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卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA表达及其抗菌活性的增强

中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 800-801页

作者：冯云黄宁吴琦王伯徭四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都 610041

目的:旨在分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)β-防御素-1(hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-15... 详细信息

目的:旨在分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)β-防御素-1(hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性.结果:RT-PCR和Northern杂交分析均证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强了2倍.卡介苗胞壁蛋白Sephadex G-150层析所得6个组分中,组分5(分子量范围约21×104-29×104)诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强4倍,其培养上清的抗菌活性显著增强.这种诱导作用具剂量和时间依赖关系.结论:结果提示卡介苗胞壁蛋白是β-防御素基因诱导表达的一新的激活因子.

关键词：卡介苗胞壁蛋白蛋白诱导人肺腺上皮细胞抗菌活性免疫增强剂逆转录聚合酶链反应蔗糖密度梯度离心培养上清基因表达时间依赖关系基因诱导表达防御素分离和鉴定组分粘膜杂交检测杂交分析激活因子活性蛋白方法

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中国病理生理学会炎症发热感染低温专业委员会第八届全国学术会议论文摘要发展炎症反应概念——哺乳动物抗菌肽及其基因表达调控研究

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 797-798页

作者：王伯瑶黄宁等四川大学华西医学医学中心感染免疫研究室，病理生理学教研室，四川成都610041 四川大学华西医学医学中心感染

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黄芩苷通过降低高脂血症大鼠肾小球核因子κB及可溶性单核细胞趋化蛋白表达抑制肾脏炎性反应

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中国动脉硬化杂志 2010年第8期18卷 611-613页

作者：李绚阎蓉华彭谨四川大学华西医学中心基础医学与法医医学院病理生理教研室感染免疫研究室四川省成都市610041 四川大学华西医学中心基础医学与法医医学院组胚教研室四川省成都市610041

目的观察黄芩苷对高脂血症实验性大鼠肾小球核因子κB及外周血单核细胞趋化蛋白1表达的干预作用。方法实验组动物采用高脂混合饲料+维生素D3喂养方式,建立高脂血症大鼠模型,黄芩苷组在制备模型同时选用20 mg/(kg.d)的黄芩苷水溶液灌胃,... 详细信息

目的观察黄芩苷对高脂血症实验性大鼠肾小球核因子κB及外周血单核细胞趋化蛋白1表达的干预作用。方法实验组动物采用高脂混合饲料+维生素D3喂养方式,建立高脂血症大鼠模型,黄芩苷组在制备模型同时选用20 mg/(kg.d)的黄芩苷水溶液灌胃,对照组喂以标准饲料。4周末测定血脂,取肾小球组织比较病理形态学变化,采用双抗体夹心ELISA法定量分析血清单核细胞趋化蛋白1水平,SABC免疫组织化学法检测肾小球核因子κB表达。结果黄芩苷组大鼠血清中总胆固醇、低密度脂蛋白量减少,单核细胞趋化蛋白1分泌降低,与模型组相比黄芩苷组肾小球病理改变有所减轻,核因子κB表达下调明显,两者间差异有统计学意义(P<0.01)。结论黄芩苷具有降低低密度脂蛋白含量,降低核因子κB在肾小球细胞内激活,下调单核细胞趋化蛋白1表达水平,调节血脂紊乱及抗炎的作用。

关键词：肾小球黄芩苷核因子κB 单核细胞趋化蛋白1

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双黄连注射液对血管内皮细胞NF-κB信号通道靶分子活性抑制作用的研究

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中国病理生理杂志 2005年第8期21卷 1652-1653页

作者：李绚阎蓉华罗照田吴琦贺荣华王伯瑶四川大学华西医学中心基础医学与法医医学院病理生理教研室、感染免疫研究室、钩体病防治研究室四川成都610041 The UT MD Anderson cancer Center Box 354HoustonTX77030 MDACC

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用.方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量... 详细信息

目的:探讨中药复方双黄连注射液对血管内皮细胞作用. 方法:用双黄连注射液与人脐静脉血管内皮细胞株(ECV-304)共同培养后,采用MTT法及形态学法观察双黄连注射液对人脐静脉血管内皮细胞的作用及细胞脱氧酶的活性,用Sandwich ELISA法定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量.

关键词：人脐静脉血管内皮细胞双黄连注射液 NF-κB活性活性抑制作用信号通道靶分子定量分析法 ELISA法内皮细胞株

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超抗原SEB和SEC诱导的树突状细胞对T细胞的影响

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中国病理生理杂志 2005年第6期21卷 1171-1176页

作者：邢飞跃李明申志华李岩暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632 四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都610041 广东医学院病理生理学教研室广东湛江524023

目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞... 详细信息

目的:阐明超抗原葡萄球菌肠毒素B(SEB)和葡萄球菌肠毒素C(SEC)诱导树突状细胞(dendriticcells,DC)促进T细胞活化、增殖、分泌及其对肝癌HcaF细胞的杀伤作用。方法:以SEB或SEC诱导DC刺激T细胞,免疫组化染色检测DC表达S-100蛋白;流式细胞术检测DC表达I-Eκ和CD80分子水平,检测T细胞受刺激后CD69的表达、IL-2和TNF-α的生成;用MTT法检测T细胞增殖及其对HcaF细胞的杀伤效应。结果:体外试验表明,DC高表达S-100蛋白,SEB或SEC诱导的DC高表达I-Eκ和CD80分子;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞活化,其浓度以100μg/L时作用最强;SEB或SEC能诱导DC促进T细胞增殖、大量分泌IL-2和TNF-α,被激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤率高达83.2%±12.8%,明显优于肿瘤抗原诱导的DC所激活的T细胞对HcaF细胞的杀伤作用;SEB与SEC的诱导作用无明显差异。结论:超抗原SEB或SEC能诱导DC显著增强T细胞活化、增殖、分泌和杀伤肿瘤细胞,并优于肿瘤抗原的诱导作用,SEB和SEC的作用相似,为超抗原SEB或SEC与DC联合应用于临床肿瘤的治疗提供了证据。

关键词：葡萄球菌肠毒素类树突状细胞 T淋巴细胞 HeaF细胞

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炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望

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四川生理科学杂志 2004年第4期26卷 145-148页

作者：王伯瑶吴琦黄宁四川大学华西医学中心感染免疫研究室和病理生理教研室成都610041

炎症本质上是机体细胞对有害刺激 (包括生物、化学和物理性刺激 )做出的保护性反应 ,但是炎症也应该被视为一柄“双刃剑” ,一方面对机体起到保护作用 ,另一方面也可能造成组织器官损伤。因此几乎在机体产生炎症反应的同时 ,就要启动抑... 详细信息

炎症本质上是机体细胞对有害刺激 (包括生物、化学和物理性刺激 )做出的保护性反应 ,但是炎症也应该被视为一柄“双刃剑” ,一方面对机体起到保护作用 ,另一方面也可能造成组织器官损伤。因此几乎在机体产生炎症反应的同时 ,就要启动抑制炎症的机制以控制炎症反应的强度 ,避免或减弱自身的损伤。炎症反应相关基因属于快速反应基因类型 ,可通过参加炎症信号转导通路被诱导表达 ,且是一个可调控的反应过程。近年来我们课题组对炎症反应相关基因表达的正相与负相调节进行了研究 ,现综述如下 ,并展望在新药研发中的应用。一、上皮细胞内源性抗菌肽基因的诱导表达及其信号转导　　内源性抗菌肽是天然免疫的重要介质 ,是炎症反应

关键词：炎症反应基因诱导表达信号转导分子机制基因表达

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香丹制剂对LPS诱导的血管内皮细胞NF-κΒ活性的影响

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四川中医 2008年第1期26卷 31-33页

作者：孔祥丽阎蓉华李绚罗照田吴琦王伯瑶四川大学口腔生物医学工程重点实验室四川成都610041 四川大学华西医学中心基础医学与法医医学院病理生理教研室感染免疫研究室四川成都610041 The UT MD Anderson cancer Center Box 354

目的:探讨中药复方香丹注射液对血管内皮细胞核转录因子NF-κB及抑制因子IκB活性的干预作用。方法:采用MTT法及形态学方法观察香丹注射液对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响,用Sandwich ELISA定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB... 详细信息

目的:探讨中药复方香丹注射液对血管内皮细胞核转录因子NF-κB及抑制因子IκB活性的干预作用。方法:采用MTT法及形态学方法观察香丹注射液对人脐静脉血管内皮细胞活性的影响,用Sandwich ELISA定量分析法和定量免疫细胞技术,检测NF-κB活性及胞浆内IκB含量。结果:有效剂量范围的香丹注射液能抑制血管内皮细胞的生长,拮抗NF-κB活性及抑制IκB降解(P<0.01)。结论:香丹注射液的抗炎作用可能与其拮抗NF-KBp65活化有关。

关键词：香丹注射液 LPS NF-κB IκB

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克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β-防御素-4基因表达及其信号转导

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 799-799页

作者：蔡绍晖陈新年黄宁王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都 610041

目的:从整体水平上探讨克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠肺脏表达β-防御素的信号转导.方法:分别给予Toll受体蛋白-4基因发生点突变的小鼠C3H/HeJ及其野生型C3H/HeN腹腔注射LPS(4 mg/kg),于不同时间点采取气管、肺、肾等组织提取总RNA,用... 详细信息

目的:从整体水平上探讨克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠肺脏表达β-防御素的信号转导.方法:分别给予Toll受体蛋白-4基因发生点突变的小鼠C3H/HeJ及其野生型C3H/HeN腹腔注射LPS(4 mg/kg),于不同时间点采取气管、肺、肾等组织提取总RNA,用RT-PCR检测各组织β-防御素-3和/或β-防御素-4 mRNA表达,并对扩增出的cDNA片段进行测序;同步用Western blot法检测该两系小鼠肺脏I-κBα磷酸化状况(p-IκBα)和I-κBα的含量.结果:经LPS处理24 h后的C3H/HeN小鼠,其肺脏表达β-防御素-4 mRNA,而C3H/HeJ小鼠在相同条件下未见表达;与未给予LPS处理小鼠比较,经LPS处理4 h后,C3H/HeN小鼠肺组织p-IκBα含量明显增高;LPS处理后8 h,p-IκBα以及IκBα含量均呈减少趋势;至第24 h,p-IκBα和IκBα含量均明显减少,提示转录因子NF-κB活化.而在相同条件下,C3H/HeJ小鼠肺组织p-IκBα及IκBα含量均未见相应变化,提示克雷伯氏肺炎杆菌内毒素不能诱导TLR-4基因突变小鼠NF-κB和β-防御素基因的表达.结论:Toll/NF-κB信号转导通路介导克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠肺脏表达β-防御素-4基因.

关键词：克雷伯氏肺炎杆菌内毒素诱导小鼠β 防御素基因基因表达含量肺组织信号转导通路肺脏处理组织提取转录因子突变小鼠受体蛋白检测腹腔注射野生型相应变时间点磷酸化

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重组人β-防御素-2基因在昆虫细胞的转染表达

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 800-800页

作者：蔡绍晖黄宁王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都 610041

目的:BEVS(Baculovirus expression vector system)杆状病毒表达系统是近年涌现的适用范围最广、表达效率最高的真核表达系统之一.本研究旨在探索应用该系统高效表达hBD-2的可行性及技术路线.方法:(1)利用引物hBD2p6和hBD2p9经PCR扩增,... 详细信息

目的:BEVS(Baculovirus expression vector system)杆状病毒表达系统是近年涌现的适用范围最广、表达效率最高的真核表达系统之一.本研究旨在探索应用该系统高效表达hBD-2的可行性及技术路线.方法:(1)利用引物hBD2p6和hBD2p9经PCR扩增,从原质粒的pcDNA3.1/Myc-His(+)/hBD-2中扩增出带有翻译起始密码ATG和终止密码TGA的完整重组hBD-2/His基因片段,通过双酶切,使该片段两端分别带有ScaI和KpnI两种限制性内切酶粘性末端;将此外源性片段插入转移质粒pAcGHLT-A的多克隆位点中的ScaI和KpnI位点上,使其处在多角蛋白基因强启动子的控制之下.(2)经重组pAcGHLT-A/hBD-2/His转移载体和AcNPV DNA共转染Sf21细胞,并在细胞内进行同源重组,形成重组病毒rAcNPVhBD-2/His.于共染后第5 d,收集各组细胞的培养上清,用终点稀释分析法检测共转染效率.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞和终点稀释分析法验证,获得高滴度的重组病毒.(3)用特异性抗-His抗体,经Western blot检测细胞及上清hBD-2/His的表达情况.结果:经酶切鉴定和测序分析证实:C端带Myc和6个多聚组氨酸双重标志的重组hBD-2已正确地插入BEVS系统的转移载体中,构建成重组转移载体pAcGHLT-A/hBD-2/His.经过多轮感染上清反复感染Sf21细胞及终点稀释分析法验证,高滴度的重组病毒rAcNPVhBD-2/His已被获得.Western blot检测结果提示Sf21细胞已表达和分泌6xHis-GST-hBD-2-6xHis融合蛋白.结论:本研究结果支持利用BEVS杆状病毒-昆虫表达系统作为高效表达重组hBD-2生物反应器的设想.

关键词：重组人β 防御素角蛋白基因昆虫细胞转移载体重组病毒杆状病毒表达系统分析法 expression vector 高效表达反复感染真核表达系统限制性内切酶稀释昆虫表达系统检测共转染生物反应器转移质粒转染效率

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卡介苗增强人肺腺上皮细胞Fall-39 mRNA表达及其抗菌活性

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 801-801页

作者：朱玲冯云黄宁王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室病理生理学教研室四川成都 610041

目的:Fall-39是Cathelicidine家庭中唯一存在人体内的抗菌肽,具有广谱抗菌活性和细胞毒性,对天然免疫与获得性免疫均发挥作用,因此在抗生素肽开发领域日益受到重视,本研究观察卡介苗能否增强人肺腺上皮细胞表达Fall-39.方法:根据GenBan... 详细信息

目的:Fall-39是Cathelicidine家庭中唯一存在人体内的抗菌肽,具有广谱抗菌活性和细胞毒性,对天然免疫与获得性免疫均发挥作用,因此在抗生素肽开发领域日益受到重视,本研究观察卡介苗能否增强人肺腺上皮细胞表达Fall-39.方法:根据GenBank中人Fall-39的cDNA序列资料,设计特异性引物,应用RT-PCR的方法检测mRNA的表达.超声击粹、蔗糖密度梯度离心及SDS抽提等步聚提取卡介苗胞膜蛋白,Sephadex G-75柱层析粗分其不同分子量蛋白.结果:卡介苗的确可刺激人肺腺上皮细胞Fall-39 mRNA的增强表达,这种增强表达具刺激物剂量和时间依赖性.BCG 100 mg/L刺激8 h时,Fall-39 mRNA表达量达到最高.BCG胞壁蛋白经Sephadex G-75柱层析,获得的组分4(分子量范围约2.1-2.9 kD)刺激SPC-A-1细胞后Fall-39 mRNA的表达增强了8.5倍.培养细胞上清抗菌试验显示被刺激细胞培养上清的抗菌活性亦明显增强.结论:结果提示除细菌LPS外,BCG胞壁蛋白亦是Fall-39基因的激活因子,可诱导其基因的上调表达.

关键词：卡介苗增强人肺腺上皮细胞蔗糖密度梯度离心抗菌活性胞壁蛋白柱层析分子量特异性引物时间依赖性获得性免疫序列资料细胞毒性细胞表达天然免疫上调表达培养细胞培养上清抗菌试验开发领域

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