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中国修复重建外科杂志 2013年第9期27卷 1070-1075页

作者：潘娟刘国明宁良菊罗静聪黄富国秦廷武四川大学华西医院康复医学科成都610041 四川大学华西医院康复医学四川省重点实验室成都610041 四川大学华西医院骨科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西医院再生医学研究中心成都610041

目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组织学观察和细胞相容性评价。取成年雄性新西兰大白兔24只,体重... 详细信息

目的评价犬脱细胞肌腱片(decellularized tendon slices,DTSs)对兔肩袖损伤腱-骨愈合的作用。方法取成年比格犬跟腱经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备DTSs,体外对DTSs行组织学观察和细胞相容性评价。取成年雄性新西兰大白兔24只,体重2.5～3.0 kg,随机选取一侧肩关节自冈下肌腱止点处纵向作宽大于正常肌腱50%、长为8 mm的U形缺损,用犬DTSs修复冈下肌腱缺损并重建腱-骨止点(实验组);对侧肩关节不作任何处理(对照组)。术后4、8、12周取两组标本行组织学观察和生物力学测试。结果体外组织学观察示犬DTSs胶原结构保留完整,无细胞残留;细胞相容性实验示成纤维细胞与DTSs良好黏附。生物力学测试示,随时间延长,实验组最大载荷和刚度均呈增加趋势,12周时显著高于4周及8周(P<0.05);除12周实验组最大载荷与对照组比较差异无统计学意义(t=0.969,P=0.361)外,其余各时间点实验组最大载荷及刚度均显著小于对照组(P<0.05)。组织学观察示,对照组可见腱-骨止点的4层结构。实验组术后4周腱-骨界面由肉芽组织填充,少量类似Sharpey纤维连接于腱-骨间;随时间延长肉芽组织界面消失,成纤维细胞、Sharpey纤维、新生软骨和软骨细胞数量增多,腱-骨界面逐渐成熟,但未见位于矿化纤维软骨与非矿化纤维软骨间的潮线。结论经反复冻融5次结合核酸酶处理12 h制备的犬DTSs可促进兔肩袖损伤腱-骨愈合,提高肩袖损伤修复的生物力学性能。

关键词：脱细胞肌腱片肩袖损伤腱-骨愈合犬兔

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京尼平交联改性SIS促消化道粘膜修复材料的制备和检测

京尼平交联改性SIS促消化道粘膜修复材料的制备和检测

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：王旻李顺刘宏银范美荣龚梅陈曦解慧琪四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程研究室成都 610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都 610041

目的:使用猪小肠粘膜下层(SIS)有望促进消化道粘膜的修复,如何提高SIS的抗酸、抗酶解能力是材料发挥修复效果的关键.尝试使用京尼平作为交联剂对SIS进行改性. 方法:使用京尼平对SIS进行交联,对交联后SIS的交联特征(交联指数、溶胀率... 详细信息

目的:使用猪小肠粘膜下层(SIS)有望促进消化道粘膜的修复,如何提高SIS的抗酸、抗酶解能力是材料发挥修复效果的关键.尝试使用京尼平作为交联剂对SIS进行改性. 方法:使用京尼平对SIS进行交联,对交联后SIS的交联特征(交联指数、溶胀率)进行检测,采用人工胃液评价其抗酸、抗酶解性能,同时对京尼平交联后材料的力学性能、生长因子含量、生物相容性等进行综合评价. 结果:京尼平交联后的SIS抗酸、抗酶解性能显著增强，力学性能明显提高，同时保留了其作为天然细胞外基质材料生长活性因子丰富、生物相容性好等优势。结论:京尼平交联后的SIS有望成为一种有效地促进消化道粘膜修复的材料。

关键词：消化道粘膜修复材料京尼平交联改性处理

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可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏型复合材料的研制

可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏型复合材料的研制

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：邓雪琴晁宁宁王玮罗静聪四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的:氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)具有良好的温敏特性,小肠粘膜下层(SIS)含有多种生物活性因子,均具有良好的生物相容性并广泛用于临床及组织工程.本研究将二者制备为可注射温敏复合材料,以期获得具有生物活... 详细信息

目的:氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)具有良好的温敏特性,小肠粘膜下层(SIS)含有多种生物活性因子,均具有良好的生物相容性并广泛用于临床及组织工程.本研究将二者制备为可注射温敏复合材料,以期获得具有生物活性的新型软组织修复材料. 方法:多步法制备SIS并低温粉碎为微粒,将其与CSCl-GP-HEC按适当比例混合制成复合材料,流变仪检测其相变特性,傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析各组分在相变过程中其特征是否改变,扫描电子显微镜(SEM)检测凝胶孔径.ELISA法测材料生长因子体外释放,MTT实验研究其与NIH 3T3成纤维细胞细胞相容性. 结果:复合材料具有CSCI-GP-HEC及SIS特征吸收峰，37℃从液态转变为不流动的凝胶。其孔径结构适合细胞的生存，具有良好的细胞相容性，体外检测表明bFGF, VEGF可释放至30天。结论:该复合材料具有良好的温敏凝胶特性、良好的细胞相容性，可持续释放生长因子，有望成为新型软组织修复材料。

关键词：软组织修复材料生物活性小肠粘膜下层氯化壳聚糖 β甘油磷酸二钠羟乙基纤维素

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可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏复合材料软组织填充初步实验

可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏复合材料软组织填充初步实验

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：晁宁宁邓雪琴王玮罗静聪四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的:细胞外基质微粒如人脱细胞真皮微粒已用于软组织填充,但植入体内后降解快而易被吸收,本研究将氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)/小肠粘膜下层(SIS)微粒温敏复合材料植入动物皮下,探讨其作为软组织修复材料的... 详细信息

目的:细胞外基质微粒如人脱细胞真皮微粒已用于软组织填充,但植入体内后降解快而易被吸收,本研究将氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)/小肠粘膜下层(SIS)微粒温敏复合材料植入动物皮下,探讨其作为软组织修复材料的可能性. 方法:将复合材料注射至大鼠皮下,以单纯SIS微粒作为对照,术后1,3,5,7,14,28天取材.组织学、CD68、CD163和CCR7免疫组化检测材料的炎症反应及体内降解情况.B超观察材料体内的形状维持情况. 结果:二组材料注射入SD大鼠皮下后，其炎性反应随植入时间延长而减弱，各时间点组间炎性反应评价无显著差异，复合材料组较单纯SIS微粒降解慢，可维持其形状至2个月，显著高于SIS微粒组1个月。结论:复合材料具有良好的生物相容性，延缓SIS微粒的吸收，有望作为软组织填充材料。

关键词：温敏生物材料小肠粘膜壳聚糖软组织填充

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脱细胞小牛肌腱组织形态学和生物力学特性研究

脱细胞小牛肌腱组织形态学和生物力学特性研究

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：江燕林张忆杨洁亮罗静聪秦廷武四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 6100

目的:研究反复冻融结合核酸酶处理对小牛跟腱脱细胞效果以及肌腱组织形态、结构、生化成分和力学特性的影响. 方法:取新鲜新生小牛跟腱48根,随机分为3组(n=16):新鲜正常肌腱作为对照组1(A组),反复冻融5次(液氮冷冻/37℃复温)作为对照... 详细信息

目的:研究反复冻融结合核酸酶处理对小牛跟腱脱细胞效果以及肌腱组织形态、结构、生化成分和力学特性的影响. 方法:取新鲜新生小牛跟腱48根,随机分为3组(n=16):新鲜正常肌腱作为对照组1(A组),反复冻融5次(液氮冷冻/37℃复温)作为对照组2(B组),反复冻融结合核酸酶处理24h作为实验组(C组).每组4根用于形态学、组织学以及免疫组化观察,其余12根用于DNA含量和生物力学特性检测. 结果:SEM观察结果显示A,B组胶原纤维排列致密有序，形态完整，未见断裂或缺损;C组的胶原纤维排列松散，几乎没有断裂或缺损。阿利新蓝、天狼星红染色以及免疫组化结果显示C组糖胺聚糖、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、纤维连接蛋白大部分被保留。H&E和DAPI染色结果显示A,B组胶原纤维之间较多完整的细胞核清晰可见，而C组胶原纤维之间未见完整细胞核，但腱内膜上仍有部分细胞核残留。DNA定量检测结果证实C组DNA含量明显低于A,B组(P＜0.05)。生物力学测定结果显示，各组拉伸强度、断裂应变、刚度和弹性模量数值均有差异，但差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论:反复冻融结合核酸酶处理完整的小牛跟腱，可有效地去除细胞成分，同时基本保留跟腱原始的胶原纤维结构、形态、大部分胞外基质成分和力学特性，可望用于肌腱/韧带缺损的修复材料。

关键词：肌腱脱细胞组织形态学生物力学性能

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脱钙脱细胞皮质骨支架的制备及其组织形态学和力学性能表征

脱钙脱细胞皮质骨支架的制备及其组织形态学和力学性能表征

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：杨洁亮张忆江燕林秦廷武四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 6100 四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程实验室成都市高新区高朋大道科园四路1号 610041

目的:生物来源的支架材料用于组织修复成为生物材料研究和应用的热点之一.目前,临床上常使用自体或异体来源的髌腱、腘绳肌腱、股四头肌腱和髂胫束等生物来源材料修复韧带缺损,但仍存在来源受限、修复后膝关节稳定性差、手术并发症等缺... 详细信息

目的:生物来源的支架材料用于组织修复成为生物材料研究和应用的热点之一.目前,临床上常使用自体或异体来源的髌腱、腘绳肌腱、股四头肌腱和髂胫束等生物来源材料修复韧带缺损,但仍存在来源受限、修复后膝关节稳定性差、手术并发症等缺点.因此,探索使用来源更加广泛、手术固定简便的脱钙脱细胞皮质骨(主要成分是Ⅰ型胶原)作为韧带修复的替代物具有潜在的应用价值.本实验对异种脱钙脱细胞皮质骨的组织学、形态学及力学性能进行表征,旨在为研发修复韧带缺损的材料提供实验依据. 方法:取新鲜新生小牛四肢骨，沿力线方向加工成长5cm，宽4mm的全厚皮质骨。利用0.5NHCl对其脱钙，甲醇:乙醇(1:1)脱脂，1％TritonX-100, 0.5%脱氧胆酸钠脱细胞，制备脱钙脱细胞皮质骨支架。使用原子吸收方法检测支架的脱钙率;H&E和DAPI观察支架脱细胞效果，进一步用Quant-iTTM PicoGreen(R)dsDNA Assay Kit定量检测支架中DNA残留量;SEM,TEM观测其形态变化;生物力学试验机行单轴拉伸实验测定其力学特性。结果:皮质骨经脱钙处理后，脱钙率达99%;脱细胞处理后，组织学上未见明显的细胞残留，DNA检测证实脱细胞效果明显;形态学检测表明支架材料结构未发生明显变化;支架的力学性能满足韧带修复的基本要求。结论:脱钙脱细胞皮质骨支架不但具备基本的力学性能，而且脱除了原有的钙含量和细胞残留，可望用于韧带修复的支架材料。

关键词：韧带缺损脱钙脱细胞皮质骨支架制备工艺组织形态力学性能

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脱钙皮质骨基质的拉伸力学性能研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第4期26卷 501-505页

作者：刘国明张忆江燕林黄富国秦廷武四川大学华西医院骨科成都6100411 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都6100411 四川大学华西医院再生医学研究中心成都6100411

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成... 详细信息

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成不同厚度的片材,并根据厚度分为4组(n=16),分别为A组100～300μm,B组300～500μm,C组500～700μm,D组700～1 000μm;对每组标本进行拉伸性能和组织学观测。结果大体观察显示脱钙皮质骨基质经H2O2处理后呈乳白色,柔韧性好,富有弹性。脱钙皮质骨基质的脱钙率达97.6%。A组强度及弹性模量明显小于B、C、D组(P<0.05),B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);脱钙皮质骨基质刚度随厚度增加呈逐渐增大趋势,A组刚度显著低于B、C、D组(P<0.05),B、C组低于D组(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);各组极限应变差异均无统计学意义(P>0.05)。组织学观察各组均可见典型骨单位结构,其最大直径范围为102～325μm,平均最大直径为182μm。结论骨单位的完整性对脱钙皮质骨基质的力学性能有重要影响;脱钙皮质骨基质作为组织工程支架材料,在厚度>300μm时可保持其拉伸力学性能。

关键词：脱钙皮质骨基质力学性能组织工程支架

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音猬因子调控BMSCs表达和分泌VEGF及bFGF的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第1期26卷 112-116页

作者：蔡加琴黄益洲陈晓禾谢红蕾黄永灿邓力四川大学华西药学院药理系成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川大学华西医院再生医学研究中心.干细胞与组织工程研究室

目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3... 详细信息

目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3代,分别用含0、10、100、200 ng/mL rShh-N的L-DMEM培养BMSCs,作为A、B、C、D组。培养12、24、48、72 h后行ELISA法检测各组上清液中VEGF和bFGF的浓度,实时荧光定量PCR法检测各组VEGF和bFGF mRNA的表达水平。结果在基因表达水平上,D组各时间点的VEGF和bFGF mRNA表达量均明显高于A组(P<0.05),且在12、48 h表达量高于24、72 h(P<0.01);C组在各时间点均促进bFGF mRNA表达(P<0.05),在24～72 h促进VEGF mRNA表达(P<0.05),且在72 h时表达量均最高(P<0.01);B组在12 h抑制VEGF mRNA表达(P<0.05),48 h和72 h表现出促进作用(P<0.05),在12～48 h明显促进bFGF mRNA表达(P<0.05),且在48 h时的表达量最高(P<0.01)。在蛋白水平上,D组各时间点VEGF和bFGF分泌量均高于A组(P<0.01);C组在24～72 h VEGF和bFGF分泌量明显多于A组(P<0.05);B组在12 h和48 h抑制VEGF的分泌(P<0.05),24 h增加其分泌作用(P<0.05),而在24 h和48 h促进bFGF的分泌(P<0.05)。各组在48 h和72 h时的VEGF和bFGF分泌量明显多于12 h和24 h(P<0.05)。结论 rShh-N可促进BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF,为进一步探讨rShh-N和MSCs联合应用于治疗缺血性相关疾病以及促进骨修复重建的可行性提供了实验依据。

关键词：音猬因子 BMSCs 缺血性相关疾病骨修复 VEGF bFGF 大鼠

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组织工程在食管修复重建外科中的应用

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生物物理学报 2011年第6期27卷 475-482页

作者：谭波解慧琪四川大学华西医院再生医学研究中心干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西医院骨科成都610041

食管替代术是很多食管疾病的常用治疗手段。采用自身组织进行食管替代创伤大,术后并发症多,而现有的人工食管很难满足食管替代的要求。利用组织工程技术进行食管的替代研究,为解决这些问题带来了希望。本文就组织工程在食管修复重建外... 详细信息

食管替代术是很多食管疾病的常用治疗手段。采用自身组织进行食管替代创伤大,术后并发症多,而现有的人工食管很难满足食管替代的要求。利用组织工程技术进行食管的替代研究,为解决这些问题带来了希望。本文就组织工程在食管修复重建外科中的应用及前景进行综述。

关键词：组织工程食管修复重建应用

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低氧预处理对大鼠BMSCs葡萄糖代谢的影响

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中国修复重建外科杂志 2011年第8期25卷 1004-1007页

作者：朱鸿明陈晓禾邓力四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室成都610041 四川大学华西医院再生医学研究中心.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的观察低氧预处理对BMSCs葡萄糖代谢的影响,探讨其潜在机制,为干细胞疗法的优化提供理论依据。方法取1～3日龄SD大鼠骨髓,采用密度梯度离心法获得BMSCs,取第4代细胞用于实验。根据处理方法不同将细胞分为4组:A组采用常氧培养24 h;B组... 详细信息

目的观察低氧预处理对BMSCs葡萄糖代谢的影响,探讨其潜在机制,为干细胞疗法的优化提供理论依据。方法取1～3日龄SD大鼠骨髓,采用密度梯度离心法获得BMSCs,取第4代细胞用于实验。根据处理方法不同将细胞分为4组:A组采用常氧培养24 h;B组以1%低氧浓度培养24 h;C组于低氧预处理前用20μmol/L甲氧雌二醇处理24 h;D组于低氧预处理前用50μmol/L缺氧诱导因子1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)特异的siRNA处理12 h。采用MTT法、生化分析仪及实时荧光定量PCR检测各组BMSCs活力、葡萄糖代谢以及HIF-1αmRNA及葡萄糖转运蛋白1(glucose transporter 1,Glut-1)mRNA的表达。结果 MTT检测示A、B、C、D组吸光度(A)值分别为387.67±58.92、322.50±50.60、297.00±53.00、286.00±41.00,各组间差异无统计学意义(P>0.05)。与A组相比,B组葡萄糖摄取量和乳酸生成量显著增加(P<0.05);C、D组略高于A组,但差异无统计学意义(P>0.05),但显著低于B组,差异有统计学意义(P<0.05);C、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与A组相比,B组HIF-1αmRNA和Glut-1 mRNA表达均显著上调(P<0.05);C、D组HIF-1αmRNA和Glut-1 mRNA表达较B组大幅度降低(P<0.05),但仍显著高于A组(P<0.05);C、D组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论低氧预处理可上调大鼠BMSCs的葡萄糖摄取和代谢能力,其机制涉及HIF-1 mRNA及其下游基因Glut-1 mRNA的表达上调。

关键词： BMSCs 低氧预处理缺氧诱导因子1 葡萄糖转运蛋白1 大鼠

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