检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2007年第12期21卷 1366-1370页

作者：韩平杨志明智伟李秀群罗静聪解慧琪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的探讨体外快速培养犬膀胱平滑肌细胞的方法及观察膀胱平滑肌细胞在脱细胞小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS上的生长状况,为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供实验依据。方法分别采用酶消化法和组织块培养法分离、获取和原... 详细信息

目的探讨体外快速培养犬膀胱平滑肌细胞的方法及观察膀胱平滑肌细胞在脱细胞小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS上的生长状况,为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供实验依据。方法分别采用酶消化法和组织块培养法分离、获取和原代培养犬膀胱平滑肌细胞,倒置相差显微镜下观察细胞的生长情况,透射电镜观察细胞的超微结构,免疫组织化学染色进行细胞鉴定。将犬膀胱平滑肌细胞接种到SIS支架材料上,于复合培养5、7及9d取材,行苏木素染色、石蜡切片HE染色和扫描电镜观察膀胱平滑肌细胞在SIS上的生长状况。以细胞-SIS复合培养组为实验组,以膀胱平滑肌细胞为对照组,每组各设9孔,分别于接种后3、5及7d取材,酶消化后收集细胞并计数。结果酶消化法原代培养获取犬膀胱平滑肌细胞数量多,细胞生长速度快,形态良好,培养5d细胞在培养瓶底生长汇合。组织块培养法接种3d见长梭形的膀胱平滑肌细胞从植块边缘萌出,获取的细胞数量较少。透射电镜下见膀胱平滑肌细胞胞质中有特征性细肌丝和细胞膜的密斑。抗α-肌动蛋白免疫组织化学染色胞浆呈棕黄色阳性反应。膀胱平滑肌细胞在SIS表面能黏附、生长和增殖。体外复合培养5d后,膀胱平滑肌细胞铺满SIS表面,呈单层细胞结构。7、9d细胞形态与5d相似。实验组3、5及7d的细胞计数分别为(16.85±0.79)×105、(39.74±2.16)×105及(37.15±2.02)×105个,对照组分别为(19.43±0.54)×105、(34.50±1.85)×105及(33.07±1.31)×105个。两组5d细胞计数差异有统计学意义(P<0.05)。结论酶消化法原代培养膀胱平滑肌细胞可提供大量活性良好的种子细胞。SIS支持膀胱平滑肌细胞黏附和生长,可为构建组织工程膀胱平滑肌组织提供良好支架。

关键词：膀胱平滑肌细胞小肠黏膜下层体外培养犬

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生物技术的综合应用促进组织工程学发展

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中国修复重建外科杂志 2007年第2期21卷 107-109页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

生物技术、信息技术、纳米技术被誉为21世纪的科学支柱,将影响着世界各国的政治、经济、文化。其中的生物技术不仅与人们的日常生活、工作、健康密切相关,也与国家的经济发展及安全密切相关,因此世界各国政府均十分重视生物技术的发展... 详细信息

生物技术、信息技术、纳米技术被誉为21世纪的科学支柱,将影响着世界各国的政治、经济、文化。其中的生物技术不仅与人们的日常生活、工作、健康密切相关,也与国家的经济发展及安全密切相关,因此世界各国政府均十分重视生物技术的发展。我国政府成立了“国家生物技术研究开发与促进产业化领导小组”,具体领导全国的生物技术研究、开发及产业化。[第一段]

关键词：生物技术组织工程学经济发展领导小组信息技术纳米技术产业化世界

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生长板损伤修复的实验与临床研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第7期21卷 763-766页

作者：王建杨志明第三军医大学新桥医院骨科重庆400037 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程实验室

目的综述生长板损伤修复的研究进展。方法广泛查阅近期有关生长板损伤修复文献,介绍生长板损伤修复的主要方法,重点阐述应用组织工程方法修复生长板损伤。结果生长板损伤修复是小儿矫形外科实验研究和临床治疗面临的一大难题。游离生长... 详细信息

目的综述生长板损伤修复的研究进展。方法广泛查阅近期有关生长板损伤修复文献,介绍生长板损伤修复的主要方法,重点阐述应用组织工程方法修复生长板损伤。结果生长板损伤修复是小儿矫形外科实验研究和临床治疗面临的一大难题。游离生长板软骨移植,因缺乏血供而应用困难;血管化生长板移植解决了血循环问题,但是自体移植供体来源有限,异体移植存在免疫排斥;非软骨组织材料只能阻止小面积生长板缺损内骨桥形成,无再生修复能力。软骨细胞及组织工程软骨移植可能是生长板损伤修复的最佳选择。结论由于缺乏安全有效的生长板损伤修复方法,应进一步开展软骨细胞及组织工程软骨研究。

关键词：组织工程软骨生长板损伤修复

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不同方法制备生物衍生骨体内植入的组织学观察

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中国修复重建外科杂志 2007年第9期21卷 1003-1006页

作者：王杨李秀群黄云李次会解慧琪陈晓禾邓力李驯虎四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041 北京德得创业科技有限公司

目的探讨不同方法制备的生物衍生骨植入大耳白兔体内后的组织学变化,为组织工程研究提供异种动物源支架材料。方法取新鲜市售猪股骨两端,除去软组织及骨膜后切割为0.5cm×0.5cm×0.5cm大小骨块。根据不同处理方法分为5组:A组仅... 详细信息

目的探讨不同方法制备的生物衍生骨植入大耳白兔体内后的组织学变化,为组织工程研究提供异种动物源支架材料。方法取新鲜市售猪股骨两端,除去软组织及骨膜后切割为0.5cm×0.5cm×0.5cm大小骨块。根据不同处理方法分为5组:A组仅用生理盐水冲洗,B组经脱脂处理,C组经脱脂脱钙处理,D组经脱脂脱钙脱细胞处理,E组经脱脂脱细胞处理。取各组骨块行微量元素检测;经25kGy辐照灭菌后植入26只新西兰大耳白兔股部肌袋内,左侧植入A、B组骨块,右侧植入C、D及E组骨块,各肌袋植入1块。术后2、6及12周取材,作HE及Masson染色,行炎性细胞、破骨细胞计数,观察胶原纤维生成及成骨情况。结果各组骨块微量元素残留量符合标准。所有动物术后生存良好。各组实验兔植入部位均未见组织坏死、积液及化脓感染。炎性细胞计数以A组为最多,与其他各组比较差异有统计学意义(P<0.05);破骨细胞计数各组间差异无统计学意义(P>0.05)。HE及Masson染色观察,胶原纤维及新骨形成C、D组为最好,E组次之,A、B组最差。结论脱脂脱钙脱细胞处理的猪股骨有良好的降解性、成骨性及较低的炎性反应,有可能成为组织工程骨的支架材料。

关键词：组织工程骨猪源性材料组织相容性兔

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脐血间充质干细胞的分离扩增及向成骨及脂肪细胞的分化

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中国修复重建外科杂志 2007年第1期21卷 81-85页

作者：田新符仁义邓力智伟周晨燕郭霞朱易萍雷明雨李世均四川大学华西第二医院血液儿科成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都市儿童医院

目的探讨新生儿脐血间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）体外分离、纯化、扩增，以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件。方法无菌条件下收集新生儿脐血60～120ml，枸橼酸钠抗凝，以Ficoll—Hypaque淋巴细胞分离液密... 详细信息

目的探讨新生儿脐血间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）体外分离、纯化、扩增，以及向成骨及脂肪细胞定向诱导分化的方法与条件。方法无菌条件下收集新生儿脐血60～120ml，枸橼酸钠抗凝，以Ficoll—Hypaque淋巴细胞分离液密度梯度法、沉降红细胞后密度梯度法及CD34^＋免疫磁珠负选法分离单个核细胞（mononuclear cells，MNCs）。分离获得的MNCs采用L—DMEM培养基或Mesencult^TM培养基／10％胎牛血清进行MSCs培养传代，获得第3代集落生长细胞作流式细胞仪表面抗原测定，并向成骨及脂肪细胞定向诱导分化，成骨细胞钙沉积经茜素红染色鉴定，脂肪细胞胞浆油滴经油红染色鉴定。结果经沉降红细胞后分离的MNCs，使用Mesencult^TM培养基／10％胎牛血清培养成功率高，第3代可出现明显的集落生长，而另两种方法分离培养的细胞则难以形成集落；集落细胞表面抗原测定表达CD29、CD59、CD71而不表达CD34、CD45及HLA—DR等分子。成骨定向诱导分化的集落细胞经茜素红染色胞浆中出现有大量的钙沉积；成脂肪定向诱导分化的集落细胞油红染色示胞浆充满油滴空泡。结论新生儿脐血中可分离出MSCs，并可在体外进行培养扩增。以甲基纤维素沉降红细胞后密度梯度离心分离的MNCs培养较为有效，集落细胞表达基质细胞表面抗原，能够向成骨细胞及成脂肪细胞定向诱导分化。

关键词：新生儿脐血间充质干细胞诱导分化

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成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建及发挥调控作用

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中国修复重建外科杂志 2007年第5期21卷 517-522页

作者：智伟邓力杨志明李训虎李次会四川大学华西药学院成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室北京德得创业科技有限公司

目的对成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建并在其中发挥调控作用的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对成骨细胞作为骨髓造血微环境的主要成分、对破骨细胞、造血干细胞细胞周期和相关黏附因子,以及细胞因子的调控研究... 详细信息

目的对成骨细胞参与骨髓造血微环境的构建并在其中发挥调控作用的研究进展进行综述。方法广泛查阅近年国内外相关文献,对成骨细胞作为骨髓造血微环境的主要成分、对破骨细胞、造血干细胞细胞周期和相关黏附因子,以及细胞因子的调控研究进展进行回顾性总结与分析。结果成骨细胞是成熟个体中骨髓造血微环境的关键构成成分。成骨细胞通过细胞受体-配体的信号传导、细胞因子、细胞黏附及对其他参与构建骨髓造血微环境中的细胞的调控作用,将原始造血干细胞维持在静止状态,保持了其自我更新,多向分化的干细胞特性。结论对成骨细胞与骨髓造血微环境相互作用的进一步研究,为造血干细胞的临床移植应用提供了更好的理论基础。

关键词：成骨细胞骨髓造血微环境造血干细胞

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细胞-支架复合物体内植入修复肌腱缺损的研究与应用

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第40期11卷 8136-8139页

作者：刘程俊秦廷武杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

学术背景:肌腱损伤后传统的手术治疗虽然可以减轻患者的痛苦,但其功能重建结果往往不令人乐观。随着组织工程化肌腱的发展,利用组织工程技术修复肌腱缺损已成为一种新的治疗手段。目的:对种子细胞、支架材料、工程化肌腱的构建以及动物... 详细信息

学术背景:肌腱损伤后传统的手术治疗虽然可以减轻患者的痛苦,但其功能重建结果往往不令人乐观。随着组织工程化肌腱的发展,利用组织工程技术修复肌腱缺损已成为一种新的治疗手段。目的:对种子细胞、支架材料、工程化肌腱的构建以及动物实验的方法和检测等研究进展进行综述。检索策略:由作者应用计算机检索Medline,EBSCO以及google scholar引擎中1990-02/2007-05关于组织工程化肌腱的文献,检索词"tissue engineering,engineered tissue,tissue-engineered tendon,scaffold,implantation in vivo,seed cells",检索词被分别组合进行检索,限定文献语言种类为"English"。同时计算机检索维普数据库1990-02/2007-05关于细胞和支架材料的文献,检索词"组织工程,工程化组织,种子细胞,支架,体内植入,组织工程化肌腱",限定文献语言种类为中文。纳入标准:重点选取与构建组织工程化肌腱以及体内植入修复肌腱缺损相关的基础与临床研究。排除标准:关于配子、胚胎和组织工程化骨、血管等的文章。文献评价:①文献来源有RCT,循证医学系统综述、汇总分析、个例报道、经验交流。②共检索到214篇关于细胞和支架材料以及体内植入的文献,其中与本实验关系密切的文献14篇,间接相关45篇,最终纳入35篇符合标准的文献。资料综合:目前运用于组织工程化肌腱的种子细胞主要有间充质干细胞、胚胎干细胞和成纤维细胞,多用聚乳酸、聚羟基乙酸及二者的共聚物作为支架材料。在复合物的培养方面,提出细胞-支架材料复合物体外构建过程中引入动态的机械力牵拉,可使修复后的肌腱具有更好的生物力学强度。组织工程肌腱植入体内后的检测方法除大体观察和组织学检测外,其力学性能检测也是必要的,且分子生物学检测技术也越来越多的应用于研究中。结论:组织工程化肌腱可以成为一种较好修复临床肌腱损伤的方法,但需要探索最适的种子细胞、支架材料、培养条件以及植入体内后的检测方法。

关键词：组织工程化肌腱种子细胞支架体内植入综述文献

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玻璃化保存工程化组织产品的实验与技术

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第10期11卷 1900-1903页

作者：王治秦廷武杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041

目的:总结近年来玻璃化保存技术的新进展和多种工程化组织玻璃化保存的实验研究。探讨影响工程化组织低温保存的主要因素、评价指标等,以期指导玻璃化保存工程化组织的实验研究。资料来源:应用计算机检索Medline,EBSCO,ScienceDirect On... 详细信息

目的:总结近年来玻璃化保存技术的新进展和多种工程化组织玻璃化保存的实验研究。探讨影响工程化组织低温保存的主要因素、评价指标等,以期指导玻璃化保存工程化组织的实验研究。资料来源:应用计算机检索Medline,EBSCO,ScienceDirect Onsite以及google scholar引擎中1980-02/2006-05关于细胞和组织低温保存的文献,检索词“tissue engineering,engineered tissue,cryopreservation,vitrification,ice-free cryopreservation,vitreous cryopreservation”,检索词被分别组合进行检索,限定文献语言种类为English。同时计算机检索万方数据库1980-02/2006-05关于细胞和组织低温保存的文献,检索词“组织工程,工程化组织,冻存,玻璃化保存”,限定文献语言种类为中文。资料选择:对资料进行初审,选出与研究关系密切的文献。纳入标准:研究对象为动物或人,包括基础与临床研究内容。重点选取与玻璃化保存技术基本原理相关以及具体的工程化构建物玻璃化保存相关的文献。排除标准:关于配子,胚胎和植物,食品等的玻璃化保存文章。资料提炼:共检索到122篇关于细胞和组织低温保存的文献,其中与本实验关系密切的文献17篇,间接相关的文献42篇,最终纳入31篇符合标准的文献。资料综合:组织工程产业化要求长期而稳定的保存包含活细胞的工程化组织产品,以及产品中细胞与材料的黏附。相对于传统的低温冻存技术而言,玻璃化保存因在保存过程中无细胞内外冰晶形成,可以改善复温后的细胞活力,并能保护细胞和支架材料之间的黏附。本文从近年来玻璃化保存技术的新进展和多种工程化组织玻璃化保存的实验研究进行综述,分析了玻璃化保存液要求高浓度,对细胞有非特异毒性损伤,对悬浮单细胞的玻璃化保存能得到较高的细胞存活,而与支架材料结合的种子细胞存活除受到冻存试剂和流程的影响外还受到自身结构的影响。结论:玻璃化保存是较好的生物系统保存方法,可以为工程化组织产品提供可靠的保存,但急需发现新的低毒高效的玻璃化试剂以及优化保存流程。

关键词：组织工程玻璃化保存工程化组织细胞活力综述文献

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以生物衍生材料为支架的组织工程骨移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化

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中国修复重建外科杂志 2007年第2期21卷 130-134页

作者：李裕标杨志明秦廷武李秀群解放军第422医院广州军区创伤骨科中心广东湛江524005 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的检测体外构建的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化,对移植组织进行组织学观察,探讨以生物衍生材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞,经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体... 详细信息

目的检测体外构建的组织工程骨移植后兔外周血T细胞亚群的变化,对移植组织进行组织学观察,探讨以生物衍生材料作为骨组织工程支架材料的可行性。方法组织工程骨以兔骨膜来源的成骨细胞为种子细胞,经抗原自消化、部分脱钙、冻干后的异体骨为支架材料于体外构建。将健康新西兰白兔48只制成1cm长桡骨缺损模型后,随机分成A^D4组,每组12只,分别用部分脱钙冻干骨(partial demineralized freeze-dried bone,PDFDB)、组织工程骨、自体骨、同种异体骨植入兔桡骨节段性缺损。术后1、2、4周取材,用流式细胞仪检测4种材料移植早期兔外周血T淋巴细胞亚群的变化;通过常规组织学检测观察2、4、8、12周时4种材料的成骨作用。结果B组术后2周材料孔隙内有成骨细胞和成软骨细胞,可见骨、软骨混合性新生物形成,周边分布有破骨细胞,部分网架呈蚕食状被破坏吸收。术后4周,形成的新生骨过渡为编织骨。A、B组材料植入后1、2周外周血CD4+和CD8+T细胞较术前明显升高(P<0.05);术后4周CD4+T细胞较术前轻度偏高,但无统计学差异(P>0.05)。C组术后CD4+和CD8+T细胞升高不明显(P>0.05)。D组术后1、2、4周外周血CD4+和CD8+T细胞较术前及其他各组同期均明显增高(P<0.05)。结论PDFDB为支架材料构建的细胞-材料复合物移植后外周血T淋巴细胞增高,但不影响其良好的修复骨缺损能力,生物衍生骨可作为支架材料应用于骨组织工程研究。

关键词：组织工程骨 T淋巴细胞亚群成骨作用兔

来源：评论

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成肌分化因子和5-氮杂胞苷联合诱导骨髓间充质干细胞向骨骼肌细胞分化的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第12期21卷 1371-1375页

作者：孙占胜陈振强王伯珉张云峰冯震李连新穆卫东王永会王珍智伟王杨山东省立医院创伤骨科济南250021 聊城市人民医院骨科青岛市立医院骨科四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外定向分化为骨骼肌细胞的干预条件。方法取健康4周龄Wistar大鼠MSCs制成细胞悬液接种于培养瓶中,置于37℃、5%CO2恒温培养箱中培养,倒置相差显微镜下观察,细胞布满瓶底... 详细信息

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外定向分化为骨骼肌细胞的干预条件。方法取健康4周龄Wistar大鼠MSCs制成细胞悬液接种于培养瓶中,置于37℃、5%CO2恒温培养箱中培养,倒置相差显微镜下观察,细胞布满瓶底即为1代,取第3代MSCs,以5-氮杂胞苷10μmol/L、成肌分化因子0.1ng/ml、转化生长因子β10.1ng/ml、胰岛素样生长因子12ng/ml进行联合诱导,使之分化。诱导后第9天,收集细胞,行MTT比色法、流式细胞仪和免疫组织化学检测鉴定细胞。结果原代培养的MSCs呈贴壁生长,3～5d呈集落样生长,5～7d后有体积不等的多突成纤维细胞、较大的扁平多角形细胞、中等的多角形细胞和较小的三角形细胞。培养12d后,细胞融合,铺满瓶底,MSCs形态变化不明显。联合诱导后,部分细胞死亡,生长缓慢;7d后见细胞明显增殖,体积逐渐增大,呈椭圆形、梭形或不规则形状;14d后,大量增殖的长梭形细胞开始增多;18～22d后,肌管数量增多,体积增大,核数亦明显增多,初生肌管与长梭形成肌细胞呈平行排列,间隔分布。MSCs免疫组织化学法测定CD44反应阳性,胞质呈棕褐颗粒,核周明显,CD34呈阴性反应;诱导后MSCs结蛋白、骨骼肌特异肌球蛋白均为阳性表达。流式细胞仪测定MSCs和诱导后MSCs大部分处于G0/G1期,分别占79.4%、62.9%,而G2/S/M期仅占20.6%、36.1%。根据MTT绘制生长曲线,可见MSCs生长速度明显高于诱导后的MSCs。两种细胞并未达到平台期,都有继续增殖的趋势。结论在体外,MyoD、5-氮杂胞苷可以诱导MSCs向骨骼肌细胞定向分化,并伴有结蛋白和骨骼肌肌球蛋白阳性表达;定向诱导后MSCs增殖期比例大,向骨骼肌细胞分化纯度更高。

关键词：骨髓间充质干细胞 5-氮杂胞苷诱导分化骨骼肌细胞大鼠

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