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中华实验外科杂志 2005年第3期22卷 281-283,i003页

作者：孔清泉杨志明项舟罗静聪四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨离心力对软骨细胞功能表达和组织工程软骨结构的影响。方法采用组织化学和免疫组织化学观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原表达情况,应用DMMB分光法测定组织工程软骨硫酸化糖胺多糖(GAG)的含量。结果体外培养2、4、8周时,静态培... 详细信息

目的探讨离心力对软骨细胞功能表达和组织工程软骨结构的影响。方法采用组织化学和免疫组织化学观察组织工程软骨结构以及Ⅱ型胶原表达情况,应用DMMB分光法测定组织工程软骨硫酸化糖胺多糖(GAG)的含量。结果体外培养2、4、8周时,静态培养的组织较离心培养的组织Ⅱ胶原免疫组织化学染色弱;并且其GAG含量低于离心培养组织GAG含量,各组差异均有统计学意义(F分别为12.3、10.2、9.1,P<0.05)。离心培养的组织工程软骨GAG含量于第4周达到高峰,均值为(7.60±0.79)%。结论离心力刺激软骨细胞分泌GAG和Ⅱ型胶原,并且影响组织工程软骨结构的排列。

关键词：组织工程软骨骨结构 Ⅱ型胶原体外软骨细胞含量色弱静态培养功能表达分泌

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三种生物骨衍生材料修复节段性骨缺损的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2005年第2期19卷 118-123页

作者：李彦林杨浩韩睿李林芝李秀群李世和赵晓霞昆明医学院第一附属医院骨科昆明650032 四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室:干细胞与组织工程研究室

目的　评价 3种生物骨衍生材料修复节段性骨缺损的成骨作用。　方法　将 6 0只健康日本大耳白兔双侧桡骨中段制成 10 mm节段性骨缺损 ,并随机分为 A、B、C、D和 E组 ,每组 12只 ,其中 A组植入复合型完全脱蛋白骨 (composite fully depro... 详细信息

目的　评价 3种生物骨衍生材料修复节段性骨缺损的成骨作用。　方法　将 6 0只健康日本大耳白兔双侧桡骨中段制成 10 mm节段性骨缺损 ,并随机分为 A、B、C、D和 E组 ,每组 12只 ,其中 A组植入复合型完全脱蛋白骨 (composite fully deproteinised bone,CFDB)、B组植入部分脱蛋白骨 (partially deproteinised bone,PDPB)、C组植入部分脱钙骨 (partially decalcified bone,PDCB)修复兔桡骨节段性缺损 ,D组自体髂骨移植 ,E组以空白缺损为对照 ,于术后4、8、12及 2 4周取材 ,通过 X线摄片和不脱钙硬组织切片检测 ,评价 3种材料的成骨作用。　结果　 X线摄片观察 :A、B与 C组 4周时材料密度较高 ;8周时材料与宿主骨交界处模糊 ;12周时材料边缘部分区域密度接近宿主骨 ;2 4周时 B组髓腔再通 ,C组缺损区域密度大部分接近宿主骨 ,有少许高密度影 ,A组缺损区域有较多高密度影。 X线片评分 4周和8周时各材料组无统计学差异 (P>0 .0 5 ) ;12周时 B组和 C组高于 A组 (P<0 .0 5 ) ;2 4周时 D组 >B组 >C组 >A组(P<0 .0 5 )。经组织学形态观察可见 4周和 8周时新骨贴附材料生长 ;以后新骨增多 ;材料随着时间的推移逐渐降解吸收 ;2 4周时成骨量 D组 >B组 >C组 >A组 (P<0 .0 5 )。　结论　 PDPB修复节段性骨缺损的效果佳 ,

关键词：节段性骨缺损植入修复桡骨 X线摄片成骨作用宿主生物蛋白硬组织

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低温保存的组织工程化骨修复骨缺损的形态学研究

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中国临床康复 2005年第2期9卷 36-38,i001页

作者：罗晓中杨志明邓力李秀群四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

目的:目前的研究主要集中在组织工程化骨的构建方面,而组织工程化骨要在外科手术中随时应用,必然涉及长期保存,为此探讨低温保存的组织工程化骨修复骨缺损的能力以及低温保存组织工程化骨的可行性。方法:将人源性生物衍生骨材料复合成... 详细信息

目的:目前的研究主要集中在组织工程化骨的构建方面,而组织工程化骨要在外科手术中随时应用,必然涉及长期保存,为此探讨低温保存的组织工程化骨修复骨缺损的能力以及低温保存组织工程化骨的可行性。方法:将人源性生物衍生骨材料复合成骨细胞构建的组织工程化骨,在4℃和-196℃的温度环境中保存3个月和6个月,同时以未行低温保存的组织工程化骨和生物衍生骨材料作为对照,分别修复实验兔桡骨的长段骨缺损,于术后2,4,6,12周时各处死4只动物取材,行大体和组织学观察。结果:4℃和-196℃的温度保存组和未行保存的组织工程化骨组在动物体内相同时间点大体与组织学观察无明显区别,低温保存3个月与6个月组在动物体内相同时间点大体与组织学观察无明显区别;组织工程化骨各组与单纯生物衍生骨材料组比较,前者在骨缺损处产生更多的胶原与新骨,其修复骨缺损是通过多点方式成骨,成骨迅速,骨愈合更快;而单纯生物衍生骨材料组则从两端“爬行替代”方式成骨;所有各组无明显排斥反应。结论:采用低温(4℃和-196℃)保存方法均能有效保存组织工程化骨,从形态学研究证实该保存方法有效可行。

关键词：生物医学工程低温保存生物相容性材料

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肌腱细胞生物衍生肌腱复合物动态培养条件初探

肌腱细胞生物衍生肌腱复合物动态培养条件初探

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：梁凯路秦廷武杨志明李秀群王珍四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的在肌腱细胞衍生物生肌腱复合物的三维培养过程中引入周期性牵张应力,将有助于在体外构建更为成熟的组织工程化肌腱。问题的关键在于加载条件的界定。加载条件因细胞,细胞支架,加载方法不同而异。本课题以肌腱细胞,人衍生肌腱,牵张... 详细信息

目的在肌腱细胞衍生物生肌腱复合物的三维培养过程中引入周期性牵张应力,将有助于在体外构建更为成熟的组织工程化肌腱。问题的关键在于加载条件的界定。加载条件因细胞,细胞支架,加载方法不同而异。本课题以肌腱细胞,人衍生肌腱,牵张应力细胞培养系统为基础,初步探讨合适的加载频率,牵张幅度,以及每小时加载时间。方法①肌腱细胞为取初生罗曼鸡屈肌腱,用0.25%胰蛋白酶。0.1%1型胶原酶消化下细胞。将细胞传代扩增致2-4代;②将人衍生肌腱制成长20×3×2mm的扁圆形细胞支架;③将细胞接种到细胞支架上,3×105/支架。分成静态组和加载组,每组3个支架。静态组用含10%小牛血清的F12于37℃,5%CO2孵箱中培养96小时,加载组先在相同条件下培养48小时,再加载培养48小时;④培养结束后将细胞从支架上消化下来并用细胞记数板记数。0.05作为加载频率。通过统计学方法比较支架上的细胞数选出最佳频率F。每小时作用时间为15min,加载频率F不变,分别以5%、10%作为牵张幅度,选出最佳牵张幅度S。频率F,牵张幅度S不变,分别以15min、10 min和25 min作为每小时加载时间,选出最佳每小时加载时间T。将频率F,牵张幅度S,每小时加载时间T作为加载条件,作用于细胞-支架复合物。所得复合物作扫描电镜观察,观察细胞在支架表面的排列。作组织学切片,观察细胞在支架内部的生长情况。将频率F,牵张幅度S,每小时加载时间T作为加载条件,作用于细胞-支架复合物,分成静态组和加载组,每组3个样本,比较细胞对羟脯氨酸的合成量。结果加载条件为0.05Hz,牵张幅度5%,每小时加载时间15min,肌腱细胞的增殖最为明显;扫描电镜观察,加载组细胞在支架表面的排列较静态组更趋有序;组织学切片示,在加载组,较多的肌腱细胞长入支架内部。加载组肌腱细胞对羟脯氨酸的合成量明显高于静态组(P<0.05)。结论当牵张应力细胞培养系统以加载条件为0.05Hz,牵张幅度5%,每小时加载时间15min作用于肌腱细胞人衍生肌腱复合物48h后,牵张应力明显促进肌腱细胞增殖,促进细胞对功能蛋白的合成,促进细胞在支架表面的有序排列,以及促进细胞在支架内部的生长。

关键词：周期性牵张应力肌腱细胞生物衍生肌腱

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骨髓基质干细胞与生物衍生骨构建组织工程骨修复山羊胫骨缺损的研究

骨髓基质干细胞与生物衍生骨构建组织工程骨修复山羊胫骨缺损的研...

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：戚超杨志明黄富国秦廷武罗静聪李秀群四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的探讨骨髓基质干细胞（MSCs）与生物衍生骨复合而成的组织工程骨修复山羊胫骨的长段骨-骨膜缺损的可行性。方法将同种异体骨经脱细胞、脱脂、脱蛋白、去抗原处理后冻干制成生物衍生骨;通过穿刺抽取山羊同种异体红骨髓,经分离、培养... 详细信息

目的探讨骨髓基质干细胞（MSCs）与生物衍生骨复合而成的组织工程骨修复山羊胫骨的长段骨-骨膜缺损的可行性。方法将同种异体骨经脱细胞、脱脂、脱蛋白、去抗原处理后冻干制成生物衍生骨;通过穿刺抽取山羊同种异体红骨髓,经分离、培养、诱导分化和BrdU标记的第三代MSCs与生物衍生骨于体外复合培养,观察体外联合培养条件下MSCs在材料中的生长情况。建立山羊的胫骨的大段骨-骨膜缺损模型,将体外构建的组织工程骨作为修复材料植入骨缺损模型,对照组为单纯生物衍生骨,另2只山羊双侧骨缺损不植入任何材料作为空白组。术后2、4、6、8、12、16及24周行大体标本观察、组织学观察、扫描电镜观察、X线片观察、骨密度检测和生物力学测试。结果组织工程骨早期材料孔隙内无明显炎性反应,在8周,组织工程骨中的支架材料已完全降解,骨缺损部分修复,但实验、对照组的最大折弯强度的差异无显著性意义（P＞0.05）;在12周时,实验组完全修复骨缺损,实验组的生物力学强度已较对照组大（P＜0.05）,实验组8、12和16周骨密度较对照组高（P＜0.05）;24周时空白组骨缺损未修复。结论组织工程骨早期修复能力较强,且较单纯材料成骨量大、迅速,能够对标准负重骨缺损进行有效的修复。

关键词：组织工程骨骨髓基质干细胞生物衍生骨骨缺损修复

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异种角膜制备组织工程角膜支架的初步研究

异种角膜制备组织工程角膜支架的初步研究

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：张姝江杨志明罗静聪李秀群四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的支架材料,为细胞提供贴附生长的支持物。方法实验共分3组,A组:取新鲜牛角膜18个,生理盐水清洗后,用0.25%TN,37℃,分10min,20min和30min3个时间点(每个时间点6个)消化后,进行反复冻融。清... 详细信息

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的支架材料,为细胞提供贴附生长的支持物。方法实验共分3组,A组:取新鲜牛角膜18个,生理盐水清洗后,用0.25%TN,37℃,分10min,20min和30min3个时间点(每个时间点6个)消化后,进行反复冻融。清洗处理后角膜基质,每组取一个样本2.5%戊二醛固定后分别做扫描电镜观察和石蜡包埋切片,HE染色,并以未经处理的牛角膜标本做对照观察。其余做冻干处理,消毒备用。B组:将消毒后冻干牛角膜基质复水,用培养基浸泡24h,取浸提液原液,稀释2倍,4倍和8倍培养兔角膜缘细胞。倒置相差显微镜观察细胞生长。C组:将冻干牛角膜基质常规培养基浸润24h,兔角膜缘细胞以20×104个/cm2接种于其上,培养7d后,①2.5%戊二醛固定标本送扫描电镜检查;②包因氏液固定,石蜡包埋,HE染色观察。无细胞接种的冻干牛角膜基质于同样培养基中浸泡,37℃孵箱放置7d,同样固定染色作为对照。结果A组:电镜观察各组牛角膜片表层内皮及上皮细胞均被脱去,HE染色可见基质胶原纤维层间有基质细胞碎片残留,30min组最少,10min组较多,但胶原纤维原有序排列以30min组破坏最大,胶原纤维松散,牛角膜基质片浑浊不透明,10min组保持透明性最好。B组:浸提液的各稀释倍数及原液所培养兔角膜缘细胞生长良好,无凋亡或不贴壁生长情况。C组:电镜及HE染色观察均见细胞在材料表面贴附生长,大体观察发现在有细胞生长的材料比未接种细胞材料透明度好。

关键词：组织工程角膜支架材料异种角膜

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SIS和PPM修复大鼠腹壁缺损的初步研究

SIS和PPM修复大鼠腹壁缺损的初步研究

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2005'中国修复重建外科论坛

作者：张喜海罗静聪杨志明李秀群四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的比较小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)和聚丙烯补片(polypropylenemalex,PPM)修复大鼠腹壁缺损的效果,探讨SIS用于腹壁缺损修复的可行性。方法SD大鼠100只随机分为两组,手术造成2cm×2cm全层腹壁缺损,分别采用... 详细信息

目的比较小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)和聚丙烯补片(polypropylenemalex,PPM)修复大鼠腹壁缺损的效果,探讨SIS用于腹壁缺损修复的可行性。方法SD大鼠100只随机分为两组,手术造成2cm×2cm全层腹壁缺损,分别采用相同面积的SIS(n=50)和PPM(n=50)修补,术后1、2、4、8和12周分期行大体及组织学观察,测定腹壁抗嶷强度和评价腹腔内粘连。结果两种材料不导致动物不良反应,无疝瘘发生,缺损得到完整修复。SIS组的早期(2周之前)腹壁抗张强度弱于PPM组(P<0.05),4周后两者无显著差异;SIS组的腹腔粘连程度及强度明显低于PPM组(P<0.05)。组织学观察两组均未见明显免疫排斥反应,最终均为纤维结缔组织修复。结论SIS和PPM均能有效修复大鼠腹壁缺损。SIS在生物相容性和抗腹腔粘连方面要优于PPM,值得进一步研究。

关键词：腹壁缺损小肠黏膜下基质聚丙烯

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小肠黏膜下层在组织修复中的应用

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国外医学（生物医学工程分册） 2005年第1期28卷 52-55页

作者：罗静聪杨志明四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

小肠黏膜下层(SIS)已广泛应用于多种组织如膀胱、肌腱、韧带、硬脑膜和血管等的修复,具有部位特异的组织再生能力,在部分组织缺损的修复中,可获得结构和功能上的重建,但在某些组织如输尿管也存在粘连与功能不能重建的问题,尚需进一步的... 详细信息

小肠黏膜下层(SIS)已广泛应用于多种组织如膀胱、肌腱、韧带、硬脑膜和血管等的修复,具有部位特异的组织再生能力,在部分组织缺损的修复中,可获得结构和功能上的重建,但在某些组织如输尿管也存在粘连与功能不能重建的问题,尚需进一步的研究。SIS可望作为生物材料广泛应用于组织修复。

关键词：小肠黏膜下层组织修复

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离心管培养软骨作为半月板移植替代物的可能性研究

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中国修复重建外科杂志 2004年第5期18卷 426-430页

作者：王建杨志明解慧琪秦廷武四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验室:干细胞与组织工程研究室

目的　比较培养关节软骨和半月板软骨细胞的生物学特性 ,探讨培养软骨作为半月板移植替代物的可能性。　方法　分别自 3周龄大耳白兔关节软骨和半月板分离软骨细胞 ,行单层传代培养和离心管培养。将离心管培养形成的软骨和 6周龄兔半月... 详细信息

目的　比较培养关节软骨和半月板软骨细胞的生物学特性 ,探讨培养软骨作为半月板移植替代物的可能性。　方法　分别自 3周龄大耳白兔关节软骨和半月板分离软骨细胞 ,行单层传代培养和离心管培养。将离心管培养形成的软骨和 6周龄兔半月板行组织学和透射电镜观察 ,比较关节软骨细胞和半月板纤维软骨细胞的生长曲线。流式细胞术检测第 2、4代关节软骨细胞和半月板纤维软骨细胞周期。　结果　第 4代关节软骨细胞呈去分化 ,似成纤维细胞。离心管关节软骨细胞培养能形成软骨 ,半月板纤维软骨细胞不能形成软骨。培养软骨和半月板的组织学及超微结构差异显著 ,培养软骨中软骨细胞 5 %呈现凋亡。第 2、4代关节软骨细胞中亚二倍体细胞比例明显多于第 2、4代半月板纤维软骨细胞 ( P<0 .0 5 )。　结论　半月板来源的软骨细胞经离心管培养不能形成软骨组织 ,关节软骨细胞离心培养形成软骨不能作为半月板的移植物。

关键词：半月板移植关节软骨细胞离心管培养软骨软骨组织组织学养形传代培养去分化生长曲线

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脱细胞羊膜的制备及其生物相容性研究

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中国修复重建外科杂志 2004年第2期18卷 108-111页

作者：罗静聪李秀群杨志明邓力四川大学华西医院人类疾病生物治疗教育部重点实验:干细胞与组织工程研究室

目的　制备脱细胞人羊膜 (HAAM) ,检测其细胞相容性和组织相容性 ,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。　方法　新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联 ,0 .5 % SDS震摇 2 4小时 ,胰蛋白酶消化 4小时 ,充分漂洗 ,冷冻干燥 ,分装 ,环氧乙烷消... 详细信息

目的　制备脱细胞人羊膜 (HAAM) ,检测其细胞相容性和组织相容性 ,探讨其作为组织工程支架材料的可行性。　方法　新鲜人羊膜经漂洗后戊二醛交联 ,0 .5 % SDS震摇 2 4小时 ,胰蛋白酶消化 4小时 ,充分漂洗 ,冷冻干燥 ,分装 ,环氧乙烷消毒备用。倒置相差显微镜和扫描电镜观察表面结构 ,测量孔径 ,并作 HE、Mallory染色。体外培养人成纤维细胞并复合于 HAAM,倒置相差显微镜和扫描电镜观察细胞的黏附、生长 ,四甲基偶氮唑盐 (MTT)法测定 HAAM浸提液对培养的人成纤维细胞的细胞毒性。将 HAAM植入 SD大鼠背部皮下 ,观察其组织相容性。　结果　 HAAM的一面为网状结构 ,孔径为 10～ 80 nm,另一面为致密纤维结构。HE、Mallory染色表明材料无细胞残留 ,均为胶原组成。成纤维细胞能在 HAAM上黏附、增殖。 MTT示材料细胞毒性为 0或 1级 ,动物埋置实验无异常反应。　结论　应用去垢剂 -酶消化法处理新鲜人羊膜 ,能有效去除组织中的细胞和可溶性成分 ,可进一步降低其免疫原性 ,保留基质及网状结构 ,有良好的细胞相容性和组织相容性 ,可作为组织缺损的修复材料及组织工程的膜支架材料。

关键词：脱细胞羊膜制备生物相容性检测细胞相容性组织相容性

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