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微生物学通报 2023年第12期50卷 5404-5412页

作者：邹昕熠杜彦妮陈姝汐周文笛王文秀张馨月刘文涛蔡春雨罗启慧四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究中心四川成都611100 山东滨州畜牧兽医研究院山东滨州256600

【背景】鸭短喙侏儒综合征(beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是由新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus,NDPV)感染导致雏鸭生长发育迟缓、上下喙萎缩的疾病。BADS的暴发给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。【目的】利用大肠... 详细信息

【背景】鸭短喙侏儒综合征(beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是由新型鸭细小病毒(novel duck Parvovirus,NDPV)感染导致雏鸭生长发育迟缓、上下喙萎缩的疾病。BADS的暴发给我国养鸭业造成了巨大的经济损失。【目的】利用大肠杆菌表达系统制备NDPV病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs),为研制NDPV相关疫苗奠定基础。【方法】对NDPV VP2序列全长进行密码子优化、合成,连接至pColdTF表达载体,获得pColdTF-NDPV-VP2重组质粒,酶切、测序鉴定正确后将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)对蛋白表达进行可溶性分析;使用凝血酶(thrombin)切除trigger factor(TF)标签,利用镍柱(Ni-NTA)亲和层析方法纯化重组蛋白;利用Western blotting对纯化后的VP2蛋白进行反应原性分析;利用透射电镜、动态光散射观察重组蛋白形态以及能否形成VLPs。【结果】构建了pColdTF-NDPV-VP2重组质粒,在大肠杆菌中主要以可溶性形式表达,融合蛋白TF-VP2大小约为115 kDa,去除TF标签经镍柱纯化后得到67 kDa的VP2蛋白;Western blotting试验表明VP2蛋白能与NDPV鸭阳性血清发生特异性结合;通过透射电镜可以观察到形状规则、直径约为20−25 nm的病毒样颗粒。【结论】利用大肠杆菌表达系统制备了NDPV VLPs,为下一步研发BADS相关亚单位疫苗及生物相关制品提供了基础。

关键词：新型鸭细小病毒病毒样颗粒大肠杆菌表达系统

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人源JAZF1基因真核表达载体的构建及其对胚胎癌细胞凋亡的影响

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四川农业大学学报 2021年第1期39卷 108-113页

作者：陈倩李超杨诚诚母彬龚欢黄超四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130

【目的】构建人源转录因子锌指并列基因1(JAZF1)真核表达载体,并探究过表达JAZF1对胚胎癌细胞存活的影响。【方法】以胚胎癌细胞NCCIT的cDNA为模板扩增JAZF1基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建重组质粒,转染至NCCIT细胞;通过实时... 详细信息

【目的】构建人源转录因子锌指并列基因1(JAZF1)真核表达载体,并探究过表达JAZF1对胚胎癌细胞存活的影响。【方法】以胚胎癌细胞NCCIT的cDNA为模板扩增JAZF1基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建重组质粒,转染至NCCIT细胞;通过实时荧光定量PCR和DAPI染色法分别检测过表达JAZF1对NCCIT细胞中炎性因子IL1-β、IL8、TGF-β转录水平的影响及对NCCIT细胞存活的影响。【结果】过表达JAZF1基因后,促炎因子IL1-β(P <0.05)、IL8(P <0.01)转录水平明显下降,而抑炎因子TGF-β的mRNA表达水平无明显变化(P>0.05),同时NCCIT细胞出现更明显的细胞凋亡(P<0.01)。【结论】JAZF1可能通过抑制促炎因子IL1-β和IL8的表达来抑制炎症发展,进而抑制畸胎瘤进展。

关键词：锌指并列基因1 胚胎癌炎性因子细胞凋亡

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人叉头转录因子O亚型6真核表达载体的构建及其对胶质瘤细胞存活的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2019年第5期45卷 619-625页

作者：龚小霞李超曹曦月杨诚诚黄超四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室

构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6,FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并... 详细信息

构建人叉头转录因子O亚型6(forkhead box class O6,FOXO6)基因的真核表达载体,并探究FOXO6对胶质瘤细胞存活的影响。以人神经胶质瘤细胞U251的c DNA为模板,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法扩增FOXO6基因片段,并将其与pRK5-myc载体连接,构建pRK5-myc-FOXO6重组质粒;将构建成功的重组质粒和空载体分别转染至U251细胞中进行表达,通过实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)和4’,6-二脒基-2-苯基吲哚(4’,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色法分别检测FOXO6对U251细胞中转录因子过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(peroxisome proliferator-activated receptorγcoactivator-1α,PGC-1α)转录水平的影响及其对U251细胞存活的影响。经双酶切鉴定及DNA测序表明:pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功;FOXO6转染组中的PGC-1α转录水平出现了明显的下降,并出现了明显的细胞凋亡现象。上述结果显示,pRK5-myc-FOXO6重组质粒构建成功,体外实验暗示FOXO6可能通过抑制PGC-1α的表达来抑制U251细胞的能量代谢及抗氧化过程,进而诱导U251细胞的凋亡,这为后续深入研究FOXO6在胶质瘤上的作用机制和靶点奠定了基础。

关键词：人叉头转录因子O亚型6 胶质瘤过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α

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一例原发性肝癌大熊猫的病理学观察

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浙江农业学报 2018年第8期30卷 1336-1340页

作者：王承东高琪李德生张和民邓林华吴虹林陈正礼中国大熊猫保护研究中心四川都江堰611844 四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130

观察一例因原发性肝癌致多器官功能障碍而死亡的大熊猫全身的病理形态学变化,探讨大熊猫肝细胞癌的病理特征。大熊猫"盼盼"年龄31岁,雄性,于2016年12月28日死亡。对其进行系统解剖,取肝脏、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、... 详细信息

观察一例因原发性肝癌致多器官功能障碍而死亡的大熊猫全身的病理形态学变化,探讨大熊猫肝细胞癌的病理特征。大熊猫"盼盼"年龄31岁,雄性,于2016年12月28日死亡。对其进行系统解剖,取肝脏、胰腺、胃、十二指肠、结肠、直肠、心脏、肺脏、肾脏、膀胱、脾脏、甲状腺、颌下腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前肢肌、后肢肌,以及全身肿块组织进行苏木精-伊红(HE)染色。尸检发现,其腹腔积液,肝脏表面结节性增生,直肠后端可见大量出血点,脾脏下半段肿大,肛周皮肤散在小结节,右阴囊皮肤内侧散在结节,并且其右侧腋下、肝脏左叶、膈肌、腹膜及肠系膜上均可见明显肿块。HE结果显示,肝脏组织可见多灶性脓肿,细胞坏死,肝细胞呈多角形,呈腺样、鹅卵石样结构排列,细胞异型增生,核质比增大,致细胞密度增加。肾组织中可见异型性细胞团块。心脏、肺脏、胰腺、十二指肠、直肠、脾脏、膀胱、甲状腺、肠系膜淋巴结、颌下淋巴结、睾丸、肛周皮肤组织、前后肢肌均出现了病理损伤。结果提示,该大熊猫疑似由于原发性肝癌大面积迅速邻近转移,导致多器官出现功能障碍甚至衰竭而死亡。

关键词：大熊猫原发性肝癌肝细胞癌病理学

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大豆异黄酮对肥胖大鼠盲肠微生物的影响

大豆异黄酮对肥胖大鼠盲肠微生物的影响

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会

作者：程东静马文静劳澄婕黄超陈正礼刘文涛罗启慧四川农业大学动物医学院动物疾病模型研究室

引言大豆异黄酮主要是由豆科植物产生的天然活性物质,被称为植物雌激素,具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗癌和肥胖抑制作用,还能抑制LPS导致的肠道损伤。目前,随着生活水平的提高,肥胖已成为威胁人类健康的重要疾病,大量的研究表明肠道微生... 详细信息

引言大豆异黄酮主要是由豆科植物产生的天然活性物质,被称为植物雌激素,具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗癌和肥胖抑制作用,还能抑制LPS导致的肠道损伤。目前,随着生活水平的提高,肥胖已成为威胁人类健康的重要疾病,大量的研究表明肠道微生物可调节肥胖的发生发展。本文旨在分析大豆异黄酮对肥胖大鼠肠道微生物的影响,探讨大豆异黄酮是否能通过调节肠道微生物来发

关键词：肥胖大鼠大豆异黄酮盲肠微生物

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鸭源鹅细小病毒对樱桃谷肉鸭盲肠微生物的影响

鸭源鹅细小病毒对樱桃谷肉鸭盲肠微生物的影响

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中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第五届第十三次全国学术研讨会

作者：徐婧雷欣雨黄超陈正礼罗启慧四川农业大学动物医学院动物疾病模型研究室

引言鸭短喙侏儒综合症是由鸭源鹅细小病毒（duck-origin goose parvovirus,D-GPV）感染,以短喙、舌头伸出、腹泻、生长发育迟缓、胫骨短而厚为临床特点的慢性疾病。此外,D-GPV感染会引起樱桃骨肉鸭胃肠炎症状,十二指肠、回肠和盲肠等肠... 详细信息

引言鸭短喙侏儒综合症是由鸭源鹅细小病毒（duck-origin goose parvovirus,D-GPV）感染,以短喙、舌头伸出、腹泻、生长发育迟缓、胫骨短而厚为临床特点的慢性疾病。此外,D-GPV感染会引起樱桃骨肉鸭胃肠炎症状,十二指肠、回肠和盲肠等肠道组织绒毛上皮细胞坏死脱落等病理变化。肠道正常菌群及其代谢产物对肠道内环境的维持具有重要意义。因此,本研究拟从

关键词：鹅细小病毒樱桃谷肉鸭盲肠微生物

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血管内皮生长因子与色素上皮衍生因子在糖尿病猕猴视网膜病变早变早期的表达

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南方医科大学学报 2017年第9期37卷 1217-1221页

作者：陈镜妃罗启慧黄超刘文涛曾文高琪陈苹陈兵陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014

目的检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义。方法通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜... 详细信息

目的检测糖尿病视网膜病变早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(VEGF)及色素上皮衍生因子(PEDF)的表达,探讨其意义。方法通过空腹血糖值糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴。行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况。结果处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P<0.05)及蛋白表达水平(P<0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P<0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P<0.05)。结论猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对糖尿病视网膜病变的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断。

关键词：糖尿病视网膜病变早期猕猴血管内皮生长因子色素上皮衍生因子

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VEGF与PEDF在糖尿病猕猴视网膜病变早期的表达研究

VEGF与PEDF在糖尿病猕猴视网膜病变早期的表达研究

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第十四届中国实验动物科学年会

作者：陈镜妃罗启慧黄超刘文涛曾文高琪陈苹陈兵陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014 四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室四川成都611130 国家实验猕猴种源基地四川雅安625014

目的：检测糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)早期猕猴视网膜中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)的表达,探讨其意义. 方法：通过空腹血糖值、糖化血红蛋白水平、眼底彩照情况及糖尿病病程,确定入选3只利用高脂饲料诱导成功且处于糖尿病视网膜病变早期的猕猴及3只年龄相当的健康猕猴.行实时荧光定量PCR及免疫组织化学检测,观察猕猴视网膜内VEGF和PEDF表达情况. 结果：处于DR早期的猕猴视网膜内VEGF在mRNA表达水平(P＜0.05)及蛋白表达水平(P＜0.05)均明显高于对照组猕猴,糖尿病组猕猴视网膜内PEDF mRNA表达量相比对照组显著减少(P＜0.01),PEDF蛋白表达与其mRNA表达趋势一致(P＜0.05). 结论：猕猴糖尿病视网膜早期,出现VEGF的上调和PEDF的下调,对DR的发生具有一定的提示意义,可为早期糖尿病视网膜病变提供辅助诊断.

关键词：糖尿病视网膜病变发病机制血管内皮生长因子色素上皮衍生因子

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左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

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第十四届中国实验动物科学年会

作者：李立科史良琴刘衡罗启慧黄超刘文涛陈晓林陈正礼四川农业大学动物医学院动物疾病与人类健康中心四川省重点实验室四川农业大学实验动物疾病模型研究室

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机... 详细信息

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson‘s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机分为左旋多巴组(3只)、氯碘羟喹组(3只)以及对照组(2只),连续四周分别经口给予左旋多巴/卡比多巴15 mg/kg、氯碘羟喹15 mg/kg以及生理盐水。每天观察记录并运用PD评定量表进行行为评分。采用血液生化法测定治疗前后PD猕猴血清超氧化物歧化酶、丙二醛、谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶以及谷胱甘肽硫转移酶的水平。与治疗前自身对照比较结果发现,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)猕猴行为评分下降,对照组无明显差异;左旋多巴组(P<0.05)超氧化物歧化酶活性增加,左旋多巴组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽含量增加,氯碘羟喹组(P<0.05)高于对照组;左旋多巴组(P<0.05)丙二醛含量减少,低于对照组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05);左旋多巴组(P<0.05)和对照组(P<0.05)谷胱甘肽过氧化物酶活性增加,左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.01)低于对照组;左旋多巴组(P<0.05)和氯碘羟喹组(P<0.05)谷胱甘肽硫转移酶活性增加,左旋多巴组高于对照组(P<0.01)和氯碘羟喹组(P<0.05)。结果表明,不同药物治疗后通过提高血液中抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化物的含量,增强了机体全身的抗氧化能力,促进了PD猕猴临床行为的恢复,从而对治疗起到了积极作用。

关键词：帕金森病 MPTP 恒河猴左旋多巴氯碘羟喹行为评价血清抗氧化

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左旋多巴和氯碘羟喹治疗对帕金森病猕猴血清抗氧化能力的影响

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浙江大学学报（农业与生命科学版） 2017年第3期43卷 371-376页

作者：李立科史良琴刘衡罗启慧黄超刘文涛陈晓林陈正礼四川农业大学动物医学院实验动物疾病模型研究室成都611130 四川农业大学实验动物工程技术中心四川雅安625014

探讨左旋多巴和氯碘羟喹对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)猕猴的治疗效果及血液抗氧化指标的影响,以期为PD药物治疗判定提供参考依据。利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)小剂量肌肉注射建立慢性PD猕猴模型,将8只PD猕猴随机分为左旋多巴组(3只)、氯碘羟喹组(3只)和对照组(2只),连续4周分别经口给予左旋多巴+卡比多巴15 mg/kg、氯碘羟喹15 mg/kg和等量的生理盐水,每天观察记录并运用PD评定量表进行行为评分;测定治疗前后PD猕猴血清超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)以及谷胱甘肽硫转移酶(glutathione S-transferase,GST)的水平。结果发现:与同组治疗前相比,左旋多巴组和氯碘羟喹组PD猕猴行为评分下降,差异有统计学意义,而对照组无明显差异;左旋多巴组和氯碘羟喹组的SOD、GPX和GST活性和GSH含量均增加,MDA含量均降低,其中,左旋多巴组上述各指标的差异均有统计学意义(P<0.05),氯碘羟喹组的GST活性和GSH含量差异也具有统计学意义(P<0.05)。与仅注射生理盐水的对照组相比,左旋多巴组的SOD和GST活性显著增加,差异有高度统计学意义(P<0.01),GPX活性和MDA含量降低(P<0.05);氯碘羟喹组的SOD活性和GSH含量显著增加,差异有统计学意义(P<0.05),GPX活性显著降低(P<0.01),其他各生化指标间差异无统计学意义。综上表明,不同药物治疗通过提高PD猕猴血液中抗氧化酶的活性,降低脂质过氧化物的含量,增强机体的抗氧化能力,促进了猕猴临床行为的恢复,从而对治疗起到了积极作用。

关键词：帕金森病恒河猴 1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶左旋多巴氯碘羟喹行为评价血清抗氧化

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