检索结果-内蒙古大学图书馆

Acta Pharmacologica Sinica 2003年第9期24卷 69-74+112页

作者：祝秉东冯云黄宁吴琦王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都 610041 中国

目的:检测卡介苗(BCG)胞壁蛋白对人β-防御素-1(hBD-1)基因表达的影响,并初步分析该基凶5′-端旁侧区中的BCG作用元件。方法:经Sephadex G-150层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交分析法检测hB... 详细信息

目的:检测卡介苗(BCG)胞壁蛋白对人β-防御素-1(hBD-1)基因表达的影响,并初步分析该基凶5′-端旁侧区中的BCG作用元件。方法:经Sephadex G-150层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交分析法检测hBD-1 mRNA在肺腺上皮细胞的表达,系列逐渐缩短的hBD-1基因5′-端序列被连接入无启动子的pCAT Basic质粒,构建了CAT报告质粒,ELISA法检测报告基因表达。结果:热灭活的BCG全菌(50mg/L)及分子量在18-30 kDa的胞壁蛋白组份(3mg/L)刺激SPC-A-1细胞8h后,hBD-1 mRNA表达明显增强,hBD-1基因-314到+54区域具有BCG诱导的转录活性,其中含有转录因子C/EBPβ、AP-1、CP2结合位点。结论:BCG胞壁蛋白组份(18-30 kDa)能够增强SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA表达,其基因上游序列(-314/+54)含有C/EBPβ、AP-1、CP2结合位点,与BCG的诱导作用有关。

关键词：卡介苗防御素基因表达呼吸道粘膜上皮细胞牛分枝杆菌

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人LAK细胞免疫效应分子HMGN2的鉴定

引用

生物化学与生物物理进展 2005年第6期32卷 568-575页

作者：冯云熊文碧王国兴黄宁吴琦鲍朗李绚王伯瑶四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测... 详细信息

为分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK)小分子抗菌多肽,应用制备尿素-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反向高效液相色谱技术分离纯化人LAK细胞酸溶性提取物,纯化出一个具抗菌活性的多肽HLP-3p21.蛋白质N端氨基酸测序、质谱精确分子质量测定、蛋白质印迹分析证明HLP-3p21为HMGN2.最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)试验证明HMGN2有抗大肠杆菌ML-35p氨苄青霉素耐药株、铜绿假单胞菌ATCC27853、白色念珠菌ATCC10231活性,无抗金黄色葡萄球菌ATCC25923活性.制备HMGN2多克隆抗体,应用免疫荧光化学、酶联免疫吸附测定和蛋白质印迹方法对HMGN2进行定位分析,证明单个核细胞经IL-2刺激成为LAK细胞时部分HMGN2由胞核转移至胞浆,进而分泌到胞外.提示HMGN2是LAK细胞一个新的免疫效应分子.

关键词： LAK细胞 HMGN2 抗菌活性免疫活性多肽

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人抗菌肽HBD-2的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定

引用

生物医学工程学杂志 2005年第3期22卷 575-579页

作者：王国兴冯云吴琦阎蓉华李洵王伯瑶黄宁四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物... 详细信息

制备人β-防御素2(HBD-2)多克隆抗体,以用于HBD-2蛋白水平表达的检测。提取人肠腺上皮细胞株Caco-2总RNA,设计引物,应用RT-PCR从其总RNA中扩增HBD-2成熟肽cDNA片段,以pGEX-1λT为载体,构建原核表达质粒pGEX-1λT-HBD-2。大肠杆菌裂解物经亲合层析纯化后获得分子量约30kDa的融合蛋白,将此融合蛋白免疫新西兰兔,并用正辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,ELISA法显示抗血清对HBD-2的效价为1∶12800,Western印迹显示抗血清可识别HBD-2。本实验结果证明应用重组融合小肽代替白蛋白或甲状腺-肽偶联免疫可获得其高效价的识别HBD-2的多克隆抗体,为今后从蛋白质水平研究HBD-2基因的诱导表达,包括组织分布和基因表达调控等研究打下了基础。

关键词：人抗菌肽 HBD-2 原核表达多克隆抗体制备工艺 β-防御素2 天然免疫

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人LAK细胞抗菌活性多肽HLP-3P21的分离纯化和鉴定

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2003年第4期23卷 241-243页

作者：杨华蓉黄宁吴琦王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

目的　分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽 ,鉴定其分子特性 ,检测其抗菌活性。方法　采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,并用IL 2和PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术... 详细信息

目的　分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽 ,鉴定其分子特性 ,检测其抗菌活性。方法　采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞 ,并用IL 2和PHA刺激培养。 5 %乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物。应用制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽 ,Tricine SDS PAGE鉴定其相对分子质量 (Mr) ,运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性 ,采用Edman降解法测定其氮端序列 ,并进行肽质谱分析。结果　从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出一多肽 ,Tricine SDS PAGE表观Mr 为 17× 10 3,命名为HLP 3P2 1(humanlymphocytepeptide) ,具有抗致病性大肠杆菌ML 35P及铜绿假单胞菌ATCC6 5 92 2的活性。其氮端序列为PKRKAEGDAK ,肽质谱的检索分析未发现匹配度大于 5 0 %的蛋白质分子。结论　HLP 3P2 1可能为LAK细胞一新的抗菌效应分子。

关键词：人LAK细胞抗菌活性多肽 HLP-3P21 分离纯化鉴定

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结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达及鉴定

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卫生研究 2006年第2期35卷 152-154页

作者：赵明才鲍朗吴悦涵张会东四川大学华西医学中心感染与免疫研究室成都610041

目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础。方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础。方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫新西兰大白兔获取多价抗体。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv2994基因,成功构建了融合表达质粒pGEX-Rv2994,转化大肠杆菌JM109后,经IPTG诱导,表达出约73kDa重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体。结论成功构建了原核表达载体pGEX-2994,获得并纯化了GST-Rv2994融合蛋白,制备了高效价的多价血清,为Rv2994基因的功能研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2994基因喹诺酮药物耐受性

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结核疫苗优势抗原ESAT6、CFP10的分子生物学基础及应用研究进展

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生物医学工程学杂志 2012年第2期29卷 392-396页

作者：范琴(综述) 鲍朗(审校) 四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

早期分泌抗原靶分子6(ESAT6,后简称E6)和培养滤液蛋白10(CFP10,后简称C10)因能诱导宿主产生强烈细胞免疫应答,成为新型结核(TB)疫苗的热门优势抗原,在TB的预防、诊断等领域具有广阔的应用前景。本文汇集国际最新进展,从E6、C10的结构-... 详细信息

早期分泌抗原靶分子6(ESAT6,后简称E6)和培养滤液蛋白10(CFP10,后简称C10)因能诱导宿主产生强烈细胞免疫应答,成为新型结核(TB)疫苗的热门优势抗原,在TB的预防、诊断等领域具有广阔的应用前景。本文汇集国际最新进展,从E6、C10的结构-功能、生物学特性、表达-分泌、宿主免疫及疫苗研究等全新视角对其进行分析与展望。

关键词：早期分泌抗原靶分子6 培养滤液蛋白10 结构-功能分泌调控免疫机制结核疫苗

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高迁移率蛋白-17(HMG-17)基因重组多肽的制备及其抗菌结构域的研究

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生物医学工程学杂志 2005年第4期22卷 773-777页

作者：冯云杨华蓉黄宁吴琦鲍朗王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

为构建HMG-17原核表达系统,研究HMG-17抗菌功能与结构的关系,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR扩增HMG-17和HMG-17α螺旋结构成熟肽cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMG-17和HMG-17α螺旋结构基因大肠杆菌表达载体。该载体... 详细信息

为构建HMG-17原核表达系统,研究HMG-17抗菌功能与结构的关系,提取人LAK细胞总RNA,设计合成相应引物,应用RT-PCR扩增HMG-17和HMG-17α螺旋结构成熟肽cDNA,以pGEX-1λT为载体,构建HMG-17和HMG-17α螺旋结构基因大肠杆菌表达载体。该载体表达的融合蛋白GST-HMG-17和GST-HMG-17α经亲合层析、凝血酶酶切、AU-PAGE胶回收后获得高度纯化的HMG-17和HMG-17α肽,对纯化产物进行MEC、MIC、MBC等试验,与杀菌活性较强的抗菌肽HNP-1、NP-1进行活性对比,证明其具有较强的杀菌活性,且具有盐敏感性。并证明了HMG-17的α结构域是HMG-17的主要抗菌功能区域。

关键词： HMG-17 HMG-17α螺旋结构原核表达抗菌功能区抗菌功能重组多肽结构基因融合蛋白结构域迁移率

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人β防御素-2与前列腺癌特异性膜抗原嵌合蛋白真核表达质粒构建及其诱导的小鼠特异性免疫应答

引用

生物医学工程学杂志 2005年第2期22卷 283-287页

作者：李明孙艳冯云吴琦黄宁王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室成都610041

探索人β防御素2 (h BD- 2 )和前列腺特异性膜抗原(PSMA)共表达重组核酸疫苗针对前列腺癌的免疫治疗。研究以pc DNA3.1为载体,构建重组质粒pc DNA3.1/PSMA和pc DNA3.1/h BD- 2 - PSMA,通过RT- PCR和免疫组化检测其表达。免疫小鼠后,进... 详细信息

探索人β防御素2 (h BD- 2 )和前列腺特异性膜抗原(PSMA)共表达重组核酸疫苗针对前列腺癌的免疫治疗。研究以pc DNA3.1为载体,构建重组质粒pc DNA3.1/PSMA和pc DNA3.1/h BD- 2 - PSMA,通过RT- PCR和免疫组化检测其表达。免疫小鼠后,进行血清中抗体检测,CD4 +、CD8+ T淋巴细胞数目测定及CTL 特异性杀伤作用检测。结果显示构建的质粒转染COS- 7细胞后能表达目的基因,免疫小鼠后能在体内持久表达,可以诱导产生特异性抗体,能有效的刺激T细胞增生,诱导特异性CTL 反应。当以h BD- 2作为免疫佐剂时,CTL 活性更强。本研究成功的构建了含PSMA的表达质粒,免疫小鼠可以诱导出有效的体液和细胞免疫。

关键词：人β防御素2 前列腺特异性膜抗原核酸疫苗免疫小鼠前列腺癌质粒构建特异性免疫应答防御素真核表达嵌合蛋白

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人宫颈黏液HMGN2鉴定及在宫颈组织的表达

引用

生物化学与生物物理进展 2008年第5期35卷 577-583页

作者：王莉莉何跃东黄宁李明熊文碧冯云吴琦王伯瑶潘小玲四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041 四川大学华西第二医院成都610041

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱... 详细信息

为探讨人子宫颈黏液的抗菌机制,采用酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳和反相高压液相色谱技术,从人子宫颈黏液酸溶性提取物鉴定出对大肠杆菌氨苄青霉素耐药株ML-35p有较强的抗菌活性的多肽HCP-21和HCP-26.蛋白质N端氨基酸序列测定和精确质谱分子质量测定证明,HCP-21为HMGN2,HCP-26为SLPI片段.提取原代培养宫颈上皮细胞的总RNA,采用RT-PCR技术扩增出一条与HMGN2 cDNA大小相同(270bp)目的基因片段,表明在生理状况下,宫颈上皮细胞即可表达其mRNA.制备HMGN2多克隆抗体,对生理状态下宫颈组织切片和宫颈黏液涂片进行HMGN2分子免疫组化分析表明,该分子主要分布于子宫颈黏膜层,并存在于子宫颈黏液.HMGN2分子在宫颈黏膜上皮组织和黏液中固有表达,可能在子宫颈天然免疫防御中起重要作用.

关键词：女性生殖道子宫颈抗菌肽 HMGN2

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大肠杆菌感染对大鼠肺组织β-防御素-2基因表达的负相调节作用

引用

中国病理生理杂志 2002年第1期18卷 83-85,I005页

作者：陈新年黄宁吴琦王伯瑶四川大学华西医学中心感染免疫研究室

目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -... 详细信息

目的 :探讨细菌对大鼠 β -防御素 - 2 (rBD - 2 )基因的表达调控。方法 :将大肠杆菌E .coliML -35p和绿脓杆菌ATCC 2 785 3大鼠气管内接种 ,于 2 4h后提取肺组织RNA ,用逆转录 -聚合酶链反应 (RT -PCR)法和Northernblot检测大鼠 β -防御素 - 2基因的表达变化。结果 :气管内接种大肠杆菌 2 4h后使大鼠肺组织 β -防御素- 2mRNA的表达受到显著抑制 ,绿脓杆菌对其基因的表达却没有抑制作用。结论 :大肠杆菌感染可负相调节大鼠肺组织rBD - 2mRNA的表达。

关键词：肺感染基因表达肠杆菌科 β-防御素-2基因炎症反应

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