检索结果-内蒙古大学图书馆

四川生理科学杂志 2005年第4期27卷 147-149页

作者：马懿冯云李恒黄宁吴琦王伯瑶四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室四川成都610041

目的:构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:用基因克隆的方法构建pET-32 a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法纯化H is-HMGN2融合蛋白,Tric ine-SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,行琼脂糖弥散法检测... 详细信息

目的:构建HMGN2重组表达载体,探讨HMGN2分子抗菌作用。方法:用基因克隆的方法构建pET-32 a-c(+)-HMGN2重组表达质粒,经IPTG诱导表达后,用亲和层析的方法纯化H is-HMGN2融合蛋白,Tric ine-SDS-PAGE电泳鉴定其分子量,行琼脂糖弥散法检测其抗菌功能。结果:成功构建了pET-32 a-c(+)-HMG17重组表达质粒,其表达的融合蛋白对致病性大肠杆菌54080,54299以及金黄色葡萄球菌ATCC25923均有抗菌活性。结论:HMGN2是一种抗菌分子,可能参与了体内的天然免疫防御作用。

关键词： HMGN2 重组表达质粒抗菌功能抗菌作用功能研究 SDS-PAGE电泳致病性大肠杆菌琼脂糖弥散法金黄色葡萄球融合蛋白

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炎症反应相关基因诱导表达的信号转导与新药研发的展望

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四川生理科学杂志 2004年第4期26卷 145-148页

作者：王伯瑶吴琦黄宁四川大学华西医学中心感染免疫研究室和病理生理教研室成都610041

炎症本质上是机体细胞对有害刺激(包括生物、化学和物理性刺激)做出的保护性反应,但是炎症也应该被视为一柄'双刃剑',一方面对机体起到保护作用,另一方面也可能造成组织器官损伤.因此几乎在机体产生炎症反应的同时,就要启动抑... 详细信息

炎症本质上是机体细胞对有害刺激(包括生物、化学和物理性刺激)做出的保护性反应,但是炎症也应该被视为一柄'双刃剑',一方面对机体起到保护作用,另一方面也可能造成组织器官损伤.因此几乎在机体产生炎症反应的同时,就要启动抑制炎症的机制以控制炎症反应的强度,避免或减弱自身的损伤.炎症反应相关基因属于快速反应基因类型,可通过参加炎症信号转导通路被诱导表达,且是一个可调控的反应过程.近年来我们课题组对炎症反应相关基因表达的正相与负相调节进行了研究,现综述如下,并展望在新药研发中的应用.

关键词：炎症反应基因诱导表达信号转导分子机制基因表达

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结核杆菌检测基因芯片的制备研究

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 754-754页

作者：张万江鲍朗王晓樱谢勇恩陈玮张会东于向华四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都 610041

目的:建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术.方法: 靶基因的制备、标记,用点样仪点于玻片介质上,并经过点样后处理制成基因芯片,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化,计算DNA固定率,分别设计了不同的玻片,不同的点液,不同的点样后... 详细信息

目的:建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术.方法: 靶基因的制备、标记,用点样仪点于玻片介质上,并经过点样后处理制成基因芯片,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化,计算DNA固定率,分别设计了不同的玻片,不同的点液,不同的点样后处理方法的固定率的测定.结果:对结核杆菌检测基因芯片制备的条件和方法优化实验表明,用醛基修饰玻片作为介质,点样液用DMSO溶液作为点样液,点样后芯片处理,以水合1 h再干燥30 min为佳.结论:本研究建立的结核杆菌检测基因芯片的制备技术有较高的效率和可靠的实用性能.

关键词：结核杆菌检测基因芯片制备

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兔胸腺HMGN2的分离纯化鉴定

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四川生理科学杂志 2008年第1期30卷 1-2页

作者：石艳娥李恒彭媛媛邓璐霞周新娥赵媛黄宁四川大学华西医学中心基础医学与法医学院感染免疫研究室成都610041

目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳... 详细信息

目的:分离纯化鉴定兔高迁移率非组蛋白N2(High mobility group chromosomal protein N2,HMGN2)。方法:利用液氮研磨和5%高氯酸从新鲜兔胸腺组织获得酸溶性萃取物,经反相高效液相色谱(RP-HPLC)分离得到HMGN2,经过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blotting对HMGN2进行分子量测定和特异性鉴定。并利用琼脂糖弥散抑菌实验对其杀菌活性进行鉴定。结果:利用上述方法分离纯化出高纯度的兔HMGN2。对大肠埃希菌临床分离株54080、大肠埃希菌ATCC25922有明显杀菌活性。结论:建立简单分离高纯度的HMGN2的方法。

关键词：兔胸腺 HMGN2 分离

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结核分枝杆菌ESAT-6基因重组卡介苗的构建与鉴定

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 808-808页

作者：陈玮鲍朗谢勇恩四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都 610041

目的:ESAT-6是结核分枝杆菌的一种分泌性蛋白质,具有免疫保护作用,可作为抗结核病新疫苗的候选分子.而卡介苗由于缺失ESAT-6基因,不能产生该抗原蛋白.本研究旨在构建ESAT-6基因重组卡介苗,使其表达ESAT-6抗原,从而增强其免疫原性和免疫... 详细信息

目的:ESAT-6是结核分枝杆菌的一种分泌性蛋白质,具有免疫保护作用,可作为抗结核病新疫苗的候选分子.而卡介苗由于缺失ESAT-6基因,不能产生该抗原蛋白.本研究旨在构建ESAT-6基因重组卡介苗,使其表达ESAT-6抗原,从而增强其免疫原性和免疫保护性,探索将该重组卡介苗用作新型结核病疫苗的可行性.方法:分别以卡介苗(BCG)和结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA为模板,经PCR扩增得到BCGα-抗原(α-Ag)信号肽序列和结核杆菌ESAT-6基因,将ESAT-6基因与大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒载体pMV261重组,得到重组质粒pME.再将BCGα-Ag信号肽序列克隆至pME中,得到重组质粒pSME.最后通过电穿孔法将pSME导入卡介苗中,并用抗性筛选、PCR扩增及打点杂交进行鉴定.结果:电转化后的卡介苗能在含10 mg/L卡那霉素的培养基上生长.以重组卡介苗总DNA为模板的PCR扩增得到阳性扩增带,大小与α-Ag信号肽序列加上ESAT-6基因的长度一致.打点杂交中探针与重组卡介苗显示阳性信号.结论:基因重组卡介苗构建成功,并有望分泌性表达结核分枝杆菌的免疫保护性抗原蛋白ESAT-6.该重组卡介苗既保留了卡介苗中原有的抗原,又增添了新的保护性抗原,且这种抗原可被广泛识别,能强烈诱导宿主T淋巴细胞增殖和持久的免疫记忆,因此ESAT-6重组卡介苗可能具有更好的免疫原性和保护力.本研究为改造卡介苗、发展新型结核病疫苗奠定了基础.

关键词：结核分枝杆菌基因重组卡介苗保护性抗原免疫保护性结核病疫苗信号肽重组质粒免疫原性扩增抗原蛋白打点杂交免疫保护作用分泌性表达质粒载体阳性序列克隆细胞增殖模板免疫记忆

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赖型钩端螺旋体与非致病钩端螺旋体差异基因片段的筛选与鉴定

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中国病理生理杂志 2001年第8期17卷 807-807页

作者：胡昌华鲍朗谢勇恩李学敏陈玮张会东四川大学华西医学中心感染免疫研究室四川成都 610041

目的:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),比较致病与非致病钩体之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段,以分析钩体毒力相关基因.方法:以赖型钩体017株为tester,非致病性patoc Ⅰ株为driver进行SSH... 详细信息

目的:利用抑制消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH),比较致病与非致病钩体之间基因组差异,筛选致病钩体特有的基因片段,以分析钩体毒力相关基因.方法:以赖型钩体017株为tester,非致病性patoc Ⅰ株为driver进行SSH.用3种四碱基内切酶RsaⅠ、HaeⅢ、AluⅠ分别酶切基因组DNA,选择最适内切酶消化产物(小于2 kb的片段),连接特殊设计的Adaptor进行消减杂交的PCR,得到消减混合物,与T/A克隆载体连接,转化JM109建立差异消减文库,经PCR和Southern blotting筛选鉴定阳性克隆,进而对部分片段进行测序和相似性分析.结果:AluⅠ适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段;经PCR和Southern blotting筛选鉴定得到25个致病钩体中特异存在的阳性克隆,阳性率达到62.5%;序列测定显示插入片段大小为149-1 506 bp,平均480 bp, GC含量从26.30%到51.98%不等,平均36.63%;相似性分析其中6个片段无任何相似性匹配,18个有一定相似性的序列可分为两类:与外膜蛋白或假想蛋白相关和与生化代谢修饰的酶相关.20个序列已被GeneBank收录,收录号分别为AF300873-AF300877,AF325807-AF325821.结论:SSH是一种有效、灵敏的、高特异的比较分析基因组差异的方法,对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义;利用SSH技术筛选得到的致病钩体特有消减片段很可能与致病钩体的分子进化和毒力有关,也为我国特有微生物的基因资源开发和基因工程疫苗的设计提供给了重要信息.

关键词：钩端螺旋体基因片段筛选鉴定 subtractive hybridization 相似性分析基因组差异抑制消减杂交技术阳性克隆内切酶基因工程疫苗毒力相关基因相似性匹配资源开发致病基因遗传研究序列测定消减文库外膜蛋白特殊设计收录

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卡介苗胞壁蛋白诱导THP-1细胞IL-12mRNA表达

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四川生理科学杂志 2003年第1期25卷 24-26页

作者：唐琼孔祥丽杨云霞冯云吴琦王伯瑶四川大学华西医学中心基础与法医学院感染免疫研究室药理教研室成都610041 四川大学华西医学中心基础与法医学院成都610041

目的 :研究卡介苗 (BCG)能否诱导人单核白细胞系细胞THP 1、IL 1 2P40基因表达 ,并鉴定其胞壁蛋白的活性组份。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测THP 1细胞IL 1 2P40mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephad... 详细信息

目的 :研究卡介苗 (BCG)能否诱导人单核白细胞系细胞THP 1、IL 1 2P40基因表达 ,并鉴定其胞壁蛋白的活性组份。方法 :应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)法检测THP 1细胞IL 1 2P40mRNA的表达 ;采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadexG 1 5 0柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份。结果 :卡介苗胞壁蛋白SephadexG 1 5 0柱层析所得组分中 ,分子量范围约 2 1～ 2 9kD的组份诱导THP 1细胞IL 1 2P40mR NA的表达增强。结论 :结果显示BCG胞壁蛋白可刺激白细胞IL 1 2P40基因的表达。

关键词：卡介苗胞壁蛋白诱导 THP—l细胞 IL-l2 mRNA 表达

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负载超抗原SEB/SEC的树突状细胞体外抗肝癌实验研究

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西部医学 2004年第2期16卷 105-107页

作者：李明李岩邢飞跃四川大学华西医学中心感染免疫研究室在读博士四川成都610041 通讯作者:暨南大学教育部组织移植与免疫重点实验室广东广州510632

目的　研究负载金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcalenterotoxinC ,SEC)的DC在体外对T细胞的活化能力及其对肝细胞癌HcaF细胞的杀伤作用。方法　以SEB/SEC负载DC刺激T细胞 ... 详细信息

目的　研究负载金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcalenterotoxinB ,SEB)和金黄色葡萄球菌肠毒素C(staphylococcalenterotoxinC ,SEC)的DC在体外对T细胞的活化能力及其对肝细胞癌HcaF细胞的杀伤作用。方法　以SEB/SEC负载DC刺激T细胞 ,流式细胞仪 (flowcytometer ,FCM )检测T细胞受刺激后其早期活化标志CD69表达情况和IL 2水平 ,采用MTT法检测T细胞增殖水平和其对HcaF细胞的杀伤效应。结果　SEB/SEC联合DC在体外能明显激活T细胞 ,以浓度为 10 0ng/ml时作用最强 ;SEB/SEC联合DC可以使T细胞活化、增殖并大量分泌IL 2 ,对HcaF细胞的杀伤率高达 83 .2± 12 .8%。以SE作为刺激物负载的DC较以Tag作为刺激物负载的DC有更强的活化T细胞的能力 ;结论　根据以上结果 ,可以认为SEB/SEC联合DC具有很强的刺激T细胞活化的能力 ;其活化的T细胞具有很强的杀瘤作用 ,在肿瘤免疫治疗方面展现出良好的潜在应用前景。

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素树突状细胞 CD69 IL-2 HcaF

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结核分枝杆菌突变gyrase A基因原核表达载体的构建与鉴定

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川北医学院学报 2006年第4期21卷 301-303页

作者：赵明才鲍朗川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充637000 四川大学华西医学中心感染与免疫研究室四川成都610041

目的构建结核分枝杆菌Ser95Thr突变DNA促旋酶A(DNA gyrase A)基因原核表达载体并鉴定,为进一步研究奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用重叠延伸剪切技术,分别通过3次PCR扩增Ser95Thr突变gyrase A基因编码序列,定向克... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌Ser95Thr突变DNA促旋酶A(DNA gyrase A)基因原核表达载体并鉴定,为进一步研究奠定基础。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用重叠延伸剪切技术,分别通过3次PCR扩增Ser95Thr突变gyrase A基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pET-32 a(+),获得重组表达质粒pET-mgyr。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Ser95Thr突变gyrase A基因,经过酶切、PCR和测序鉴定,表明突变gyrase A基因正确地插入原核表达载体pET-32 a(+)。结论成功构建了原核表达载体pET-mgyr,为Ser95Thr突变gyrase A基因的功能研究奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 gyrase A基因克隆

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结核分枝杆菌Rv2994基因重组穿梭质粒的构建与鉴定

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川北医学院学报 2006年第3期21卷 211-214页

作者：赵明才鲍朗吴悦涵张会东川北医学院附属医院风湿免疫研究所四川南充637007 四川大学华西医学中心感染与免疫研究室四川成都610041

目的构建结核分枝杆菌假想药物外排泵蛋白编码基因Rv2994的重组穿梭质粒pMV-2994,并对其进行鉴定。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用PCR技术扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT,获得重组表达质粒... 详细信息

目的构建结核分枝杆菌假想药物外排泵蛋白编码基因Rv2994的重组穿梭质粒pMV-2994,并对其进行鉴定。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,应用PCR技术扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT,获得重组表达质粒pGEX-2994,测序鉴定。酶切该基因片段,定向重组入大肠杆菌-分枝杆菌穿梭载体pMV261,构建重组质粒pMV-2994,通过限制性内切酶酶切及PCR鉴定。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出的Rv2994基因与GenBank公布的序列一致,经过酶切及PCR鉴定,表明Rv2994基因成功插入了pMV261穿梭载体。结论成功构建了重组穿梭质粒pMV-2994,为进一步研究Rv2994基因功能奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 Rv2994基因穿梭载体

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