检索结果-内蒙古大学图书馆

QS系统中LasR和RhlR蛋白对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及免疫原性研究(英文)

生物化学与生物物理进展 2006年第1期33卷 31-38页

作者：谢轶曾蔚贾文祥杨发龙杨维青程曦康梅王兰兰张再容四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学华西医学中心临床医学院实验医学部成都610041

为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全... 详细信息

为探讨铜绿假单胞菌 PAO1 中 lasR 和 rhlR 基因表达产物的分子生物学特性,研究它们对铜绿假单胞菌生物被膜形成的影响以及对小鼠的免疫保护效果,采用聚合酶链式反应 (PCR) 方法扩增铜绿假单胞菌标准株 PAO1 中的 lasR 和 rhlR 基因,全自动荧光测序仪测序,并用 Blast 方法检测克隆片段. 利用 pGEX4T-1 载体分别构建 lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒,在大肠杆菌 BL21(DE3)中诱导表达,并经过免疫印迹实验验证其生物学活性. 用硅胶膜培养法建立生物被膜模型,诱导转入了pGFPuv 质粒的铜绿假单胞菌 PAG0305 形成生物被膜,并测定 LasR 蛋白和 RhlR 蛋白对生物被膜形成的影响. 同时用纯化的重组蛋白免疫小鼠,菌落计数法检测免疫组和对照组鼠肺对铜绿假单胞菌的清除率. 以 PAO1 染色体 DNA 为模板的 PCR 结果显示,lasR 的全基因序列为 720 bp,rhlR 基因序列为 726 bp,经序列分析和同源性比较分别与 GenBank 中 lasR/rhlR 基因(登录号:M59425; AE004768) 的同源性为 100%. 大肠杆菌 BL21 (DE3) 分别转化重组质粒 lasR/rhlR-pGEX4T-1 后,经 IPTG诱导和 SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,表达的融合蛋白分子质量均为 54 ku 左右,与预期蛋白质分子质量相同. 荧光显微镜观察和测定结果表明,在硅胶膜上 PAG0305 能够形成典型的发荧光的生物被膜,LasR 或 RhlR 蛋白 (10 mg/L) 存在的情况下,PAG0305 生物被膜的形成速度在前三天比对照组平均提高 40.77%,而且两蛋白单独存在与同时存在时的作用相同. 体内实验中,免疫小鼠肺部对铜绿假单胞菌的清除率显著高于未经免疫的正常组 (P < 0.05). 上述结果表明:构建的lasR/rhlR-pGEX4T-1 重组质粒能够在大肠杆菌 BL21(DE3)中成功地表达并具有生物学活性. LasR/RhlR 蛋白在体外模型中能够加快铜绿假单胞菌生物被膜的形成速度,是调节铜绿假单胞菌生物被膜形成的重要因素之一. 免疫结果表明,重组蛋白对小鼠表现出一定的保护作用,这为进一步开展疫苗研究奠定了基础.

关键词：铜绿假单胞菌数量感知系统生物被膜免疫原性

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大鼠干扰素诱导蛋白-10的体外表达和鉴定

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南方医科大学学报 2009年第4期29卷 615-618页

作者：赵玉杰林媛李明远李虹蒋忠华四川大学华西医学中心基础医学与法医学院微生物学教研室四川成都610041

目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10(IP-10)真核表达载体,在NIH3T3细胞中表达重组载体pcDNA3.1(+)-IP-10,并对其表达产物进行鉴定。方法通过PCR扩增IP-10基因片段,通过酶切和连接反应,构建IP-10的真核表达载体pcDNA3.1(+)-IP-10,重组载体经... 详细信息

目的构建大鼠干扰素诱导蛋白-10(IP-10)真核表达载体,在NIH3T3细胞中表达重组载体pcDNA3.1(+)-IP-10,并对其表达产物进行鉴定。方法通过PCR扩增IP-10基因片段,通过酶切和连接反应,构建IP-10的真核表达载体pcDNA3.1(+)-IP-10,重组载体经限制性内切酶、PCR及DNA序列测定等证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,免疫荧光技术检测pcDNA3.1(+)-IP-10在NIH3T3细胞的表达情况。转染的NIH3T3细胞通过G418筛选出稳定表达的细胞克隆,Western Blotting鉴定IP-10蛋白在细胞培养上清的表达情况。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,IP-10基因被成功克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组载体可在NIH3T3细胞表达。Western Blotting结果显示细胞培养上清有IP-10蛋白表达。结论成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)-IP-10,为进一步研究其对Th1型自身免疫性疾病的治疗效果奠定基础.

关键词：干扰素-γ 诱导蛋白10 真核表达自身免疫性疾病

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嗜肺军团菌mip/ctxB融合基因体外表达与动物免疫试验的免疫原性研究

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生物化学与生物物理进展 2004年第9期31卷 818-823页

作者：王涛陈建平郅克谦陶大昌杨春蕾张雷四川大学华西医学中心基础医学与法医学院寄生虫学教研室成都610041 西安交通大学口腔医学院颌面外科西安710004 四川大学华西医院成都610041 四川大学生命科学院医学细胞生物学教研室成都610041 大理学院微生物学教研室大理671000

PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和... 详细信息

PCR扩增嗜肺军团菌mip基因和霍乱弧菌ctxB基因,克隆入载体pcDNA3 1( +),重组子经限制性酶切分析、PCR、序列分析鉴定正确后,命名为pcDNA3 1 mip/ctxB.脂质体法将重组质粒pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB转染NIH3T3细胞,用免疫荧光法和蛋白质印迹鉴定瞬时表达和稳定表达产物,结果发现:重组质粒成功转入细胞并获得短暂表达,稳定转染细胞分别在 2 4ku和 35ku处检测到阳性杂交信号.将pcDNA3 1 mip、pcDNA3 1 mip/ctxB作为DNA疫苗免疫BALB/c小鼠,检测免疫小鼠体内抗原特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖活性、IFN γ产生水平、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性等体液免疫和细胞免疫反应的指标,评价疫苗的免疫原性.结果发现:各实验组均检测到免疫原性,pcDNA3 1 mip/ctxB免疫组的免疫原性高于pcDNA3 1 mip免疫组,有显著性差异(P <0 0 1).

关键词：嗜肺军团菌霍乱弧菌 mip/ctxB融合基因体外表达免疫原性

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DT390-IL2重组质粒治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的初步研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2005年第6期25卷 386-388,400,F003页

作者：陈明琪张林李虹蒋中华庄永华贾怡李明远四川大学华西医学中心基础医学与法医学院微生物学教研室

目的:研究DT390-IL2重组质粒对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:提取髓鞘碱性蛋白(MBP)并经SDS-PAGE鉴定后,用MBP+CFA诱导豚鼠的EAE模型;采用亚精胺法进行DT390-IL2重组质粒的大量制备,并经肌注DT390-IL2重组质粒对EAE... 详细信息

目的:研究DT390-IL2重组质粒对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的治疗效果。方法:提取髓鞘碱性蛋白(MBP)并经SDS-PAGE鉴定后,用MBP+CFA诱导豚鼠的EAE模型;采用亚精胺法进行DT390-IL2重组质粒的大量制备,并经肌注DT390-IL2重组质粒对EAE进行治疗,观察豚鼠临床症状和中枢神经系统病理改变。结果:①所提取的MBP,其分子量在17kD左右,并具有良好的生物学活性,成功地建成了豚鼠的EAE模型;②通过DT390-IL2重组质粒治疗豚鼠EAE,各治疗组与未治疗组相比,其差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:DT390-IL2重组质粒治疗EAE有效。

关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白重组质粒免疫毒素

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小鼠β-防御素3的原核表达、表达条件优化及其抗菌活性

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江苏医药 2013年第2期39卷 128-131页

作者：江滟易旭李明远王涛綦廷娜佘晓玲贵阳医学院微生物学教研室贵州省550004 四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室

目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素3(MBD3),优化表达条件,并研究其抗菌活性。方法通过反转录PCR方法从小鼠肺组织中扩增Mbd3基因,构建其原核表达质粒,将该质粒转入大肠埃希菌表达菌株Rosetta-gami(2)。优化融合蛋白的表达条件... 详细信息

目的运用基因工程方法获得重组小鼠β-防御素3(MBD3),优化表达条件,并研究其抗菌活性。方法通过反转录PCR方法从小鼠肺组织中扩增Mbd3基因,构建其原核表达质粒,将该质粒转入大肠埃希菌表达菌株Rosetta-gami(2)。优化融合蛋白的表达条件。通过亲和层析、凝血酶酶切、超滤浓缩得到MBD3的重组成熟肽(rMBD3),并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)电泳和Western blot鉴定其正确性。采用微量液体抗菌实验检测rMBD3对多种常见病原性细菌和真菌的抗菌活性。结果获得表达MBD3融合蛋白(fMBD3)的工程菌,fMBD3的表达量可达菌体总蛋白的62.9%,可溶性fMBD3约为1.15g/L。纯化的rMBD3对单细胞真菌和革兰阳性菌显示出较好的抑菌活性。结论 rMBD3具有一定的抗菌活性,为进一步研究该多肽的其他生物学活性及其应用提供参考依据。

关键词：小鼠β-防御素3 原核表达

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GFP质粒DNA/阳离子脂质体复合物的制备及其体外表达

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四川大学学报（医学版） 2004年第2期35卷 161-164页

作者：刘莉贾文祥毛咏秋雷松于波涛乔小蓉陈恬李学如杨远四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学华西医院肿瘤生物防治研究所成都军区总医院四川大学分析测试中心

目的　为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的 DNA投递系统。方法　采用逆向蒸发法 ,用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒 p EGFPC1,对三种不同DNA加入量所形成的 DNA/脂质体复... 详细信息

目的　为基因免疫和基因治疗寻找一种简单、经济、有效的 DNA投递系统。方法　采用逆向蒸发法 ,用卵磷脂、胆固醇、十八胺制备成阳离子脂质体包封含绿色荧光蛋白基因的真核表达质粒 p EGFPC1,对三种不同DNA加入量所形成的 DNA/脂质体复合物的微球形、包封率、电荷性、转染真核细胞的效果以及对细胞的毒性作用进行初步检测研究。结果　所获得的 DNA/脂质体复合物呈球形、平均粒径为 5 6 2 nm;包封率达 5 5 %～ 6 5 % ,为阳离子脂质体 ;都能有效转染真核细胞 ,但转染效率有差异 ,DNA/脂质体混悬液中 DNA含量、混悬液的加入量以及细胞的作用时间 ,都对细胞毒性有不同程度的影响。结论　该方法可作为提高基因免疫效果的简单、经济。

关键词：逆向蒸发法阳离子脂质体包封质粒DNA

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CTS-Fe_3O_4介导丙型肝炎病毒多表位基因疫苗的研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第6期42卷 757-761,788页

作者：杨远邝玉袁敦曹丽丽王保宁李明远张中伟四川大学华西基础医学与法医学院微生物学教研室成都610041 四川大学生物材料工程研究中心成都610064 成都大学医护学院成都610015 四川大学华西医院重症监护室成都610041

目的研发能诱导有效免疫应答的丙型肝炎病毒(HCV)基因疫苗候选者及探索磁性纳米材料作为基因载体的应用前景。方法选择5个HCV保守性T/B细胞识别的抗原表位基因,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定重组质粒,测定其细胞水平的表达以及在小鼠体内诱导... 详细信息

目的研发能诱导有效免疫应答的丙型肝炎病毒(HCV)基因疫苗候选者及探索磁性纳米材料作为基因载体的应用前景。方法选择5个HCV保守性T/B细胞识别的抗原表位基因,克隆入pcDNA3.1(+),鉴定重组质粒,测定其细胞水平的表达以及在小鼠体内诱导的免疫反应。同时合成壳聚糖(CTS)修饰的Fe3O4磁性纳米微粒(CTS-Fe3O4),采用MTT法检测对人胚肾细胞株HEK-293和小鼠成纤维细胞株3T3的细胞毒性作用,研究在外加磁场作用下,磁性材料作为基因投递系统的应用。结果成功构建了HCV多表位基因疫苗pcDNA3.1(+)-MA,RT-PCR和间接免疫荧光实验证实了重组质粒在细胞内的表达,疫苗中的B表位能被81%HCV阳性血清样本所识别,磁性材料浓度在1mmol/L内无细胞毒性。小鼠体内免疫实验初步显示出pcDNA3.1(+-)MA能有效诱导体液和细胞免疫应答反应,并且磁性纳米材料介导的免疫实验组诱导的免疫应答反应更强(P<0.05)。结论本研究构建的HCV多表位基因疫苗可成为有前景的HCV候选疫苗之一。壳聚糖修饰的Fe3O4纳米材料可以作为一种优良的基因靶向投递载体,并有免疫佐剂的作用。

关键词：丙型肝炎病毒多表位基因磁性纳米材料壳聚糖基因投递系统

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流感病毒血凝素基因HA1区的克隆及其真核表达载体的构建

流感病毒血凝素基因HA1区的克隆及其真核表达载体的构建

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第6次全国微生物学与免疫学大会

作者：曹康张卫东李虹李婉宜蒋中华庄永华李明远四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室四川大学华西医学中心基础与法医学院微生物学教研室

目的克隆甲型流感病毒血凝素基因HA1区及构建其真核表达载体。方法从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增血凝素基因HA1区。将所扩增片断克隆人真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),转化感受... 详细信息

目的克隆甲型流感病毒血凝素基因HA1区及构建其真核表达载体。方法从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增血凝素基因HA1区。将所扩增片断克隆人真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),转化感受态大肠杆菌JM109并筛选阳性克隆。结果经双酶切、PCR及测序鉴定证实血凝素基因HA1区的真核表达载体构建成功。结论

关键词：流感病毒血凝素 pcDNA3.1(+)

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用髓鞘碱性蛋白建立豚鼠变态反应性脑脊髓炎模型

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江苏大学学报（医学版） 2004年第5期14卷 381-383,F006页

作者：陈明琪李虹庄永华蒋中华贾怡李明远四川大学华西医学中心基础医学与法医学院微生物学教研室

目的 :用髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)豚鼠模型。方法 :提取MBP并经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定后 ,用MBP +完全弗氏佐剂 (CFA)免疫豚鼠 ,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统 (CNS)的病理改变。结... 详细信息

目的 :用髓鞘碱性蛋白 (MBP)诱导实验性变态反应性脑脊髓炎 (EAE)豚鼠模型。方法 :提取MBP并经SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE)鉴定后 ,用MBP +完全弗氏佐剂 (CFA)免疫豚鼠 ,观察豚鼠的临床症状和中枢神经系统 (CNS)的病理改变。结果 :实验组豚鼠均表现出典型的EAE症状 ,发病率为 10 0 % ,并在光镜下可见CNS血管周围炎性细胞浸润和白质脱髓鞘病理改变。结论 :用MBP +CFA成功地诱导了豚鼠的EAE模型 ,具有模型稳定、发病率高、动物价廉易得的优点 ,是研究多发性硬化 (MS)

关键词：实验性变态反应性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白自身免疫性疾病豚鼠

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我国丙肝病毒结构区的cDNA克隆

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药品评价 2004年第1期1卷 29-33页

作者：祁欣贾文祥杨春杨远曾蔚陈恬四川大学华西医学中心基础医学与法医学院微生物学教研室成都610045

目的克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因并进行序列分析,为研究丙肝病毒和基因工程表达做准备。方法从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCVRNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,... 详细信息

目的克隆我国西部丙型肝炎病毒全部结构区基因并进行序列分析,为研究丙肝病毒和基因工程表达做准备。方法从1名西安市丙肝感染者血液中,用Trizol试剂裂解HCV病毒颗粒,用糖原与RNA共沉淀提取HCVRNA,用AMV逆转录酶和随机引物逆转录为cDNA,用RT-PCR方法扩增目的片段并转化到pGEM-T质粒,得到pGEM-T-HCVc,pGEM-T-HCVe1和pGEM-T-HCVe2克隆。将以上3个克隆用特定的酶降解,用连结酶进行连接,构建了HCV结构区的完整克隆。结果将克隆好的质粒从两端双向测序,得到完整的HCV结构基因cDNA核苷酸序列,总长度为2238bp,与已发表的HCV序列长度一致,未发现缺失或移码突变,序列中间亦未发现转录终止子。本文序列与HCV1a,1b序列核苷酸的同源性分别为91.8%,84.5%。氨基酸的同源性分别为94.2%,86.3%。本文序列与HCV1a核苷酸及氨基酸的同源性均大于90%,应为HCV1a亚型。结论我国西部地区存在HCV1a亚型,所克隆HCV结构区cDNA克隆可以用于丙肝病毒研究和基因工程表达。

关键词：肝炎病毒,丙型基因结构,病毒病毒蛋白质类克隆,分子序列分析

来源：评论

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