检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2009年第8期23卷 974-979页

作者：莫湘涛邓力李秀群解慧琪罗静聪郭尚春杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041 洛阳正骨研究院骨关节病研究室上海交通大学附属第六人民医院四肢显微外科研究所

目的研究利用海藻酸钠水凝胶和SIS复合作为支架材料,接种软骨细胞构建组织工程软骨修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法采用机械法和去垢剂-酶消化法制备SIS。取8只2～3周龄新西兰白兔,肱骨头和股骨髁负重面全层关节软骨,体外培养软骨... 详细信息

目的研究利用海藻酸钠水凝胶和SIS复合作为支架材料,接种软骨细胞构建组织工程软骨修复兔全层关节软骨缺损的效果。方法采用机械法和去垢剂-酶消化法制备SIS。取8只2～3周龄新西兰白兔,肱骨头和股骨髁负重面全层关节软骨,体外培养软骨细胞。将常规扩增培养的第4代软骨细胞用海藻酸钠稀释,软骨细胞浓度为(5～7)×107个/mL,均匀涂刷于SIS表面,制备软骨细胞-海藻酸钠水凝胶-SIS复合体。取6月龄清洁级新西兰白兔40只,体重3.0～3.5kg,根据处理方法不同随机分为实验组和对照组(n=20),建立单侧膝关节4mm×4mm全层软骨缺损模型(左右不限)。实验组将复合体通过逐层叠加法置于缺损处,构建组织工程软骨,表面缝合覆盖一层SIS薄膜将缺损完全填充;对照组以单纯海藻酸钠水凝胶填充软骨缺损、覆盖SIS薄膜缝合。术后观察动物一般情况,于术后1、3、5、7、9个月,各组分别处死动物,行大体和组织学观察。结果由于麻醉死亡、切口感染和腹泻死亡,8只动物被排除实验,两组分别余16只动物进行取材观察。术后1、3、5、7、9个月,每组分别随机处死3、3、3、3、4只动物。大体观察和组织学Masson染色结果显示:实验组术后1个月,植入体表面的SIS与宿主软骨组织融合,边界消失;3个月,植入体部分软骨化,界面融合;5个月,植入体演变为纤维软骨;7个月植入体内软骨组织中纤维排列接近宿主软骨;9个月植入体内软骨纤维排列紊乱,细胞代谢增生活跃。对照组观察9个月内缺损无明显修复。组织学染色结果经图像量化分析显示,实验组各时间点缺损内修复组织单位面积染色强度均较对照组显著升高(P<0.05);术后3、5、7个月,实验组软骨化程度逐渐增大(P<0.05),9个月较7个月有所降低(P<0.05)。结论利用软骨细胞-海藻酸钠水凝胶-SIS复合体表层缝合SIS薄膜术构建的组织工程软骨原位修复兔软骨缺损,能促进软骨组织再生,符合关节软骨的生理性修复过程。

关键词：组织工程软骨软骨细胞海藻酸钠水凝胶 SIS 支架材料软骨缺损兔

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基质细胞衍生因子受体4在肌损伤组织肌卫星细胞的表达

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中国修复重建外科杂志 2009年第1期23卷 26-29页

作者：李小雷黄厚今周光前杨志明解慧琪邓力遵义医学院预防医学教研室贵州遵义563003 连云港中医药高等职业技术学校四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的探讨注射心脏毒素后肌损伤的肌卫星细胞中基质细胞衍生因子受体4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)的表达情况,为进一步研究肌肉退行性疾病的分子学发病机制和治疗方法提供理论依据。方法取C57雄性小鼠12只,于左侧股四头肌局部注射... 详细信息

目的探讨注射心脏毒素后肌损伤的肌卫星细胞中基质细胞衍生因子受体4(CXC chemokine receptor4,CXCR4)的表达情况,为进一步研究肌肉退行性疾病的分子学发病机制和治疗方法提供理论依据。方法取C57雄性小鼠12只,于左侧股四头肌局部注射心脏毒素(5μg/只),建立小鼠肌损伤模型;右侧股四头肌作为自身对照。于注射后1、4d及1、2、4、6周处死小鼠,分离两侧股四头肌,取材行HE染色、免疫组织化学染色及RT-PCR检测分析CXCR4表达情况。结果HE染色示肌肉组织从损伤修复到再生的全过程。免疫组织化学染色检测示注射心脏毒素后1、4d和1、2、4、6周,肌肉组织内CXCR4表达分别为1955.6±150.3、2223.2±264.3、2317.6±178.7、3066.5±269.6、1770.9±98.7和1505.7±107.1,与正常肌肉组织(640.3±124.0)比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。RT-PCR检测显示,正常肌肉组织、注射心脏毒素后1、4d和1、2、4、6周肌肉组织内CXCR4mRNA表达分别为0.349±0.006、0.822±0.013、0.882±0.025、1.025±0.028、1.065±0.041、0.837±0.011和0.777±0.015;肌损伤后各时间点与正常肌肉组织比较,差异均有统计学意义(P<0.001)。结论CXCR4可能在肌肉损伤修复过程中起重要作用。

关键词：基质细胞衍生因子受体4 肌卫星细胞心脏毒素肌损伤模型小鼠

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一种合成的纳米粒高分子材料的细胞毒性研究

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航天医学与医学工程 2009年第1期22卷 56-61页

作者：聂宇段友容石三军张志荣李秀群四川大学华西药学院靶向药物及释药系统教育部重点实验室四川成都610041 四川大学生物材料工程研究中心四川成都610041 上海交通大学肿瘤研究所上海200032 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川成都610041

目的检测本实验室新合成的准备应用于静脉注射的系列高分子材料poly(ethylene glycol)-D,L-lactic and glycolic acid-poly(ethylene glycol)(mPEG-PLGA-mPEG,PELGE)以及由其制成的纳米粒对多种细胞的细胞毒性。方法利用快速评定细胞增殖率和细胞毒性的噻唑蓝比色法(MTT),不仅参照美国药典用小鼠成纤维细胞L929细胞株进行评价,还根据该材料将来可能的应用领域,用Chang氏正常肝细胞株,原代人肾血管内皮细胞,原代人胚成骨细胞,原代人胚成肌细胞评价其细胞毒性。结果结果表明该系列聚合物对L929细胞株24 h内和内皮细胞48 h内的毒性为0或Ⅰ级,即无细胞毒性,而对其它不同种细胞具有不同程度的细胞毒性。结论该材料具有应用于静脉注射的可能性。该实验为进一步的动物试验提供依据,同时为该新型材料应用于实际提供了前提检测方法。

关键词：细胞毒性原代细胞静脉注射高分子材料 PELGE

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胎盘组织——间充质干细胞的新来源

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中国医药生物技术 2009年第4期4卷 285-287页

作者：邓力黄永灿四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室/干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西药学院药理系

间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSC）是最早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞，随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC。目前MSC是临床研究最普遍的细胞来源，在组织工程研究、创伤修复和... 详细信息

间充质干细胞（mesenchymal stemcells，MSC）是最早分离自人骨髓组织的一类具有多向分化潜能的干细胞，随后陆续在人脂肪组织、外周血、肌肉和结缔组织中也发现了MSC。目前MSC是临床研究最普遍的细胞来源，在组织工程研究、创伤修复和肿瘤治疗等领域应用广泛，但MSC在骨髓、外周血等组织中的含量极低，并且有研究表明MSC含量会随着人年龄的增长而逐渐降低，同时细胞的增殖分化能力也大大下降因此国内外学者们开始探索在更为幼稚的组织如胚胎、胎盘组织中是否含有MSC。

关键词：间充质干细胞胎盘组织多向分化潜能骨髓组织脂肪组织结缔组织细胞来源临床研究

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细胞治疗临床应用新进展

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中国修复重建外科杂志 2008年第2期22卷 221-227页

作者：韩平解慧琪罗静聪杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的综述细胞治疗临床应用的新进展。方法广泛查阅近年有关细胞治疗临床应用研究的文献并进行综述。结果在细胞生物学尤其是干细胞生物学飞速发展的基础上,细胞治疗已开始应用于心血管系统疾病、神经系统疾病、肌肉骨骼相关疾病、糖尿... 详细信息

目的综述细胞治疗临床应用的新进展。方法广泛查阅近年有关细胞治疗临床应用研究的文献并进行综述。结果在细胞生物学尤其是干细胞生物学飞速发展的基础上,细胞治疗已开始应用于心血管系统疾病、神经系统疾病、肌肉骨骼相关疾病、糖尿病以及压力性尿失禁等多种疾病的临床试验研究,并取得了令人振奋的初步研究成果,展示了广阔的临床应用前景。结论细胞治疗为人类疾病治疗提供了一种新的治疗手段,具体作用机制还有待进一步研究。

关键词：细胞治疗移植再生医学干细胞临床应用研究进展

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组织工程化尿路上皮结构体内外构建研究

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四川大学学报（医学版） 2008年第3期39卷 481-484,510页

作者：韩平罗静聪智伟谭波李秀群杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室

目的探讨工程化尿路上皮结构的构建方法。方法机械分离获取膀胱黏膜层,胰蛋白酶消化法获取膀胱移行上皮细胞,用DKSFM培养基体外培养扩增。以自制的猪小肠黏膜下层(SIS)为支架材料,将培养的膀胱移行上皮细胞接种到支架材料表面,观察细胞... 详细信息

目的探讨工程化尿路上皮结构的构建方法。方法机械分离获取膀胱黏膜层,胰蛋白酶消化法获取膀胱移行上皮细胞,用DKSFM培养基体外培养扩增。以自制的猪小肠黏膜下层(SIS)为支架材料,将培养的膀胱移行上皮细胞接种到支架材料表面,观察细胞在支架材料表面的生长增殖情况;并将体外构建的细胞-支架材料复合物植入裸鼠背部皮下,不同时间点取材进行组织学和免疫组织化学检测。结果膀胱移行上皮细胞在SIS表面能够黏附、生长和增殖。体外复合培养9d后,膀胱移行上皮细胞铺满SIS表面,呈单层细胞结构。裸鼠体内植入4周和8周后,SIS上种植的膀胱移行上皮细胞形成多层结构,抗细胞角蛋白免疫组化染色,细胞胞浆成棕黄色阳性反应。结论采用组织工程技术能够在体内外初步构建尿路上皮结构,为进一步组织工程泌尿道修复重建实验奠定了基础。

关键词：组织工程尿路上皮移行上皮细胞小肠黏膜下层

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表面改性及微沟槽技术对肌腱细胞生长与取向的影响

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生物医学工程学杂志 2008年第2期25卷 382-387页

作者：陈曦秦廷武王治杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

利用光刻技术制作微格式模板,微接触转印法制作微沟槽PDMS表面,微流道技术裱衬不同浓度的Ⅰ型胶原于微沟槽表面上,比较其对细胞生长形态及生长取向的影响。对照组为未裱衬胶原的微沟槽、平板PDMS及裱衬胶原的平板PDMS。种植SD大鼠肌腱... 详细信息

利用光刻技术制作微格式模板,微接触转印法制作微沟槽PDMS表面,微流道技术裱衬不同浓度的Ⅰ型胶原于微沟槽表面上,比较其对细胞生长形态及生长取向的影响。对照组为未裱衬胶原的微沟槽、平板PDMS及裱衬胶原的平板PDMS。种植SD大鼠肌腱细胞在材料上,于37℃孵箱中培养48 h。采用MTT比色法测定不同浓度的胶原对肌腱细胞的生长增殖的影响。通过倒置相差显微镜、扫描电镜、荧光显微镜观察细胞生长的形态,取向情况。结果显示:Ⅰ型胶原修饰的PDMS微沟槽材料比未裱衬胶原的对照组具有明显的促细胞生长的作用(P<0.05),并且随着胶原浓度的增加作用越明显。有微沟槽表面的材料对细胞的生长形态和生长取向有明显影响。提示,Ⅰ型胶原修饰的微沟槽材料不仅能规范肌腱细胞的生长取向,而且能促进肌腱细胞的生长,从而得到理想的细胞生长形态,该结果对工程化肌腱的构建有重要的指导意义。

关键词：表面改性微沟槽肌腱细胞形态取向

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脊索细胞促进髓核软骨样细胞增殖及表型维持

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中国修复重建外科杂志 2008年第8期22卷 939-943页

作者：赵献峰刘浩丰干均邓力李秀群梁涛四川大学华西医院骨科生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分,观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱,获取髓核,0.2%Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养... 详细信息

目的分离纯化兔髓核中的细胞成分,观察脊索细胞形态及对软骨样细胞增殖及细胞表型的影响。方法6只4周龄新西兰兔胸腰段脊柱,获取髓核,0.2%Ⅱ型胶原酶消化法及不连续密度梯度法分离纯化脊索细胞及软骨样细胞。实验分为单纯软骨样细胞培养组(A组)及脊索细胞、软骨样细胞(1∶1)共培养组(B组)。倒置相差显微镜观察两组细胞生长情况,测定两组原代及传代细胞成活率,MTT法测定两组第2代细胞增殖曲线,并以甲苯胺蓝染色和免疫细胞化学染色鉴定两组原代及传代细胞蛋白多糖及Ⅱ型胶原的表达。结果成功分离、纯化脊索细胞和软骨样细胞。细胞培养观察,原代脊索细胞直径10～15μm,胞浆内富含大小不等的囊泡;原代软骨样细胞直径4～6μm,胞浆内无囊泡。各代细胞成活率A组为89.0%～95.3%,B组为91.3%～96.3%,各代细胞成活率两组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。A组细胞培养3～4d进入对数生长期,B组细胞培养2d后进入对数生长期;培养4d后,B组细胞增殖能力高于A组,差异有统计学意义(P<0.05)。A组3代以内细胞表达蛋白多糖及Ⅱ型胶原,B组细胞表型维持至5代。结论脊索细胞能促进髓核软骨样细胞的增殖及表型维持;脊索细胞可能在防止椎间盘退变中具有重要意义。

关键词：椎间盘髓核脊索细胞软骨样细胞细胞培养

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hBMSCs诱导分化类髓核细胞

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中国修复重建外科杂志 2008年第12期22卷 1470-1475页

作者：丰干钧刘浩陈晓禾李秀群赵献峰梁涛四川大学华西医院骨科成都610041 生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入... 详细信息

目的探讨人椎间盘细胞和关节软骨细胞的分子表型差异,分析hBMSCs经TGF-β3和BMP-7联合诱导后能否分化为软骨细胞和髓核细胞。方法取9例自愿捐赠者髂嵴骨髓20～40mL分离培养hBMSCs。取第4代hBMSCs行三维微球培养。根据基础培养基中加入的生长因子不同,实验分成4组,分别为加入10ng/mLTGF-β3组(A组)、200ng/mLBMP-7组(B组)、同时加入两种生长因子组(C组)以及空白对照组(D组)。于培养后21d,行组织学及免疫组织化学观察;于培养后4、21d进行PCR检测Ⅰ、Ⅱ、Ⅹ型胶原、蛋白多糖和SOX9基因的表达。结果培养后21d,HE染色示A组和C组细胞呈软骨细胞样形态特征,甲苯胺蓝染色及免疫组织化学染色Ⅱ型胶原表达呈阳性。B组和D组细胞形态无明显改变,PCR检测示培养后21d,A、C组SOX9、蛋白多糖、Ⅰ型胶原及Ⅱ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05)。B、D组Ⅰ型胶原表达较4d时明显增加(P<0.05),SOX9、蛋白多糖及Ⅱ型胶原较4d时无明显变化(P>0.05)。其中仅A组Ⅹ型胶原表达呈阳性。结论TGF-β3和BMP-7联合应用能促进hBMSCs分化更接近于椎间盘细胞,可能为椎间盘组织工程提供种子细胞。

关键词：椎间盘组织工程hBMSCs 诱导分化 BMP-7 TGF-β3 软骨形成

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食管黏膜上皮细胞与SIS复合培养及生物学特性研究

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中国修复重建外科杂志 2008年第6期22卷 742-746页

作者：谭波魏人前杨志明李秀群韩平智伟解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒... 详细信息

目的探讨体外快速培养犬食管黏膜上皮细胞(esophageal mucosa epithelial cells,EMECs)及其与SIS体外复合培养的方法,为组织工程食管研究提供实验依据。方法取2～5周龄幼犬5只,无菌获取其食管组织,采用混合酶消化法,分离培养EMECs,于倒置相差显微镜下观察细胞生长情况,取第2代细胞培养1～5 d绘制生长曲线并进行细胞表面标志物细胞角蛋白19(cytokeratin 19,CK-19)检测。取第2代EMECs与SIS复合培养4、8 d,行形态学、组织学及扫描电镜观察。结果倒置相差显微镜下EMSCs呈典型铺路石样。CK-19免疫组织化学染色可见细胞胞浆呈阳性染色。MTT法测定第2代细胞在传代培养2 d生长达高峰。EMECs与SIS复合培养4 d,细胞呈多角形,细胞间连接紧密,呈铺路石样排列;SIS表面形成1～2层细胞组成的复层上皮样结构。8 d时,细胞密度增大,SIS表面形成2～3层细胞组成的复层上皮样结构;扫描电镜见细胞在材料上已大量增长,呈层状排列。结论采用混合酶消化法,用含6%FBS的DKSFM培养犬EMECs,方法简便,适合推广应用。SIS与EMECs有良好的相容性,可作为构建组织工程食管的理想支架材料。

关键词：食管黏膜上皮细胞 SIS 复合培养生物学特性犬

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