检索结果-内蒙古大学图书馆

华西口腔医学杂志 2002年第6期20卷 404-407页

作者：龚浩李龙江温玉明王昌美陈俊杰彭文珍四川大学华西口腔医学院 610041 四川大学华西基础医学与法医学院分子生物学开放实验室

目的:制备615小鼠MHCⅠ目的基因(H-2Kk)载体,获得高表达MHCⅠ分子功能的单克隆细胞株。方法:将615小鼠MHCⅠ(H-2Kk)cDNA定向连接至PLXSN逆转录病毒质粒,转染*** JM109,限制性酶切分析法筛选出重组质粒PLXSN-H-2Kk,继而转染PA317细胞,经G... 详细信息

目的:制备615小鼠MHCⅠ目的基因(H-2Kk)载体,获得高表达MHCⅠ分子功能的单克隆细胞株。方法:将615小鼠MHCⅠ(H-2Kk)cDNA定向连接至PLXSN逆转录病毒质粒,转染*** JM109,限制性酶切分析法筛选出重组质粒PLXSN-H-2Kk,继而转染PA317细胞,经G418筛选获得抗性PA317单克隆细胞株,并转染NIH3T3细胞,依抗性NIH3T3细胞克隆数目,鉴定病毒液的滴度和PA317单克隆细胞株。结果:转染成功的病毒液滴度位于1.6×104～1.1×105 CFU/ml之间,PA317单克隆细胞株成片生长良好,并高表达H-2Kk产物。结论:H-2Kk cDNA重组逆转录病毒质粒的成功构建、包装和滴度鉴定为在615小鼠上进行恶性肿瘤的MHC Ⅰ转基因治疗奠定了物质基础。

关键词：基因治疗 MHCⅠ目的基因 PA317细胞基因载体重组逆转录病毒质粒肿瘤治疗

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简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

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四川大学学报（自然科学版） 2006年第2期43卷 435-440页

作者：王健琪翟朝阳孙剑四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室成都610041

从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表... 详细信息

从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.

关键词：简化的hPK-5 Kimgle环基因重组融和表达

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节律基因Clock干扰对小鼠精子受精能力的影响

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四川大学学报（医学版） 2008年第6期39卷 929-932页

作者：蒋小辉张路汪宇辉刘延友江舟王正荣四川大学华西基础医学与法医学院生物医学工程实验室成都610041 成都中医药大学第二临床医学院

目的通过干扰小鼠睾丸圆形精子期节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠精子受精能力的影响。方法小鼠睾丸注射Clock干扰质粒,Western Blotting检测注射后睾丸组织Clock表达的变化,体内实验观察注射干扰质粒前后引起雌鼠胎仔数变化,... 详细信息

目的通过干扰小鼠睾丸圆形精子期节律基因Clock的表达,研究Clock对雄性小鼠精子受精能力的影响。方法小鼠睾丸注射Clock干扰质粒,Western Blotting检测注射后睾丸组织Clock表达的变化,体内实验观察注射干扰质粒前后引起雌鼠胎仔数变化,体外实验观察精子数量、精子活力、体外受精率以及对顶体发育的影响。结果Clock干扰质粒使小鼠睾丸CLOCK蛋白的表达明显下调。体内实验结果显示注射Clock干扰质粒影响了雄性鼠致雌鼠的胎仔数,体外实验结果显示,虽然注射Clock干扰质粒后精子计数、精子活力无明显变化,但体外受精能力明显下降。顶体酶活性明显下降。结论节律基因Clock与雄性小鼠的生殖功能有密切的关系。节律基因Clock可能通过调节顶体酶活性来影响雄性小鼠精子的受精能力。

关键词： Clock基因圆形精子顶体顶体酶活性精子受精能力 RNA干扰

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转基因的完全沉默可能与逆转录病毒载体重组有关

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生物医学工程学杂志 2011年第2期28卷 342-346页

作者：王丹肖利佳马庆鑫翟芬任思冲李昌龙四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学教研室成都610041 泸州医学院07级临床医学专业泸州646100

转基因沉默是转基因基础研究和临床基因治疗应用研究中的两大障碍之一,本文以转导单拷贝逆转录病毒载体MGPN2的HT1080细胞克隆为研究模型,利用一系列分子生物学技术探索转基因沉默的机制,为构建高效表达转基因的载体提供帮助。结果显示... 详细信息

转基因沉默是转基因基础研究和临床基因治疗应用研究中的两大障碍之一,本文以转导单拷贝逆转录病毒载体MGPN2的HT1080细胞克隆为研究模型,利用一系列分子生物学技术探索转基因沉默的机制,为构建高效表达转基因的载体提供帮助。结果显示:在无GFP蛋白生成的115号细胞克隆中,载体的表观遗传修饰与其它克隆比没有明显变化,载体启动子能有效启动报告基因GFP的转录,但是转录本的大小和序列发生了显著改变,导致转录本阅读框改变。因此,除染色体位置效应引起转基因载体表观遗传修饰改变而导致转基因的沉默以外,逆转录病毒载体转录本阅读框的改变也可以引起转基因的完全沉默,这可能与载体自身重组有关。

关键词：逆转录病毒载体重组转基因基因沉默基因治疗

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热休克蛋白90抑制剂对TNFα诱导肿瘤细胞凋亡和调控NF-κB信号通路的影响

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四川大学学报（医学版） 2011年第3期42卷 303-307页

作者：钟应佳王霞郑雪莲颜有仪刘晓敏廖林川四川大学华西基础医学与法医学院毒物分析学教研室成都610041 四川大学华西第二医院西部妇幼研究院分子与转化医学实验室成都610041

目的探讨热休克蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)抑制剂17-di methylamino-ethylaminogeldanamycin(17DMAG)对肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的肿瘤细胞凋亡的影响及其作用机理。方法采用乳酸脱氢酶释放实验检测不同剂量的17DMAG与TNFα共培养对子宫颈癌细胞株HeLa和卵巢癌细胞株SKOV3的细胞毒作用,吖啶橙/溴化乙锭双重染色后荧光显微镜下观察17DMAG和TNFα共同处理所导致的细胞形态学改变,并采用Western blot检测细胞凋亡相关分子半胱天冬酶-8(caspase-8)、半胱天冬酶-3(caspase-3)、多聚(ADP-核糖)聚合酶〔poly(ADP-ribose)polymerase,PARP〕和TNFα诱导的核因子-κB(NF-κB)信号通路信号分子receptor-interaction protein(RIP)、IκB kinaseβ(IKKβ)、inhibitor of IκB(IκBα)的变化。结果 17DMAG可增强TNFα对HeLa细胞和SKOV3细胞的杀伤作用,17DMAG可抑制TNFα诱导的NF-κB信号通路中关键的信号分子RIP和IKKβ,阻断NF-κB的活化,增强TNFα诱导的外源性细胞凋亡。结论 17DMAG可通过抑制NF-κB信号通路增强TNFα诱导的肿瘤细胞凋亡,提高TNFα的抗肿瘤效率。

关键词：热休克蛋白90 17-dimethylamino-ethylaminogeldanamycin(17DMAG) TNFα NF-κB信号通路细胞凋亡

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NEU3对人前列腺癌DU145细胞生物学行为的影响

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中国病理生理杂志 2019年第2期35卷 305-310页

作者：王晨霄王梦秋李思冯颖马芳吴衣论王琳马学四川大学华西医院小儿泌尿外科四川大学华西第二医院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室四川大学华西基础医学与法医学院四川成都610041

目的:探讨神经氨酸酶3(NEU3)与人前列腺癌DU145细胞活力、侵袭和凋亡的关系,并探讨其分子机制。方法:体外培养人前列腺癌DU145细胞,并分为空白对照组和处理组,处理组再分别给予神经氨酸酶活性抑制剂DANA处理和RNA干扰靶向沉默NEU3,采用C... 详细信息

目的:探讨神经氨酸酶3(NEU3)与人前列腺癌DU145细胞活力、侵袭和凋亡的关系,并探讨其分子机制。方法:体外培养人前列腺癌DU145细胞,并分为空白对照组和处理组,处理组再分别给予神经氨酸酶活性抑制剂DANA处理和RNA干扰靶向沉默NEU3,采用CCK-8法检测细胞的活力;Transwell法检测细胞侵袭能力;q PCR法检测2种处理方式对凋亡抑制蛋白Bcl-2 mRNA水平的影响;Western blot法检测2种处理方式对NEU3、基质金属蛋白酶2(MMP2)和Bcl-2表达的影响;流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,DANA处理后前列腺癌细胞的NEU3表达无明显变化,细胞活力增强,MMP2蛋白表达减少,侵袭力减弱,凋亡无明显变化,Bcl-2的mRNA和蛋白表达减少(P <0.05);NEU3沉默后NEU3蛋白表达减少,细胞活力增强,MMP2蛋白表达和细胞侵袭力无明显变化,凋亡能力增强,Bcl-2的mRNA和蛋白表达均下降(P <0.05)。结论:抑制NEU3可以减弱人前列腺癌DU145细胞活力,增强细胞凋亡能力,但对侵袭能力无明显影响。

关键词：神经氨酸酶3 细胞侵袭细胞凋亡细胞活力前列腺癌

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EB病毒GST-Rta融合蛋白的表达、纯化及其多克隆抗体的制备

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四川大学学报（医学版） 2005年第5期36卷 665-667,699页

作者：徐永春梁伟波苟航陈文婕朱银华贾静张林四川大学华西基础医学与法医学院法医物证学教研室成都610041 四川大学华西医院教育部人类疾病生物治疗重点实验室

目的表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶(GST)-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体。方法质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用Gl... 详细信息

目的表达和纯化EB病毒的重组融合蛋白谷胱氨肽S转移酶(GST)-Rta185和GST-Rta150,并制备特异性多克隆抗体。方法质粒表达载体pGEX-R185I、pGEX-R150I和pGEX-5X-3分别转入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导表达,用GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化目的蛋白。将纯化后的GST-R185、GST-R150和GST蛋白免疫新西兰大白兔制备抗血清。结果在细菌裂解液中检测到高表达量的融合蛋白,经GlutathioneSepharose4B亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-Rta融合蛋白。应用Westernblot和ELISA方法检测证实,用纯化的GST-Rta蛋白免疫家兔得到了特异性的多克隆抗体。结论通过上述方法制备出来的融合蛋白纯度较高,免疫家兔获得的多克隆抗体具有良好的特异性,为研究EB病毒Rta蛋白及与EB病毒相关疾病的诊断和治疗提供了重要的条件。

关键词：融合蛋白亲和层析多克隆抗体 EB病毒

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花椒挥发油在体外对低密度脂蛋白氧化的影响

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四川大学学报（医学版） 2006年第1期37卷 63-65页

作者：马建旸石应康方定志四川大学华西医院胸心血管外科成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院分子生物学开放实验室

目的探讨花椒挥发油能否对抗脂蛋白的氧化。方法采用CU2+介导正常人低密度脂蛋白(LDL)的氧化反应,应用硫代巴比妥酸法测定LDL氧化过程中硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)的变化,采用琼脂糖凝胶电泳测定氧化型低密度脂蛋白的相对电泳迁移率(R... 详细信息

目的探讨花椒挥发油能否对抗脂蛋白的氧化。方法采用CU2+介导正常人低密度脂蛋白(LDL)的氧化反应,应用硫代巴比妥酸法测定LDL氧化过程中硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)的变化,采用琼脂糖凝胶电泳测定氧化型低密度脂蛋白的相对电泳迁移率(REM)的变化。结果40MG/ML的花椒挥发油对CU2+介导LDL氧化修饰时TBARS与REM的差异有统计学意义(P<0.01)。未加花椒挥发油的对照组LDL氧化反应延滞期为1H,在2~4H后TBARS值进入快速增长期,于24H达到高峰并趋于稳定;而在花椒挥发油组(40MG/ML组),LDL的氧化反应延滞期延长到4H左右,快速增长期延长到6~8H;但TBARS最大值无明显降低。结论花椒挥发油能够在体外对抗CU2+介导LDL的氧化修饰。

关键词：花椒挥发油氧化剂抗氧化剂低密度脂蛋白硫代巴比妥酸反应物质

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辐射诱导的大鼠放射性食管炎的蛋白质组学分析

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中华放射医学与防护杂志 2024年第9期44卷 725-733页

作者：张月华刘杭丰张舒羽杜梦洁蒙晓晨涂文玲成都医学院第二附属医院核工业四一六医院成都610051 四川大学华西第二医院放射医学实验室成都610041 四川大学华西基础医学与法医学院放射医学研究室成都610041

目的利用定量蛋白组学研究电离辐射对大鼠食管组织中蛋白表达谱的影响,揭示放射性食管炎发生发展潜在的分子机制。方法将24只雄性SD大鼠按简单随机化方法分为对照组、25 Gy照射组和35 Gy照射组,每组8只。照射后7 d收集食管组织提取总蛋... 详细信息

目的利用定量蛋白组学研究电离辐射对大鼠食管组织中蛋白表达谱的影响,揭示放射性食管炎发生发展潜在的分子机制。方法将24只雄性SD大鼠按简单随机化方法分为对照组、25 Gy照射组和35 Gy照射组,每组8只。照射后7 d收集食管组织提取总蛋白。通过串联质谱标签(TMT)标记定量蛋白质组学技术和生物信息学分析方法,探究大鼠受照后食管组织蛋白表达谱的变化。利用免疫组织化学法和Western blot法对两个关键蛋白Hp和Ndufs4的表达进行验证。结果与对照组相比,25 Gy照射后共有847个差异表达蛋白(上调483个,下调364个),35 Gy照射后共有699个差异表达蛋白(上调443个,下调256个)。不同剂量照射后共同上调的蛋白有326个,主要涉及免疫反应和炎症反应相关的生物学过程和信号通路;共同下调的蛋白有210个,主要涉及能量产生和代谢相关的生物学过程和信号通路。进一步通过蛋白互作(PPI)网络构建,筛选出节点蛋白共155个,其中上调节点蛋白最相关的功能途径分别是先天性免疫应答、补体和凝血级联以及先天性免疫系统,下调节点蛋白最相关的功能途径分别是通过氧化有机化合物获得能量、氧化磷酸化以及三羧酸(TCA)循环和呼吸电子传递。这些功能分别富集到9个补体相关的上调节点蛋白和5个线粒体相关的下调节点蛋白。电离辐射后,Hp蛋白表达显著上调(t=27.94、10.96,P<0.001),Ndufs4蛋白表达显著下调(t=59.27、54.07,P<0.001),与蛋白测序结果一致。结论电离辐射可引起大鼠食管组织中蛋白表达谱的改变,这些差异表达的蛋白涉及到多种免疫过程、炎症反应和能量代谢异常等放射生物学相关的功能通路。筛选验证的关键蛋白可以为放射性食管炎提供潜在的生物标志物。

关键词：放射性食管炎串联质谱标签标记定量蛋白质组学功能富集分析差异蛋白

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CSPG2和HSPG2基因单核苷酸多态性与中国汉族人颅内动脉瘤的相关性研究

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中华医学遗传学杂志 2013年第2期30卷 218-221页

作者：朱雄石毅鲁芳黄光富胡丽娟四川大学华西基础医学与法医学院成都610041 四川省人民医院人类疾病基因研究四川省重点实验室

目的分析CSPG2和HSPG2基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）与中国汉族散发颅内动脉瘤的相关性。方法采用病例一对照关联研究方法，收集颅内动脉瘤患者537例以及年龄和性别匹配的正常对照1071名的外周血样各5mL... 详细信息

目的分析CSPG2和HSPG2基因单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）与中国汉族散发颅内动脉瘤的相关性。方法采用病例一对照关联研究方法，收集颅内动脉瘤患者537例以及年龄和性别匹配的正常对照1071名的外周血样各5mL并提取基因DNA。通过聚合酶链式反应扩增目的DNA，用单碱基延伸（SNaPshot）法进行SNP分型。选取文献报道的CSPG2和HSPG2基因的两个标签SNPs位点rs251124和rs3767137，分析其与汉族散发颅内动脉瘤发病的关联性。结果CSPG2和HSPG2基因的两个标签SNPs位点rs251124和rs3767137的基因型均满足Hardy-Weinberg平衡。CSPG2rs251124的等位基因频率在患者组与对照组之间差异无统计学意义（P=0．22）；HSPG2rs3767137的等位基因频率在两组之间亦差异无统计学意义（P=0．26），但其相应的OR值大于1（OR=1．12；95％CI=0．92～1．37）。患者组与对照组rs251124、rs3767137的基因型频率均差异无统计学意义（P=0．46，0．53）。结论未发现CSPG2和HSPG2基因rs251124、rs3767137SNPs与中国人颅内动脉瘤发病的相关性。

关键词： CSPG2基因 HSPG2基因单核苷酸多态性颅内动脉瘤

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