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中国组织工程研究与临床康复 2007年第45期11卷 9031-9034页

作者：镐英杰王珍李秀群裴福兴郑州大学第一附属医院骨科河南省郑州市410052 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041 四川大学华西医院骨科

目的:一氧化氮在维持机体多个系统的生理功能中起重要作用,许多慢性疾病可造成一氧化氮产生减少,此时一氧化氮供体是一种必要的补充。观察一氧化氮外源性供体L-arginine对体外培养破骨细胞增殖及骨吸收功能的影响。方法:实验于2005-06/2... 详细信息

目的:一氧化氮在维持机体多个系统的生理功能中起重要作用,许多慢性疾病可造成一氧化氮产生减少,此时一氧化氮供体是一种必要的补充。观察一氧化氮外源性供体L-arginine对体外培养破骨细胞增殖及骨吸收功能的影响。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。选择出生1d的清洁级SD大鼠乳鼠,采用骨髓诱导法体外培养破骨细胞,培养液内分别加入0.3,0.6,1.0g/L不同浓度的L-arginine,并以等体积三蒸水作为对照。培养7d后,以抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察破骨细胞数目、形态,MIAS-2000图像分析仪检测骨片上骨吸收陷窝的数目和面积,并用扫描电镜观察不同浓度L-arginine对骨吸收陷窝的影响。结果:①破骨细胞的一般形态:破骨细胞较其他细胞大,形态不规则,呈油煎蛋形、长条形、腊肠形或漏斗形等,细胞内可见几个至几十个核不等。抗酒石酸酸性磷酸酶染色酶活性部分酒红色,颗粒状。②抗酒石酸酸性磷酸酶阳性细胞数:各组破骨细胞数目随着L-arginine浓度增加而减少(P<0.05)。③骨吸收陷窝的面积和数目:骨片培养7d,吸收陷窝计数的结果显示,0.3g/L以上浓度L-arginine对破骨细胞吸收功能均有明显抑制作用,并呈剂量相关性。0.3g/LL-arginine组陷窝面积为对照组的91%(P<0.05),0.6g/LL-arginine组为对照组的80%(P<0.05),1.0g/LL-arginine组为对照组的69%(P<0.01)。结论:采用骨髓诱导法培养的破骨细胞数量多、纯度高,且具有明显的骨吸收功能。L-arginine抑制破骨细胞增殖,抑制破骨细胞骨吸收功能,并呈剂量相关性。

关键词： L-arginine 破骨细胞一氧化氮骨吸收

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DMD的基因、细胞和药理学治疗研究进展

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国际生物医学工程杂志 2007年第4期30卷 230-235页

作者：张素珍杨志明解慧琪周光前四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室·干细胞与组织工程研究室成都610041

杜兴氏肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是一种X连锁隐性遗传的进行性肌萎缩疾病，主要由抗肌萎缩蛋白基因缺陷引起。抗肌萎缩蛋白是一种肌纤维膜结构蛋白，在维持肌细胞膜结构完整性中起重要作用。目前此疾病的治疗手... 详细信息

杜兴氏肌营养不良（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是一种X连锁隐性遗传的进行性肌萎缩疾病，主要由抗肌萎缩蛋白基因缺陷引起。抗肌萎缩蛋白是一种肌纤维膜结构蛋白，在维持肌细胞膜结构完整性中起重要作用。目前此疾病的治疗手段主要有基因治疗、细胞治疗和药理学治疗。针对疾病的根本原因，基因治疗和细胞治疗通过传递正常基因或修正突变基因以及移植正常细胞，如干细胞来进行治疗；药理学治疗则主要针对抗肌萎缩蛋白基因缺陷引起的下游事件，运用各种药物来减缓DMD病理进程．从而改善患者的生活质量．延长寿命。主要概述DMD治疗的最新讲展．并分析目前尚存存的问颢．

关键词：抗肌萎缩蛋白肌营养不良基因治疗细胞治疗药理学治疗

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大鼠成骨细胞增殖及护骨素蛋白含量与甲状旁腺激素的调节效应

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中国组织工程研究与临床康复 2007年第41期11卷 8234-8237页

作者：镐英杰王珍李秀群裴福兴郑州大学第一附属医院骨科河南省郑州市410052 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室四川省成都市610041 四川大学华西医院骨科

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细... 详细信息

目的:体外观察甲状旁腺激素对大鼠成骨细胞增殖和护骨素分泌的调节作用。方法:实验于2005-06/2006-05在四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室完成。采用酶消化法和骨组织块法联合分离培养新生SD大鼠颅骨成骨细胞,间歇加药方法将不同浓度0,10-6,10-7,10-8,10-9mol/L甲状旁腺激素作用于大鼠成骨细胞(0mol/L作为空白对照组),经碱性磷酸酶染色及钙结节茜素红染色证实培养的成骨细胞后,采用四甲基偶氮唑盐比色法检测细胞增殖能力,蛋白免疫印迹测定护骨素的分泌量。结果:①成骨细胞的形态变化:倒置相差显微镜下可见培养的成骨细胞呈短梭形、三角形和多边形。碱性磷酸酶染色光镜下可见成骨细胞胞浆中分布特征性蓝紫色细颗粒;成骨细胞的钙结节在镜下可见部分细胞聚集一起呈"集落状"生长。②成骨细胞增殖率:10-6～10-9mol/L浓度甲状旁腺激素对成骨细胞增殖均显示刺激作用,与空白对照组相比,差异显著(P<0.05),增殖率以10-8mol/L甲状旁腺激素组最高。③成骨细胞护骨素的表达:甲状旁腺激素下调成骨细胞中护骨素的分泌,与空白对照组相比,10-6mol/L甲状旁腺激素组抑制作用最明显(P<0.01),无显著剂量依赖性。结论:甲状旁腺激素对体外培养成骨细胞的增殖具有明显促进作用,通过下调成骨细胞中护骨素的分泌,促进破骨细胞生成、活化,促进骨吸收。

关键词：成骨细胞甲状旁腺激素护骨素 MTT

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细胞治疗对脊髓前角运动神经元保护作用的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第5期21卷 497-501页

作者：刘明辉杨志明唐洁金连宏贾继峰李秀群哈尔滨医科大学附属第一临床医院创伤外科哈尔滨150001 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室西南科技大学生命科学与工程学院黑龙江省卫生厅

目的研究注射不同的异体细胞于大鼠失神经靶肌肉对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法雌性6周龄SD大鼠36只,体重120～150g;随机分为四组,每组9只。无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合。术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,7d... 详细信息

目的研究注射不同的异体细胞于大鼠失神经靶肌肉对脊髓前角运动神经元的保护作用。方法雌性6周龄SD大鼠36只,体重120～150g;随机分为四组,每组9只。无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合。术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,7d注射1次,共4次。A组注射1×106/ml单纯雪旺细胞1ml、B组注射1×106/ml雪旺细胞加成肌细胞1ml(雪旺细胞∶成肌细胞为1∶1)、C组注射1×106/ml混合细胞提取液1ml(雪旺细胞∶成肌细胞∶肾内皮细胞为1∶1∶1)、D组无血清培养液1ml作对照。术后3个月进行脊髓前角运动神经元内C-Jun表达及酶组织化学观察。结果术后3个月,A、B及C组的C-Jun阳性表达脊髓前角运动神经元的形态均较D组好,神经元数目明显多于D组。各组脊髓前角运动神经元内C-Jun活性表达:A组128.591±0.766,B组116.729±0.778,C组100.071±2.017,D组144.648±2.083;D组与A、B及C组比较,差异有统计学意义(P<0.01);A、B组间及B、C组间比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。脊髓前角运动神经元内酶组织化学观察:A、B及C组神经元胞体轮廓清楚,胞体饱满,D组神经元胞体轮廓模糊,胞浆和细胞核界限不清晰。各组脊髓前角运动神经元酶活性比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论雪旺细胞、雪旺细胞加成肌细胞、混合细胞提取液均有保护脊髓前角运动神经元的作用,混合细胞提取液优于雪旺细胞及雪旺细胞加成肌细胞。

关键词：雪旺细胞成肌细胞肾内皮细胞运动神经元脊髓前角

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细胞治疗促进周围神经再生的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2007年第6期21卷 571-576页

作者：刘明辉杨志明金连宏贾继峰李秀群唐洁哈尔滨医科大学附属第一临床医院创伤外科哈尔滨150001 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室西南科技大学生命科学与工程学院黑龙江省卫生厅

目的研究注射异体不同细胞于大鼠失神经靶肌肉,对神经再生的促进及防止运动终板变性、促进肌肉功能恢复的作用。方法取1周龄SD乳鼠400只,体重20.0±2.3g,制备雪旺细胞、成肌细胞和肾内皮细胞。将SD成年雌性大鼠36只,体重120～150g,... 详细信息

目的研究注射异体不同细胞于大鼠失神经靶肌肉,对神经再生的促进及防止运动终板变性、促进肌肉功能恢复的作用。方法取1周龄SD乳鼠400只,体重20.0±2.3g,制备雪旺细胞、成肌细胞和肾内皮细胞。将SD成年雌性大鼠36只,体重120～150g,随机分为四组,每组9只。无菌条件下切断左侧坐骨神经,一期神经外膜缝合。术后即于小腿三头肌处注射相应细胞,每7天注射1次,共4次。A组注射1×106/ml单纯雪旺细胞1ml,B组注射1×106/ml雪旺细胞加成肌细胞1ml（雪旺细胞∶成肌细胞为1∶1）,C组注射1×106/ml混合细胞提取液1ml（雪旺细胞∶成肌细胞∶肾内皮细胞为1∶1∶1）,D组注射无血清培养液1ml作对照。术后行大体观察,术后3个月取材行靶肌肉的组织形态学观察,行单位面积运动终板个数检测、单位面积靶肌肉Actin阳性肌纤维个数检测,以及酶组织化学观察。于神经缝合口近、远端检测神经鞘细胞密度和再生神经纤维面积的观察。结果术后1~3个月A、B、C组大鼠患肢由不同程度的足踝部溃疡逐渐愈合,肿胀消退,恢复正常行走;D组患侧下肢肌肉萎缩,足踝溃疡、肿胀,足趾挛缩明显,拖行。术后3个月,单位面积靶肌肉运动终板个数、Actin阳性细胞数、失神经肌肉各种酶活性和再生神经的组织学改变,C组优于A、B组（P〈0.01）。A、B、C组实验结果均明显优于D组（P〈0.01）。结论雪旺细胞、雪旺细胞加成肌细胞、混合细胞提取液均有促进神经再生及防止运动终板变性、促进肌肉功能恢复的作用,混合细胞提取液作用优于雪旺细胞及雪旺细胞加成肌细胞移植。

关键词：雪旺细胞成肌细胞肾内皮细胞靶肌肉注射周围神经再生

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可溶性HLA-G1与NK-92细胞表面ILT2及KIR2DL4受体相互作用的研究

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中国医药生物技术 2007年第6期2卷 428-434页

作者：韦娇张海泉鱼艳荣 Muti-Ur-Rehman Khan 汪蕴邓力丰美福四川大学华西药学院药物化学教研室成都610041 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室中国科学院动物研究所生物膜与膜生物工程国家重点实验室

目的探讨可溶性HLA-G1(sHLA-G1)对人NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系。方法①通过原核表达技术获得sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进... 详细信息

目的探讨可溶性HLA-G1(sHLA-G1)对人NK-92细胞杀伤活性的抑制与细胞表面免疫球蛋白样转录分子2(ILT2)和杀伤细胞免疫球蛋白样受体2DL4(KIR2DL4)受体的关系。方法①通过原核表达技术获得sHLA-G1重组蛋白(重组蛋白),并采用蛋白质印迹法进行鉴定。②取NK-92细胞,加入终浓度20μg/ml的重组蛋白分别培养10、30min,再分别加入抗HLA-G1/G5、抗ILT2和抗KIR2DL4抗体,采用流式细胞术检测各组NK-92细胞表面sHLA-G1和ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率;以NK-92细胞单独培养作为对照组。③以人白血病K562细胞为靶细胞,以经不同方式处理的NK-92细胞为效应细胞,效靶比为5:1,共同培养2h,采用流式细胞术检测NK-92细胞对K562细胞的杀伤率。NK-92细胞处理方式为单纯重组蛋白处理(分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30min)和表面受体封闭+重组蛋白处理(分别加入抗ILT2、抗KIR2DL4、抗LT2+抗KIR2DL4抗体培养30min,再分别加入终浓度为0、10、20μg/ml的重组蛋白培养30min)。结果①蛋白质印迹分析表明所获重组蛋白为带有组氨酸标签的特异蛋白。②NK-92细胞与20μg/ml重组蛋白共培养30min后,sHLA-G1表达阳性率明显高于而ILT2、KIR2DL4受体表达阳性率均明显低于对照组(均P<0.05)。③以终浓度0、10、20μg/ml的重组蛋白处理的NK-92细胞对K562细胞的杀伤率分别为39.79%±2.00%、27.79%±0.75%、21.36%±0.67%(两两比较,均P<0.01);单独封闭ILT2受体,杀伤率分别为23.09%±1.63%、21.13%±0.38%、18.42%±0.47%(两两比较,均P<0.01);单独封闭KIR2DL4受体,杀伤率分别为30.74%±0.44%、26.03%±0.38%、21.15%±0.35%(两两比较,均P<0.01)。结论sHLA-G1通过与NK-92细胞表面ILT2和KIR2DL4受体直接结合而抑制NK-92细胞的杀伤活性。

关键词： HLA抗原杀伤细胞,天然受体,细胞表面重组融合蛋白质类

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左旋精氨酸对大鼠成骨细胞的影响

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中华实验外科杂志 2007年第9期24卷 1148-1148页

作者：镐英杰王珍李秀群裴福兴郑州大学第一附属医院骨科 450052 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室干细胞与组织工程研究室四川大学华西医院骨科

一氧化氮（NO）是一种可高度弥散的自由基。作为第2信使和神经递质，是细胞-细胞间信息传递的重要调节因子。NO可以调节成骨细胞（osteoblast，OB）的增殖及其功能活性，从而在维持骨形态和骨重建中起着重要作用。我们在以往实验基础上... 详细信息

一氧化氮（NO）是一种可高度弥散的自由基。作为第2信使和神经递质，是细胞-细胞间信息传递的重要调节因子。NO可以调节成骨细胞（osteoblast，OB）的增殖及其功能活性，从而在维持骨形态和骨重建中起着重要作用。我们在以往实验基础上，观察不同浓度的NO外源性供体左旋精氨酸（L—arginine）对大鼠OB增殖，护骨素（OPG）分泌及cNOS和iNOS表达的影响。

关键词：大鼠成骨细胞左旋精氨酸 iNOS表达细胞间信息传递调节因子一氧化氮神经递质第2信使

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修复重建外科的过去、现在与将来

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中国修复重建外科杂志 2006年第4期20卷 305-308页

作者：杨志明四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的阐述修复重建外科的发展历程,近20年的主要进展和未来的发展方向。方法查阅相关杂志、学术会议资料汇编和相关学术专著进行综合分析。结果修复重建外科伴随现代外科学应运而生。经过20年的发展,在骨折的生物固定、生物活性材料、干... 详细信息

目的阐述修复重建外科的发展历程,近20年的主要进展和未来的发展方向。方法查阅相关杂志、学术会议资料汇编和相关学术专著进行综合分析。结果修复重建外科伴随现代外科学应运而生。经过20年的发展,在骨折的生物固定、生物活性材料、干细胞、组织工程、生物活性因子、引导/诱导组织/器官再生等方面已取得显著进展。结论修复重建外科尚需在理论创新、技术创新、康复工程等方面进行更深入的研究。

关键词：修复重建外科进展

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羊膜的基础和临床应用研究进展

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中国修复重建外科杂志 2006年第1期20卷 65-68页

作者：范伟杰杨志明邓力罗静聪四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的总结近年来羊膜的基础及临床应用研究进展。方法广泛查阅国内外有关羊膜的基础和临床应用研究文献,总结其研究成果。结果羊膜来源广泛、价格便宜、对细胞相容性好、抗原性低,羊膜上皮层含有羊膜上皮细胞及多种生长因子,基底膜含有... 详细信息

目的总结近年来羊膜的基础及临床应用研究进展。方法广泛查阅国内外有关羊膜的基础和临床应用研究文献,总结其研究成果。结果羊膜来源广泛、价格便宜、对细胞相容性好、抗原性低,羊膜上皮层含有羊膜上皮细胞及多种生长因子,基底膜含有、、、、型胶原,纤维连接蛋白及糖蛋白,这些独特的结构使其对多种细胞生长有促进作用,羊膜已在眼科临床中得到广泛应用。结论使用羊膜不违背伦理,随着对羊膜的进一步深入研究,以及组织工程、生物工程对材料需求的进一步加大,其应用会更加广泛。

关键词：羊膜应用进展

来源：评论

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WO-1促进兔桡骨骨缺损修复的实验研究

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中国修复重建外科杂志 2006年第12期20卷 1240-1243页

作者：任永信杨志明解慧琪秦廷武李秀群四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室.干细胞与组织工程研究室成都610041

目的制作兔桡骨缺损模型，通过局部和全身用药了解WO-1对兔桡骨缺损修复的影响，并对其作用机制进行探讨。方法将新西兰大白兔36只，体重1．6～2．0kg；手术制作双侧桡骨缺损模型，并随机分为3组，A组：局部用药组，骨缺损处一次注射W... 详细信息

目的制作兔桡骨缺损模型，通过局部和全身用药了解WO-1对兔桡骨缺损修复的影响，并对其作用机制进行探讨。方法将新西兰大白兔36只，体重1．6～2．0kg；手术制作双侧桡骨缺损模型，并随机分为3组，A组：局部用药组，骨缺损处一次注射WO-1 50mg／ml，0．1ml；B组：口服给药组，每天WO-1 5mg灌胃至处死；C组：空白对照组，不予任何处理。分别于20、30和60d每组随机处死动物4只，行血清学、X线片和组织学检查。结果 A、B组碱性磷酸酶在20d分别为159．0±4．7U和174．3±13．2U，30d分别为130．0±8．0U和113．5±9．0U，均显著高于C组20d为95．8±23．1U，30d为88．3±21．1U；60dA组为65．3±6．2U、B组为42．0±7．0U，均显著低于C组116．0±3．9U，差异有统计学意义（P〈O．01）。A、B组血清骨钙素水平20d分别为11.4±3．8、14．3±2．7ng／ml和30d分别为7．3±0．3、10．4±3．2ng／ml均明显高于C组20d为6．1±0．8ng／ml，30d为5．8±0．2ng／ml；60d A组为4．2±1．2ng／ml，B组为4．4±0．9ng／ml，均显著低于C组13．9±1．3ng／ml，差异有统计学意义（P〈0．01）。20、30和60dX线片和组织学均显示，A、B组骨性愈合早于C组，而A组骨痂塑形早于B组。结论 WO-1可促进兔桡骨缺损的修复，其量效关系和给药时间、方式仍有待进一步研究。

关键词：组织工程 WO-1 桡骨缺损兔

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