46卷 23-29页

作者：陈苹罗启慧黄超李立科李一帆陈晓林刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室四川成都611130 四川农业大学预防兽医研究所四川成都611130

【目的】研究大豆异黄酮(Soy isoflavone,SIF)对大鼠肝脏中大麻素1型受体(CB1R)、脂肪酰胺水解酶(FAAH)和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)表达的影响,为SIF活性的研究与应用提供参考。【方法】试验选取40只6周龄SD大鼠,随机分为正常组和低... 详细信息

【目的】研究大豆异黄酮(Soy isoflavone,SIF)对大鼠肝脏中大麻素1型受体(CB1R)、脂肪酰胺水解酶(FAAH)和二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT1)表达的影响,为SIF活性的研究与应用提供参考。【方法】试验选取40只6周龄SD大鼠,随机分为正常组和低、中、高剂量组,每组10只,分别按0,50,250,500mg/kg的剂量经口灌胃含SIF的羧甲基纤维素钠溶液4周后,麻醉,采血收集血清,全自动生化仪进行血液生化指标检测。解剖大鼠取肝脏组织制备石蜡切片,HE染色进行病理分析,油红O检测脂滴沉积情况,免疫组织化学、实时荧光定量PCR(以β-actin为内参基因)分别对CB1R、FAAH、DGAT1蛋白及其基因进行定量分析。【结果】与对照组相比,SIF低剂量组总胆固醇浓度显著下降(P<0.05);中剂量组总胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白浓度显著下降(P<0.05);高剂量组总胆固醇和低密度脂蛋白浓度极显著下降(P<0.01)。各组大鼠肝脏组织学结构正常,均未见异常病理变化。SIF中、高剂量组肝脏脂滴沉积极显著减少(P<0.01)。与对照组相比,SIF低剂量组大鼠肝脏中FAAH蛋白的表达量显著增多(P<0.05),中、高剂量组CB1R、FAAH和DGAT1蛋白表达量均极显著增多(P<0.01)。与对照组相比,SIF低剂量组大鼠肝脏CB1R、FAAH、DGAT1 mRNA表达量均显著降低(P<0.05),中、高剂量组CB1R mRNA表达量显著增多(P<0.05),高剂量组FAAH mRNA表达量极显著增多(P<0.01)。【结论】SIF可影响肝脏内CB1R、FAAH、DGAT1的表达,且存在明显的剂量差异。

关键词：大豆异黄酮免疫组化实时荧光定量肝脏大鼠

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一例原发性肝癌大熊猫的病理学观察

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浙江农业学报 2018年第8期30卷 1336-1340页

作者：王承东高琪李德生张和民邓林华吴虹林陈正礼中国大熊猫保护研究中心四川都江堰611844 四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130

观察一例因原发性肝癌致多器官功能障碍而死亡的大熊猫全身的病理形态学变化,探讨大熊猫肝细胞癌的病理特征。大熊猫"盼盼"年龄31岁,雄性,于2016年12月28日死亡。对其进行系统解剖,取肝脏、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、... 详细信息

观察一例因原发性肝癌致多器官功能障碍而死亡的大熊猫全身的病理形态学变化,探讨大熊猫肝细胞癌的病理特征。大熊猫"盼盼"年龄31岁,雄性,于2016年12月28日死亡。对其进行系统解剖,取肝脏、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、心脏、肺脏、肾脏、膀胱、脾脏、甲状腺、颌下腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前肢肌、后肢肌,以及全身肿块组织进行苏木精-伊红(HE)染色。尸检发现,其腹腔积液,肝脏表面结节性增生,直肠后端可见大量出血点,脾脏下半段肿大,肛周皮肤散在小结节,右阴囊皮肤内侧散在结节,并且其右侧腋下、肝脏左叶、膈肌、腹膜及肠系膜上均可见明显肿块。HE结果显示,肝脏组织可见多灶性脓肿,细胞坏死,肝细胞呈多角形,呈腺样、鹅卵石样结构排列,细胞异型增生,核质比增大,致细胞密度增加。肾组织中可见异型性细胞团块。心脏、肺脏、胰腺、十二指肠、直肠、脾脏、膀胱、甲状腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前后肢肌均出现了病理损伤。结果提示,该大熊猫疑似由于原发性肝癌大面积迅速邻近转移,导致多器官出现功能障碍甚至衰竭而死亡。

关键词：大熊猫原发性肝癌肝细胞癌病理学

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大豆异黄酮对大鼠骨骼肌纤维组织形态及肌收缩蛋白表达的影响

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中国细胞生物学学报 2018年第8期40卷 1319-1325页

作者：唐伊谭金龙罗启慧黄超刘文涛陈正礼四川农业大学动物医学院动物疾病模型实验室成都611130 四川农业大学预防兽医研究所成都611130

为了探究SIF对肌肉生长的影响,我们用6周龄SD雄性大鼠作为实验对象,运用苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法研究不同浓度大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)作用下的雄性大鼠肌纤维形态学变化和α-肌动蛋白(α-act... 详细信息

为了探究SIF对肌肉生长的影响,我们用6周龄SD雄性大鼠作为实验对象,运用苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法研究不同浓度大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)作用下的雄性大鼠肌纤维形态学变化和α-肌动蛋白(α-actin)、肌球蛋白(myosin)及其m RNA表达量的变化。苏木精–伊红染色结果显示,中、高剂量组肌纤维直径极显著高于溶媒对照组(P<0.01)。免疫组织化学结果显示,中、高剂量组α-actin表达量极显著高于溶媒对照组(P<0.01);myosin表达量高剂量组极显著高于溶媒对照组(P<0.01),中剂量组显著高于溶媒对照组(P<0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,目的基因α-actin和myosin m RNA的表达量变化与蛋白表达基本一致。以上结果表明,SIF能够通过促进α-actin和myosin蛋白及m RNA在肌肉中的表达,使雄性大鼠肌纤维增粗。可为大豆异黄酮改善肌肉收缩、促进骨骼肌纤维增粗提供理论指导和实验依据。

关键词：大豆异黄酮肌纤维肌动蛋白肌球蛋白

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大豆异黄酮对肥胖大鼠盲肠微生物的影响

大豆异黄酮对肥胖大鼠盲肠微生物的影响

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会

作者：程东静马文静劳澄婕黄超陈正礼刘文涛罗启慧四川农业大学动物医学院动物疾病模型研究室

引言大豆异黄酮主要是由豆科植物产生的天然活性物质,被称为植物雌激素,具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗癌和肥胖抑制作用,还能抑制LPS导致的肠道损伤。目前,随着生活水平的提高,肥胖已成为威胁人类健康的重要疾病,大量的研究表明肠道微生... 详细信息

引言大豆异黄酮主要是由豆科植物产生的天然活性物质,被称为植物雌激素,具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗癌和肥胖抑制作用,还能抑制LPS导致的肠道损伤。目前,随着生活水平的提高,肥胖已成为威胁人类健康的重要疾病,大量的研究表明肠道微生物可调节肥胖的发生发展。本文旨在分析大豆异黄酮对肥胖大鼠肠道微生物的影响,探讨大豆异黄酮是否能通过调节肠道微生物来发

关键词：肥胖大鼠大豆异黄酮盲肠微生物

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鸭源鹅细小病毒对樱桃谷肉鸭盲肠微生物的影响

鸭源鹅细小病毒对樱桃谷肉鸭盲肠微生物的影响

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会

作者：徐婧雷欣雨黄超陈正礼罗启慧四川农业大学动物医学院动物疾病模型研究室

引言鸭短喙侏儒综合症是由鸭源鹅细小病毒（duck-origin goose parvovirus,D-GPV）感染,以短喙、舌头伸出、腹泻、生长发育迟缓、胫骨短而厚为临床特点的慢性疾病。此外,D-GPV感染会引起樱桃骨肉鸭胃肠炎症状,十二指肠、回肠和盲肠等肠... 详细信息

引言鸭短喙侏儒综合症是由鸭源鹅细小病毒（duck-origin goose parvovirus,D-GPV）感染,以短喙、舌头伸出、腹泻、生长发育迟缓、胫骨短而厚为临床特点的慢性疾病。此外,D-GPV感染会引起樱桃骨肉鸭胃肠炎症状,十二指肠、回肠和盲肠等肠道组织绒毛上皮细胞坏死脱落等病理变化。肠道正常菌群及其代谢产物对肠道内环境的维持具有重要意义。因此,本研究拟从

关键词：鹅细小病毒樱桃谷肉鸭盲肠微生物

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