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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：邓雪琴晁宁宁王玮罗静聪四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的:氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)具有良好的温敏特性,小肠粘膜下层(SIS)含有多种生物活性因子,均具有良好的生物相容性并广泛用于临床及组织工程.本研究将二者制备为可注射温敏复合材料,以期获得具有生物活... 详细信息

目的:氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)具有良好的温敏特性,小肠粘膜下层(SIS)含有多种生物活性因子,均具有良好的生物相容性并广泛用于临床及组织工程.本研究将二者制备为可注射温敏复合材料,以期获得具有生物活性的新型软组织修复材料. 方法:多步法制备SIS并低温粉碎为微粒,将其与CSCl-GP-HEC按适当比例混合制成复合材料,流变仪检测其相变特性,傅里叶变换红外光谱(FT-IR)分析各组分在相变过程中其特征是否改变,扫描电子显微镜(SEM)检测凝胶孔径.ELISA法测材料生长因子体外释放,MTT实验研究其与NIH 3T3成纤维细胞细胞相容性. 结果:复合材料具有CSCI-GP-HEC及SIS特征吸收峰，37℃从液态转变为不流动的凝胶。其孔径结构适合细胞的生存，具有良好的细胞相容性，体外检测表明bFGF, VEGF可释放至30天。结论:该复合材料具有良好的温敏凝胶特性、良好的细胞相容性，可持续释放生长因子，有望成为新型软组织修复材料。

关键词：软组织修复材料生物活性小肠粘膜下层氯化壳聚糖 β甘油磷酸二钠羟乙基纤维素

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可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏复合材料软组织填充初步实验

可注射CSCl-GP-HEC/SIS微粒温敏复合材料软组织填充初步实验

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第六届全国组织工程与再生医学大会

作者：晁宁宁邓雪琴王玮罗静聪四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学华西医院再生医学中心干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041 四川大学生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市高朋大道科园四路1号 610041

目的:细胞外基质微粒如人脱细胞真皮微粒已用于软组织填充,但植入体内后降解快而易被吸收,本研究将氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)/小肠粘膜下层(SIS)微粒温敏复合材料植入动物皮下,探讨其作为软组织修复材料的... 详细信息

目的:细胞外基质微粒如人脱细胞真皮微粒已用于软组织填充,但植入体内后降解快而易被吸收,本研究将氯化壳聚糖-β甘油磷酸二钠-羟乙基纤维素(CSCl-GP-HEC)/小肠粘膜下层(SIS)微粒温敏复合材料植入动物皮下,探讨其作为软组织修复材料的可能性. 方法:将复合材料注射至大鼠皮下,以单纯SIS微粒作为对照,术后1,3,5,7,14,28天取材.组织学、CD68、CD163和CCR7免疫组化检测材料的炎症反应及体内降解情况.B超观察材料体内的形状维持情况. 结果:二组材料注射入SD大鼠皮下后，其炎性反应随植入时间延长而减弱，各时间点组间炎性反应评价无显著差异，复合材料组较单纯SIS微粒降解慢，可维持其形状至2个月，显著高于SIS微粒组1个月。结论:复合材料具有良好的生物相容性，延缓SIS微粒的吸收，有望作为软组织填充材料。

关键词：温敏生物材料小肠粘膜壳聚糖软组织填充

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骨骼肌无细胞基质的制备及其生物相容性研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第6期26卷 749-754页

作者：田春祥范雪娇陈晓禾邓力秦廷武罗静聪李秀群吕青四川大学华西医院甲状腺乳腺外科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的细胞外基质是脂肪组织工程材料的研究热点之一。通过探讨骨骼肌无细胞基质的制作方法及生物相容性,为其在脂肪组织工程中的应用奠定基础。方法取健康成年小香猪新鲜骨骼肌组织,横切成厚2～3 mm的组织块,采用低渗-去垢剂法脱细胞处... 详细信息

目的细胞外基质是脂肪组织工程材料的研究热点之一。通过探讨骨骼肌无细胞基质的制作方法及生物相容性,为其在脂肪组织工程中的应用奠定基础。方法取健康成年小香猪新鲜骨骼肌组织,横切成厚2～3 mm的组织块,采用低渗-去垢剂法脱细胞处理。处理后采用HE染色、Masson三色染色、免疫组织化学染色及扫描电镜检测骨骼肌无细胞基质是否有细胞成分残留,并观察其基本结构;应用MTT法检测骨骼肌无细胞基质细胞毒性。取乳腺癌患者自愿捐赠脂肪组织,分离培养人脂肪干细胞(human adipose-derived stem cells,hADSCs),从形态学、流式细胞学和成脂、成骨分化能力方面进行鉴定。将骨骼肌无细胞基质与第3代hADSCs共培养,于培养后第1、3、5、7天通过细胞活性检测材料上细胞黏附、扩散和增殖情况,了解其与细胞之间的相互作用。结果 HE、Masson、免疫组织化学染色及扫描电镜观察显示骨骼肌无细胞基质肌纤维去除完全,无细胞核残留,基质结构保留完整;大量连接成网状的胶原纤维呈多孔隙样结构,规则排列。MTT检测示骨骼肌无细胞基质细胞毒性为1级,细胞相容性好。细胞活性检测示hADSCs在骨骼肌无细胞基质上能很好地伸展,且能与周围基质黏附,进入基质内部并相互交织。结论经脱细胞处理的骨骼肌无细胞基质具有良好生物相容性,可能作为脂肪组织工程的支架材料。

关键词：脂肪组织工程骨骼肌无细胞基质人脂肪干细胞支架材料

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生物衍生肌腱双侧关节突交叉固定动力重建颈椎后柱动态稳定性的体外生物力学研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第4期26卷 396-400页

作者：王贝宇刘浩侯伟光解慧琪宋跃明洪瑛石锐马立泰四川大学华西医院骨科成都610041 成都363医院骨科四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041 四川大学华西医院手术室成都610041

目的对于颈椎后柱不稳定进行动态稳定性重建研究鲜有报道。探讨采用冻干处理的生物衍生肌腱动力重建颈椎后柱动态稳定性的生物力学性能。方法收集死亡捐献者残肢掌长屈肌腱及掌伸肌腱制备生物衍生肌腱。20个新鲜成年山羊颈椎标本(C1～7)... 详细信息

目的对于颈椎后柱不稳定进行动态稳定性重建研究鲜有报道。探讨采用冻干处理的生物衍生肌腱动力重建颈椎后柱动态稳定性的生物力学性能。方法收集死亡捐献者残肢掌长屈肌腱及掌伸肌腱制备生物衍生肌腱。20个新鲜成年山羊颈椎标本(C1～7),随机分为4组,每组5个标本。A组为完整标本组,B组为损伤模型组,C组为后柱钉棒固定组,D组为肌腱动力重建组。B、C、D组通过破坏颈椎后方韧带复合体制作屈曲分离型损伤模型,C组用侧块螺钉经后路固定,D组用生物衍生肌腱行侧块经关节突交叉固定。用脊柱三维运动测量系统测算各组标本C3、C4节段前屈、后伸、侧屈、旋转的运动范围(range of motion,ROM)。结果前屈运动:C组ROM明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);B组ROM较A、D组明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);A、D组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。后伸、侧屈、旋转运动:C组ROM明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);其他3组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论新鲜成年山羊颈椎标本行生物衍生肌腱侧块经关节突交叉固定,能够限制颈椎过度前屈,完全保留后伸运动,不限制侧屈和旋转运动,重建屈曲分离型损伤下颈椎的动态稳定性。

关键词：颈椎后方韧带复合体生物力学动态稳定性生物衍生肌腱

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脱钙皮质骨基质的拉伸力学性能研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第4期26卷 501-505页

作者：刘国明张忆江燕林黄富国秦廷武四川大学华西医院骨科成都6100411 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都6100411 四川大学华西医院再生医学研究中心成都6100411

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成... 详细信息

目的探讨脱钙皮质骨基质厚度与拉伸力学性能的关系,为将其作为组织工程支架材料奠定实验基础。方法取市售新鲜小牛胫骨,常规快速脱钙制备脱钙皮质骨基质,大体观察其颜色、质地等物理性状,并进行脱钙检测。将脱钙皮质骨基质沿径向纵切成不同厚度的片材,并根据厚度分为4组(n=16),分别为A组100～300μm,B组300～500μm,C组500～700μm,D组700～1 000μm;对每组标本进行拉伸性能和组织学观测。结果大体观察显示脱钙皮质骨基质经H2O2处理后呈乳白色,柔韧性好,富有弹性。脱钙皮质骨基质的脱钙率达97.6%。A组强度及弹性模量明显小于B、C、D组(P<0.05),B、C、D组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);脱钙皮质骨基质刚度随厚度增加呈逐渐增大趋势,A组刚度显著低于B、C、D组(P<0.05),B、C组低于D组(P<0.05),B、C组间差异无统计学意义(P>0.05);各组极限应变差异均无统计学意义(P>0.05)。组织学观察各组均可见典型骨单位结构,其最大直径范围为102～325μm,平均最大直径为182μm。结论骨单位的完整性对脱钙皮质骨基质的力学性能有重要影响;脱钙皮质骨基质作为组织工程支架材料,在厚度>300μm时可保持其拉伸力学性能。

关键词：脱钙皮质骨基质力学性能组织工程支架

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音猬因子调控BMSCs表达和分泌VEGF及bFGF的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2012年第1期26卷 112-116页

作者：蔡加琴黄益洲陈晓禾谢红蕾黄永灿邓力四川大学华西药学院药理系成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室四川大学华西医院再生医学研究中心.干细胞与组织工程研究室

目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3... 详细信息

目的音猬因子(Sonic hedgehog,Shh)介导的信号参与调控血管生成的重要环节。研究不同浓度的重组Shh-N(recombinant Shh N-termitant,rShh-N)对BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF的影响。方法取健康3日龄SD大鼠骨髓分离培养BMSCs,体外扩增至第3代,分别用含0、10、100、200 ng/mL rShh-N的L-DMEM培养BMSCs,作为A、B、C、D组。培养12、24、48、72 h后行ELISA法检测各组上清液中VEGF和bFGF的浓度,实时荧光定量PCR法检测各组VEGF和bFGF mRNA的表达水平。结果在基因表达水平上,D组各时间点的VEGF和bFGF mRNA表达量均明显高于A组(P<0.05),且在12、48 h表达量高于24、72 h(P<0.01);C组在各时间点均促进bFGF mRNA表达(P<0.05),在24～72 h促进VEGF mRNA表达(P<0.05),且在72 h时表达量均最高(P<0.01);B组在12 h抑制VEGF mRNA表达(P<0.05),48 h和72 h表现出促进作用(P<0.05),在12～48 h明显促进bFGF mRNA表达(P<0.05),且在48 h时的表达量最高(P<0.01)。在蛋白水平上,D组各时间点VEGF和bFGF分泌量均高于A组(P<0.01);C组在24～72 h VEGF和bFGF分泌量明显多于A组(P<0.05);B组在12 h和48 h抑制VEGF的分泌(P<0.05),24 h增加其分泌作用(P<0.05),而在24 h和48 h促进bFGF的分泌(P<0.05)。各组在48 h和72 h时的VEGF和bFGF分泌量明显多于12 h和24 h(P<0.05)。结论 rShh-N可促进BMSCs表达和分泌VEGF和bFGF,为进一步探讨rShh-N和MSCs联合应用于治疗缺血性相关疾病以及促进骨修复重建的可行性提供了实验依据。

关键词：音猬因子 BMSCs 缺血性相关疾病骨修复 VEGF bFGF 大鼠

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真皮多潜能细胞体外分化为成肌细胞的初步研究

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医学研究杂志 2012年第9期41卷 122-125页

作者：薛斯亮张珏四川大学华西医院皮肤科成都610041 遵义医药高等专科学校贵州563000 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

目的观察真皮来源多潜能细胞(dermal multipotent cells,DMCs)在体外经诱导剂诱导为成肌细胞的能力。方法将从新生BALB/c小鼠真皮中分离获得DMCs,由成肌诱导液诱导,观察DMCs在体外是否能被诱导成肌细胞。结果 DMCs在诱导剂中培养后出现... 详细信息

目的观察真皮来源多潜能细胞(dermal multipotent cells,DMCs)在体外经诱导剂诱导为成肌细胞的能力。方法将从新生BALB/c小鼠真皮中分离获得DMCs,由成肌诱导液诱导,观察DMCs在体外是否能被诱导成肌细胞。结果 DMCs在诱导剂中培养后出现肌形态细胞,由免疫组织化学技术检测,平滑肌细胞特异性抗体alpha actin阳性。结论 DMCs可以在体外分化为肌细胞,可能作为肌细胞来源。

关键词： DMCs 多潜能分化

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玻璃化冷冻保存组织工程肌腱植入大鼠体内的组织学变化

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中国组织工程研究 2012年第40期16卷 7460-7464页

作者：彭蔷朱明华孙涛曾怡王林刘程俊秦廷武四川省疾病预防控制中心四川省成都市610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

背景:应用玻璃化冷冻方法保存组织工程肌腱具有可行性和应用前景,有待进一步研究。目的:探讨应用玻璃化冷冻保存组织工程肌腱体内植入对大鼠跟腱缺损修复的影响。方法:选用成年SD大鼠64只,于大鼠跟腱中段制备5mm肌腱缺损模型,随机摸球... 详细信息

背景:应用玻璃化冷冻方法保存组织工程肌腱具有可行性和应用前景,有待进一步研究。目的:探讨应用玻璃化冷冻保存组织工程肌腱体内植入对大鼠跟腱缺损修复的影响。方法:选用成年SD大鼠64只,于大鼠跟腱中段制备5mm肌腱缺损模型,随机摸球法均分为2组,分别植入玻璃化冷冻保存组织工程肌腱和新鲜非冷冻保存组织工程肌腱。植入后2,4,6,8周,观察植入肌腱材料及周围组织的大体形态和组织学变化。结果与结论:两组肌腱材料体内植入后的大体形态和组织学反应无明显差异。植入后2,4周,植入的肌腱材料发生降解,材料中间及周围有大量炎性细胞浸润和纤维结缔组织增生。植入后6,8周,大量新生胶原纤维组织长入并替代降解的植入材料,形态和排列方式趋近于正常肌腱组织,大鼠跟腱缺损基本修复。结果表明玻璃化冷冻保存组织工程肌腱体内植入可修复大鼠跟腱缺损。

关键词：组织工程肌腱玻璃化冷冻保存植入组织学

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Notch信号通道对角质形成细胞中RPTP-κ的影响

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医学研究杂志 2012年第8期41卷 130-133页

作者：薛斯亮王晓珊张珏四川大学华西医院皮肤科成都610041 四川省医学科学院四川省人民医院肿瘤科成都610041 遵义医药高等专科学校 563000 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨Notch信号通路对角质形成细胞中RPTP-κ的影响。方法采用体外细胞培养,分别激活和抑制Notch信号通道后,抽提RNA,实时荧光定量RNA检测RPTP-κmRNA含量。结果角质形成细胞在覆盖率为40%和80%的情况下,RPTP-κmRNA表达量后者为前者... 详细信息

目的探讨Notch信号通路对角质形成细胞中RPTP-κ的影响。方法采用体外细胞培养,分别激活和抑制Notch信号通道后,抽提RNA,实时荧光定量RNA检测RPTP-κmRNA含量。结果角质形成细胞在覆盖率为40%和80%的情况下,RPTP-κmRNA表达量后者为前者的3.4倍(P<0.05,n=3),Hes-1则为2.9倍(P<0.01,n=6);激活Notch信号通道后,RPTP-κmRNA在1、2、4、8、24h分别是对照组的1.2、1.5、5.1(P<0.01,n=3)、2.3(P<0.05,n=3)、1.1倍。而Notch信号的目的基因Hes-1的表达在上述时间点分别为对照组的1.2、1.6(P<0.01,n=3)、2.2(P<0.01,n=3)、1.8(P<0.01,n=3)、1.3倍;覆盖率为80%角质形成细胞RPTP-κmRNA为40%者的2.3倍(P<0.01,n=4)。而抑制Notch信号后,则变为0.6倍(P<0.05,n=4)。结论①在角质形成细胞不同覆盖率的时候,Hes-1和RPTP-κ表达量有所不同,细胞覆盖率越大,细胞越多,越需要抑制细胞生长的时候,Notch信号的下游因子Hes-1表达就越多,与之相同的是RPTP-κ这一TGF-β信号的下游因子表达同样增多;②Notch信号通道激活的时候,同时会增大其自身下游因子Hes-1的表达,同时也可增加RPTP-κ的表达;③在高覆盖率的角质形成细胞中抑制Notch,本该出现升高的RPTP-κ表达反而降低了。

关键词： RPTP-κ Notch NICD

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巨大肩袖撕裂的治疗及研究进展

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中国修复重建外科杂志 2011年第1期25卷 61-65页

作者：刘国明黄富国秦廷武四川大学华西医院骨科成都 610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室成都610041

目的总结巨大肩袖撕裂的治疗及研究进展。方法查阅巨大肩袖撕裂临床治疗及实验研究的相关文献,并进行综合分析。结果巨大肩袖撕裂的治疗方法主要有非手术治疗、清创减压术、直接修复术、肌腱转移术以及各种材料修复,其疗效各异。近年来... 详细信息

目的总结巨大肩袖撕裂的治疗及研究进展。方法查阅巨大肩袖撕裂临床治疗及实验研究的相关文献,并进行综合分析。结果巨大肩袖撕裂的治疗方法主要有非手术治疗、清创减压术、直接修复术、肌腱转移术以及各种材料修复,其疗效各异。近年来,出现了许多有关巨大肩袖撕裂治疗的实验研究,如基因治疗、细胞治疗和组织工程技术,有望为临床医生提供新的治疗策略。结论巨大肩袖撕裂的治疗对临床医生是一个挑战,治疗方案的选择需要从多方面考虑;传统手术方法修复断裂肩袖效果有限,巨大肩袖撕裂的研究和治疗技术尚需进行深入研究。

关键词：巨大肩袖撕裂修复重建研究进展

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